不同猪源副猪嗜血杆菌河南分离株16S rRNA基因的遗传进化分析

为研究来自河南省不同猪源的副猪嗜血杆菌(Hps)的遗传演化关系,应用PCR方法扩增所分离的良种猪源、家养野猪源和地方土猪源等3株Hps(KF0901、JZ0801和XY0501)的16S r RNA基因,并进行序列比较分析。结果 3株Hps的16S r RNA基因全长均为822 bp,彼此间核苷酸序列同源性为99.3%~99.6%,与参考菌株的核苷酸序列同源性为97.1%~99.4%;基于16S r RNA基因序列绘制的系统进化树显示,本研究中家养野猪源Hps和地方土猪源Hps均属于血清5型,而良种猪源血清5型Hps却与血清12型和血清14型的亲缘关系更近。表明Hps在良种猪、家养野猪和地方土猪之间彼此交叉感染或具有共同来源;并非所有血清5型Hps分离株都属同一分支。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定

副猪嗜血杆菌(Hps)为猪呼吸道疾病综合征(PRDC)的重要病原之一。在对广西65个猪场281份病猪组织样品进行PRDC病原学调查的基础上,对PCR检测的Hps阳性样品进行了细菌分离,并进行了生化特性、药敏试验、16 S RNA基因片段序列分析和基因组DNA的PCR指纹图谱分析。结果显示,11份(3.91%)检测样品为Hps阳性,且均为混合感染;从南宁市四塘、桂林市永福、玉林市容县和钦州市浦北分离出5株Hps,分离菌株的生化鉴定结果均符合Hps生化特性,且对头孢噻呋和头孢菌素高度敏感;其中3株为血清5型,1株为血清12型,另1株未能定型;分离菌株16 S RNA基因片段之间及与GenBank其他一些代表菌株的核苷酸同源性在99%以上。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及其OmpP5基因序列分析

为研究辽宁省副猪嗜血杆菌(Hps)OmpP5基因的遗传变异规律,从辽宁省阜新市某猪场疑似患有副猪嗜血杆菌病的患猪肺部采取组织病料进行细菌分离,通过革兰染色、生化鉴定、卫星现象及Hps 16S rRNA PCR检测,鉴定为副猪嗜血杆菌。根据已发表的Hps OmpP5基因设计1对特异性引物,对分离株OmpP5基因进行扩增、克隆及测序,得到长度为1 116bp的OmpP5基因序列。将该序列与已发表Hps参考株的OmpP5基因进行同源性比对及系统发育树分析,发现核苷酸同源性为89.8%~99.5%,分离株与参考菌株№4在同一分支,表明OmpP5基因具有一定的保守性,分离株和№4亲缘关系较近。研究结果为阐明辽宁省Hps毒力基因及致病机理提供了参考依据。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及16S rRNA序列分析

从云南某规模化养猪场病猪肺脏分离到1株革兰氏阴性小杆菌,经细菌生化鉴定、PCR鉴定和16S rRNA序列比对鉴定为副猪嗜血杆菌。抗生素药物敏感试验结果表明,分离菌株对四环素、红霉素、氯霉素、头孢噻吩高敏;对庆大霉素、氧氟沙星、诺氟沙星中敏;对磺胺甲唑耐药。16S rRNA分析结果表明,该分离株与GenBank中的Hps参考株AB078973(基因登录号)同源性为100%,将分离菌株鉴定为副猪嗜血杆菌。16S rRNA遗传进化关系表明,分离株与副猪嗜血杆菌3株血清5型参考株AB078972、AB078973、AB078974的16S rRNA序列位于一个分支上,遗传进化关系最近,它们之间的核苷酸同源性在99.0%~99.4%之间,初步鉴定为血清5型副猪嗜血杆菌,致病性试验结果表明,分离菌株对小白鼠有强致病性,命名为YN-1株。     

