新城疫弱毒疫苗La Sota株对血清4型禽腺病毒致病作用的影响研究

Ⅰ群血清4型禽腺病毒(FAdV-4)是常见的家禽垂直传播性病毒,感染鸡后可导致心包积液综合征。在生产中,先天感染FAdV-4的雏鸡免疫La Sota疫苗时会明显加重病情,因此我们推测新城疫弱毒疫苗的免疫具有加重或诱发和垂直传播感染的FAdV-4的致病作用。本研究随机选择50枚SPF鸡胚通过卵黄囊接种来模拟FAdV-4先天性感染,同时以接种生理盐水SPF鸡胚作为对照。待孵化出雏后,接毒组和对照组各取20只7日龄SPF鸡免疫新城疫Ⅳ系弱毒疫苗(La Sota株),同时各组其余鸡以相同方式接种等量PBS作为对照。结果显示:FAdV-4感染的雏鸡在免疫La Sota株后更容易发生严重的生长抑制和免疫器官损伤,说明免疫La Sota株能显著增强FAdV-4致病性。本研究结果显示,免疫弱毒疫苗La Sota增强了垂直传播感染的FAdV-4致病性,提示家禽养殖业种源净化的重要性。     

鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗对新城疫La Sota疫苗免疫效果的影响

用鸡传染性法氏囊病(IBD)免疫复合物疫苗免疫1日龄SPF雏鸡和普通京粉雏鸡,间隔1、2周后免疫新城疫La Sota疫苗,以单独免疫新城疫La Sota疫苗为对照,免疫后2、3、4和5周对各组鸡采血测定新城疫HI效价,并在免疫5周后用新城疫强毒攻击,计算各组保护率。结果显示,1日龄时首免IBD免疫复合物疫苗间隔不同时间再免疫新城疫La Sota疫苗,与单独免疫新城疫La Sota疫苗相比,新城疫HI抗体水平均无显著差异(P0.05)。证明IBD免疫复合物疫苗在SPF雏鸡和普通雏鸡上对新城疫La Sota疫苗免疫均无免疫抑制作用。     

鸡新城疫病毒的分离鉴定与交叉免疫保护试验

为了评价疫苗免疫保护效果,进而筛选出最佳的免疫方案,将分离到的鸡新城疫病毒(Newcas-tle disease virus,NDV)流行毒株制备成灭活疫苗进行交叉免疫保护试验研究。把采集到的疑似发生新城疫的病鸡肺、气管环等组织经处理后接种10日龄SPF鸡胚进行病毒的分离和增殖,并用血清学和分子生物学方法进行毒株的鉴定;用分离到的NDV/Chicken/TC/1/2011毒株制成油乳剂灭活苗,与La Sota疫苗以不同的疫苗组合免疫SPF鸡,进行交叉免疫保护试验。结果显示,共分离到9株新城疫病毒,其F蛋白裂解位点的氨基酸均为112 R-R-Q-K-R-F117,表现为强毒株的分子特征,与致病指数结果一致。分离株灭活苗组和分离株灭活苗+La Sota弱毒苗对试验鸡的免疫保护力最高,其次是La Sota灭活苗+La Sota弱毒苗和LaSota灭活苗,La Sota弱毒苗对试验鸡的免疫保护力最低。NDV分离株与疫苗株La Sota存在明显抗原性差异,这将对新城疫疫苗的发展和疾病控制策略制定至关重要。     

新城疫La Sota疫苗对山东分离株的免疫保护试验

用标准疫苗株La Sota活疫苗在隔离器中接种SPF鸡,进行免疫保护试验.免疫后,每7 d采血监测NDV抗体,免疫后2周,利用经过鉴定的新城疫病毒(NDV)潍坊毒SGM01、昌乐毒SCL03、东营毒HY、日照毒SRZ03、莘县毒SSX03和标准强度F48E9分别进行攻毒试验,同时设SPF鸡对照.每天观察,及时剖检发病鸡,检查鸡群病变,确定疫苗的保护性.结果表明,La Sota疫苗能对除SGM01和HY以外的病毒攻击的SPF鸡提供较好的保护.     

新城疫克隆—83疫苗对雏鸡的安全和免疫试验

新城疫克隆-83疫苗对3日龄易感雏鸡是安全的;对一周龄雏鸡的免疫效力明显地优于La Sota和B_1疫苗;免疫后七个半月的鸡,HI抗体效价仍持续在2~4以上,用强毒攻击可获100％保护;对不同日龄、品种和HI抗体水平的鸡群,用气雾、注射和滴鼻的方法进行小区域见疫试验证明该疫苗安全有效,同时也表明,克隆-83疫苗的毒力弱于La Sota疫苗,是一株较为理想的新城疫弱毒疫苗株。     

新城疫分离株免疫保护试验

对经过鉴定的新城疫病毒(NDV)分离株，按国家兽医生物制品质量标准制备油乳剂灭活疫苗，在隔离器中接种SPF鸡，设标准La Sota疫苗株作对照，进行免疫保护实验。免疫后，每7d采血监测NDV抗体。免疫后3周，利用ND强毒分离毒和F48E。分别进行交叉攻毒实验，同时设SPF鸡对照。每天观察，及时剖检发病鸡，检察鸡群病变，以确定疫苗的保护性，以便对常规生产中的免疫失败进行原因分析。     

鸡新城疫-传染性支气管炎二联油乳剂苗的研制

以NDV La Sota株，IBV呼吸道型H120株和肾型SN9301株为制苗毒株，病毒经鸡胚繁殖后甲醛灭活，灭活毒液依毒价按比例混合加入油佐剂中，乳化制成ND—IB二联油乳剂疫苗。对该疫苗的安全性、稳定性和免疫效果等进行了测定。结果表明：疫苗安全稳定，物理性状良好；将该苗与相应弱毒苗配合用于雏鸡首免，可获得稳定的免疫保护；单用该苗给雏鸡首免，或用相应弱毒苗免疫雏鸡，免疫效果均较差。     

鸡传染性法氏囊病病毒超强株VP2基因重组新城疫病毒胚胎免疫安全性及效力试验

为研制能够同时预防传染性法氏囊病(IBD)和新城疫(ND)的疫苗,本研究选用表达IBD病毒(IBDV)超强毒株(vvIBDV)VP2基因的重组ND病毒(NDV)LaSota疫苗株(rL-VP2),测定其半数鸡胚感染量、平均鸡胚致死时间、脑内接种指数和静脉内致病指数等指标,按不同剂量接种18胚龄SPF鸡胚,分别于出雏后第9d、第14d和第21d采血,用微量凝集法和ELISA方法测定血清中抗NDV抗体和抗IBDV抗体水平,并于出雏后28d用NDV强毒(F48E9株)和vvIBDVGx株攻毒,评估重组疫苗的胚胎免疫效果。结果显示:按104EID50/枚剂量进行免疫不会影响SPF鸡胚出雏率和出雏后21d存活率,并且该免疫组雏鸡能够对NDV强毒和vvIBDV攻毒提供安全的免疫保护。     

ND La Sota毒种在SPF鸡胚中增殖规律初探

为了探索ND La Sota弱毒株在SPF鸡胚中的增殖规律,保证生产用种毒的质量,我们采用不同的时间段来收获ND La Sota弱毒株感染的胚液,然后测定胚液的EID50。结果发现,SP鸡胚在接种病毒后85~100h之间出现死亡高峰期,经病毒含量测定,该时段感染胚液比其他时间死亡的感染胚液病毒含量高出1.5~6倍以上,表明ND La Sota弱毒株的增殖高峰与SPF鸡胚接种后的死亡时间有重要关系。     

新城疫病毒La Sota株和鸡传染性支气管炎病毒M41株低免疫鸡胚同胚培养研究

为研究新城疫病毒(NDV)La Sota株和鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41株在低免疫鸡胚中进行同胚接种培养的可行性,通过将不同稀释倍数的La Sota株和M41株接种同一低免疫鸡胚,分别测定收获尿囊液La Sota株和M41株含量,确定最佳的稀释倍数以及适宜的培养温度和培养时间。结果显示:La Sota株和M41株以10 000∶5 000的比例稀释,培养96 h病毒含量和收获量最佳,La Sota株含量可达到109.17EID50/0.1 m L,HA效价为1∶1 024,M41株含量可达到106.50EID50/0.1 m L。接种后孵育温度为36.5℃时,每胚收获量比37℃培养增加了1.0～1.2 m L。按照此工艺生产病毒制备疫苗免疫SPF鸡,NDV和IBV抗体均符合国家标准要求。试验探索并优化了La Sota株和M41株在低免疫鸡胚中同胚接种的培养条件,为大规模抗原生产提供数据支持。     

新城疫病毒弱毒株对鹅的免疫效力试验

用新城疫病毒(NDV)疫苗株La Sota和NDV基因Ⅶ型致弱株AND/Ⅶ为免疫原,分别以活苗和灭活苗的形式免疫2周龄试验鹅,免疫后第7、14天和21天采血分离血清用于抗体效价测定.免疫后3周以基因Ⅶ型强毒分离株JS2-06进行攻毒,攻毒后每天观察各组鹅的发病情况,并于第2、4天和7天分别采集喉气管和泄殖腔棉拭样品,用于病毒的分离.试验结果表明,活疫苗免疫后不能产生有效的免疫应答,而灭活苗免疫鹅对强毒的感染具有较强的抵抗能力,但基因Ⅶ型致弱株AND/Ⅶ能更有效抑制鹅体的排毒,其免疫效力明显高于疫苗株La Sota.     