河南及山西省21株鸡杆菌分离株16SrRNA基因序列分析

对21株分离自河南及山西地区的鸡杆菌的16SrRNA基因序列进行研究,以此分析分离株的进化关系并确定其在鸡杆菌属中所属的具体种。采用PCR方法扩增其16SrRNA基因序列,然后克隆测序。用DNAStar软件对21个菌株的序列及GenBank中已公布的鸡杆菌属相关菌株序列进行同源性比较,结果发现21株分离株之间的核苷酸序列同源性为96．0oA～100％,同鸭源鸡杆菌F279（Gallibacteriuman atis F279）（AF228002）的同源性为95．3％～99．3％,同输卵管炎鸡杆菌F150（Gallibacterium salpingitidis F150）（EU424000）的同源性为88．3％～91．5％,同虎皮鹦鹉鸡杆菌F450（GallibacteriummelopsittaciF450）（EU339196）的同源性为90．3％～93．3％,同海藻糖发酵鸡杆菌52-S3-90（Gallibacteriumtrehalosi fermentans52-s3—90）（EU339199）的同源性为88．2％～91．4％,同多杀性巴氏杆菌CCUG179（P．multocida CCUG17977）（AF294411）的同源性为85．5％～88．8％,对21株细菌的序列同以上菌株的16SrRNA基因序列进行遗传进化树分析,显示21株细菌同鸭源鸡杆菌F279（AF228002）构成一个单独的大分支。结果表明,所有分离株均属于鸭源鸡杆菌,首次大量报道了来源于河南、山西省不同地区的鸡杆菌的16SrRNA基因序列,为鸡杆菌分类的研究提供了参考。     

禽霍乱病原菌的鉴定与主要特性分析

从河北某养鸡场80日龄左右鸡群所发生的禽霍乱病死鸡中，分离到了相应病原菌多杀巴斯德氏菌（pasteurella multocida）。对分离获得的16株菌（HPs-1至HPs-16）进行了形态特征、培养特性、理化特性等方面的鉴定，同时选取代表菌株（HPs-1）进行了16SrRNA基因的分子鉴定，测定了16SrRNA序列，构建了系统发育树。结果表明分离鉴定的16株细菌均为多杀巴斯德氏菌败血亚种（P．multocida subsp．septica），所测代表菌株的16SrRNA基因长度142bp，在GenBank登录号为AY999017，该菌株与检索出的22株巴斯德氏菌属（Pasteurella Trevisan，1887）细菌16SrRNA基因序列同源性均在98％～100％。另外，药敏试验结果显示分离株对供试的青霉素G等33种抗菌药物高敏、对克林霉素敏感、对苯唑青霉素等3种耐药。     

副鸡嗜血杆菌的分离鉴定及16SrRNA序列分析

从云南省和四川省规模化养鸡场鸡传染性鼻炎疑似病例鸡鼻窦分离到2株革兰氏阴性小杆菌,并对其进行生化鉴 定、PCR鉴定和16SrRNA序列比对鉴定.16SrRNA分析表明两分离株与GenBank中的其他副鸡嗜血杆菌(Haemophilus paragallinarum,HPg)参考株核苷酸同源性为94.2％～99.2％.两分离菌株鉴定为副鸡嗜血杆菌,分别命名为YNAN20120110和SCPZH20120120株.16SrRNA遗传进化关系表明:分离株与NAD非依赖型副鸡嗜血杆菌血清A型代表株GU951543(HP105strain)的16SrRNA序列位于一个分支上,遗传进化关系最近,它们之间的核苷酸同源性为99.2％;与副鸡嗜血杆菌血清A型参考株AY498867(0083株)核苷酸同源性为96.9％.致病性实验表明分离菌株对成年产蛋鸡有强致病性.抗生素药物敏感试验表明:分离菌株对头孢吡肟、头孢噻吩、氯霉素、卡那霉素和氧氟沙星高敏,对四环素中敏,对磺胺甲唑耐药.     

闽北地区副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药敏试验

从闽北地区16个规模化猪场分离到5株病原菌,经过分离纯化、形态学观察、细菌生化鉴定、PCR鉴定以及测序分析,分离菌株与已知的副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)菌株16S rRNA序列同源性均在96%以上,确定5株病原菌均为副猪嗜血杆菌。通过致病性试验表明:分离菌株均有一定的致病性,其中Hps-jo株分离菌致死率达83.3%。细菌药敏试验表明:分离菌株对头孢噻呋、头孢氨苄、氟苯尼考敏感;对万古霉素、强力霉素、四环素、多黏菌素中度敏感;对环丙沙星、阿莫西林、恩诺沙星低、链霉素、TMP、新霉素耐药率达100%。试验结果为闽西地区副猪嗜血杆菌病的防治提供了参考。     

鸡奇异变形杆菌的分离鉴定和16S rRNA基因序列测定与系统进化分析

从山东泰安一鸡场发病雏鸡眼中分离到1株致病菌(编号为QY),通过细菌形态学等常规鉴定符合奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)特性。用奇异变形杆菌阳性血清诊断结果呈阳性,人工感染证明该菌株是造成该鸡场雏鸡大批发病死亡的致病菌。药敏试验结果显示对头孢类、恩诺沙星等高度敏感,而对青霉素和复合磺胺等不敏感。以细菌16SrRNA基因通用引物进行PCR扩增,得到QY的16SrRNA基因序列,长约1 453bp(GenBank,登录号为GU477712)。将该序列与GenBank中序列进行Blast比对,发现与其匹配度最高的均是奇异变形杆菌各株系的16SrRNA序列,均高达98%以上。运用DNAStar软件与其中10株奇异变形杆菌分离株构建系统进化树,结果表明,分离株(QY菌株)与10个代表菌株的同源性均为98.9%～99.9%,其中与AB272366同源性最高为99.9%。从分子水平证明该菌是奇异变形杆菌并分析了其遗传进化规律,为鸡奇异变形杆菌的鉴定及其引起的疾病的诊断与治疗提供了参考。     

新疆石河子规模化牛场多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

为了确定石河子地区某规模化牛场出现呼吸困难、咳嗽、病牛消瘦甚至死亡的病因,本研究以病牛病变组织为研究对象,采用常规细菌分离鉴定和细菌16SrRNA序列分析来鉴定菌种,以及多杀性巴氏杆菌种特异性基因Kmt-1和各个荚膜血清型特异性基因(hyaD-hyaC、bcbD、dcbF、ecbJ、fcbD)PCR扩增来确定细菌的血清型,同时应用纸片扩散法对分离细菌进行药物敏感性试验和小鼠感染试验。结果表明,从病变的肺组织中分离到1株菌落为灰白色、露珠状、不溶血,染色为革兰阴性球杆状细菌,生化鉴定结果符合巴氏杆菌特征,同时16SrRNA序列分析与NCBI上已公布的多杀性巴氏杆菌16SrRNA序列同源性在99%以上;对多杀性巴氏杆菌特异性基因Kmt-1以及各血清型特异性基因PCR扩增只扩增到Kmt-1和hyaD-hyaC特异性基因片段;分离菌株对链霉素、庆大霉素、卡那霉素耐药,对其他30种药物敏感,同时感染小鼠全部死亡。结果显示从病牛体内分离到1株毒力较强的血清A型多杀性巴氏杆菌。     

Molecular Identification and Genetic Evolution Analysis of Haemophilus parasuis 16S rRNA Gene in Local Pig Origin

To study the molecular genetic evolution characteristics of Haemophilus parasuis(Hps), PCR was used to determine the 16S rRNA gene of the strain XY0501 isolated from local pigs in Henan province, and genetic evolution analysis was conducted. The results showed that the amplication of 16S rRNA of the isolate XY0501 was 822 bp, the nucleotide sequence similarity among the reference strains was 97.1% to 99.3%, and 99.3% with the strain serotype 5. The phylogenetic tree based on 16S rRNA revealed that the Hps isolate XY0501 from local pigs belonged to the same branch with reference strain serotype 5. The results identified that the Hps infection could cause severe clinical symptoms in pigs, but infection source need to be further investigation,in addition, 16S rRNA of Hps of different serotypes was conserved and no species difference.     