一株Ⅶb型新城疫病毒的生物学特性研究

本研究对2013年新分离的一株鸡源新城疫病毒(NDV)(P1125)进行了致病指数测定、F基因测序和遗传进化分析,并对La Sota疫苗免疫的保护效力进行了评价。结果显示,该分离株致死鸡胚平均死亡时间为44 h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数为1.988,6周龄雏鸡静脉接种致病指数为2.71。F基因测序表明其编码区长度为1 662 bp,共编码553个氨基酸,F基因裂解位点氨基酸序列为112R-R-Q-K-R-F117,具有NDV强毒典型的分子特征,HN蛋白由571个氨基酸残基组成,属于C类NDV,表明该分离株为强毒株。遗传进化分析表明该分离株属于Ⅶb亚型。同源性分析显示该分离株与La Sota氨基酸相似率为88.4%。免疫保护试验表明,La Sota灭活疫苗能够对该分离株标准剂量攻击提供临床保护,但在攻毒1 d、3 d、5 d后均可以检测到排毒现象。本研究为研制专门针对我国流行株的新城疫新型疫苗及我国新城疫的防控具有重要意义。     

ClassⅠ/Ⅱ新城疫弱毒株诱导SPF鸡免疫损伤及黏膜免疫应答的比较分析

为了比较Class Ⅰ新城疫弱毒JS10株和Class Ⅱ新城疫弱毒La Sota株免疫雏鸡后的免疫损伤和黏膜应答情况。本研究将60只SPF白来航鸡,随机分成A、B、C 3组。7日龄时,A组和B组分别用JS10株和La Sota株进行滴鼻、点眼免疫,C组以同样方式接种PBS,并于免疫后的d1、4、7、14,每组随机抽取5只扑杀,分别收集唾液、气管、肺和肠的冲洗液,使用双夹心ELISA试剂盒测定SIgA、IgM和IgY的抗体水平。结果显示,2株病毒均未产生免疫损伤;JS10株产生的黏膜抗体水平均高于La Sota株,并且免疫后的d7、14的唾液、气管和肠冲洗液中的SIgA的抗体水平以及肺中IgY抗体水平均显著高于La Sota(p0.05)。研究表明,2株新城疫弱毒滴鼻、点眼后都能诱导消化道和呼吸道产生强烈的黏膜免疫反应,并且与免疫后的日龄存在明显相关性。由于JS10株可诱导更好的黏膜免疫应答,提示其可作为新型新城疫弱毒疫苗的候选株。     

鸡新城疫病毒分离鉴定及鸡胚免疫的方法研究

为了研究本地NDV毒力情况以及建立鸡胚免疫的方法,通过在山西地区采集病料,对病料通过PCR鉴定后应用SPF鸡胚繁殖,而后对其毒力相关的F基因进行扩增和序列分析。对其进行生物学毒力测定,并进行了动物回归试验。测定病毒效价,并将其稀释至不同的效价水平,接种于SPF鸡胚,进行鸡胚免疫方法的研究。结果,成功分离到1株NDV。其与Clone30、La Sota等株的同源性较高,与VG/GA、Clone30和La Sota等毒株位于同一个分支,亲缘关系最近,属于Ⅱ型弱毒株病毒。生物学毒力测定结果 MDT、IVPI、ICPI分别为92.5、0.2、0,确定分离株为弱毒株。动物回归试验表明分离病毒具有致病性。鸡胚免疫方法研究结果表明接种的最佳病毒效价为22,无鸡胚死亡且孵出的雏鸡可检测到较高的抗体水平。说明可以用新城疫分离毒株来进行鸡胚免疫,有针对性的防控养殖场发生新城疫。     

鹅胚化新城疫La Sota克隆毒株的抗原性差异分析及免疫效力试验

新城疫(ND)鹅胚化La Sota克隆毒株是由不同蚀斑所形成的一株异质性病毒群体,经证实不同克隆间在毒力和生物学特性上存在差异。应用中和试验及对25株单抗的反应性测定表明,三个ND克隆株(LM、LG、LS)间抗原性有差异。免疫试验证明,经鹅胚6次传代后的LM克隆株免疫原性优于LG和LS,免疫肉鸡的HI抗体水平也高于未经克隆的鹅胚化La Sota毒株和B_1株,其对2日龄的雏鸡最大安全量达原液0.1ml。因此,LM克隆株有可能成为一株较理想的新城疫弱毒疫苗。     

新城疫病毒在鸡胚中增殖特性的研究

本研究将接种到9～10日龄鸡胚中的鸡新城疫病毒(NDV)La Sota或V4株弱毒培养24h,病毒滴度可增加106以上,培养108 h,病毒滴度则增加至10 10倍以上.NDV在有NDV母源抗体的普通鸡胚与无抗体的SPF鸡胚中的增殖无显著差异;盲传对于检验NDV没有意义.La Sota或V4株病毒悬液在理论上稀释至每胚接种量只有数个或1个病毒时,仍可引起鸡胚感染.低毒量条件下固定病毒的数量,随着接种胚数的增加,感染率随之下降,但感染数在一定范围内波动,没有减少趋势.以上结果证实数个甚至1个活的NDV粒子即可引起鸡胚感染,这对现地检测NDV具有重要意义.     

J亚群禽白血病病毒与禽网状内皮增生症病毒共感染对肉鸡生长和免疫功能的抑制作用

1日龄网鸡感染J亚群禽白血病病毒(ALV-J)以及共感染禽网状内皮增生症病毒(REV)后,肉鸡生长发育明显受阻,体重增重明显下降(P＜0.05),法氏囊、胸腺明显萎缩(P＜0.05),在用新城疫疫苗免疫后,感染组血清中新城疫抗体效价显著低于对照组(P＜0.05);在ALV-J和REV共感染后,这种抑制作用更为明显(P＜0.01).ALV J单独感染后,鸡对传染性法氏囊病病毒(IBDV)弱毒疫苗免疫后的抗体反应与对照组没有明显差别,但ALV-J与REV的共感染可明显延缓鸡对IBDV弱毒疫苗免疫的抗体反应.     

鸡毒支原体对NDV La Sota株免疫应答的影响

以鸡毒支原体NB72株或和R株对鸡先行人工感染,然后,与无支原体感染的对照鸡同样接种NDV La Sota株,观察NDV免疫应答动态。结果,支原体感染鸡群血清和气管中的NDV血凝抑制抗体效价,虽然比未接种支原体的鸡群低.但二者差异不显著(P>0.05).随后,通过攻击NDV强毒,不论先前经过或未经过支原体人工感染,ND免疫鸡全部被保护,且血清中NDV HI抗体效价均大幅度升高;未经ND免疫接种的对照鸡全部发病死亡,因此,鸡毒支原体NB72株或R株感染的鸡对NDV La Sota株的免疫应答无明显改变。最后就体内试验的结果进行了讨论。     

基因Ⅶ型新城疫病毒分离鉴定及免疫原性研究

旨在分离筛选免疫原性好的新城疫病毒(NDV)流行毒株。从发病鸡组织中分离到4株病毒,经血凝和血凝抑制试验鉴定为NDV,进而完成致病指数测定、F基因高变区测序和遗传进化分析,并通过鸡胚交叉中和试验和攻毒试验研究PLK-N-06株对比La Sota疫苗株的抗原差异和免疫保护效力。结果显示,4个分离株的致病指数均属速发型NDV范围,且PLK-N-06株毒力最强;F蛋白裂解位点均为112R-R-Q-K-R-F117,符合强毒株特征。遗传进化分析表明,分离株均为Ⅶd亚型。交叉中和试验结果显示,PLK-N-06株和La Sota株存在显著的抗原性差异。用PLK-N-06株油乳剂灭活苗免疫接种SPF鸡后产生的HI抗体效价几何平均值为1∶338,显著高于La Sota疫苗(1∶69),且其对PLK-N-06株感染的排毒率为0/10,明显低于La Sota株油乳剂灭活苗的4/10,结果表明PLK-N-06株具有良好的免疫原性,为新城疫基因Ⅶ型新型疫苗的研发奠定了基础。     

不同IBD疫苗免疫后对新城疫疫苗免疫的影响

用 5种传染性法氏囊病 (IBD)商品疫苗和 1种中试产品 (NF8株 )免疫 7日龄SPF雏鸡和有IBD、新城疫 (ND)母源抗体的雏鸡。 1周后免疫新城疫ND疫苗 ,随后每周测定NDHI效价。在SPF鸡上的试验表明 ,5种IBD商品疫苗有 2种对ND免疫产生显著的持续的免疫抑制作用。在有IBD、ND母源抗体鸡上的试验表明 ,5种商品疫苗中仅有 1种对ND免疫产生 过性免疫抑制作用。NF8疫苗在SPF鸡及有IBD母源抗体鸡上对ND免疫均未产生明显的免疫抑制作用