副猪嗜血杆菌血清7型菌株毒力及耐药性分析

【目的】了解河南地区副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)血清7型流行菌株的毒力及耐药情况。【方法】以Hps血清7型参考菌株为对照,对6株Hps血清7型临床分离菌株进行16S rRNA基因扩增、序列分析、毒力基因检测、致病性试验和药敏试验研究。【结果】16S rRNA基因测序及相似性比对结果显示,菌株1436与参考菌株0007相似性为100%,菌株1565、1624与参考菌株0007相似性均为98.6%。系统发育树分析表明,菌株1436与参考菌株0007亲缘关系最近;菌株1624与参考菌株0007亲缘关系最远。6株临床菌株与参考菌株表现为2种毒力基因型,菌株均携带有vta1、vta2、vta3、wza、nanH、cdtA、cdtB、cdtC和espP2毒力基因,其中5株临床菌株还携带ompP2毒力基因。豚鼠致病性试验结果显示,临床菌株毒力较参考菌株表现出不同程度的增强,参考菌株不能感染豚鼠发病,未表现任何临床症状;临床菌株可感染豚鼠发病,表现出一定的临床症状,发病率为20%~40%,死亡率为0。参考菌株和临床菌株均对头孢他啶和头孢噻呋敏感,对强力霉素、氟苯尼考中介,对新霉素、卡那霉素、阿米卡星、红霉素、替米考星等耐药,且均表现出多重耐药现象。【结论】Hps血清7型临床菌株有一定的致病性,但毒力较弱,对头孢类药物敏感,有明显的多重耐药现象,临床上应注意对该血清型的防控。本研究为Hps血清7型流行病学、致病机制研究奠定了基础,为Hps血清7型的临床防控提供了参考依据。     

副猪嗜血杆菌广东流行株的分离鉴定与基因分析

本研究从广东省各个地区送检病料中成功分离鉴定了4株副猪嗜血杆菌,并且针对副猪嗜血杆菌16S rRNA基因特异性进行PCR检测和基因测序同源性分析,通过GenBank联机比对分析,所分离的菌株与国内外菌株16S rRNA序列同源性在98.2%以上,分离菌株之间同源性在99.6%~100%之间,证明了所暴发的菌株是副猪嗜血杆菌。     

First isolation of Haemophilus parasuis and other NAD-dependent Pasteurellaceae of swine from European wild boars

Haemophilus parasuis is a colonizer of the upper respiratory tract of pigs and the etiological agent of Gl?sser's disease, which is characterized by a fibrinous polyserositis, meningitis and arthritis. Gl?sser's disease has never been reported in wild boar (Sus scrofa), although antibodies against H. parasuis have been detected. The goal of this study was to confirm the presence of this bacterium in wild boar by bacterial isolation and to compare the strains to H. parasuis from domesticated pigs. Therefore, nasal swabs from 42 hunted wild boars were processed for bacterial isolation and subsequent H. parasuis identification by specific PCR, biochemical tests and 16S rRNA gene sequencing. Two different strains of H. parasuis from two wild boars were isolated. These strains belonged to serotype 2 and were included by 16S rRNA gene sequencing and MLST analysis in a cluster with other H. parasuis strains of nasal origin from domestic pigs. During this study, Actinobacillus minor and Actinobacillus indolicus, which are NAD-dependent Pasteurellaceae closely related to H. parasuis, were also isolated. Our results indicate similarities in the respiratory microbiota of wild boars and domestic pigs, and although H. parasuis was isolated from wild boars, more studies are needed to determine if this could be a source of H. parasuis infection for domestic pigs.     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验

对一例临床症状、病理剖检变化疑似副猪嗜血杆菌病的仔猪病料进行实验室诊断,进行了细菌培养特性和生化特性等鉴定,初步怀疑为副猪嗜血杆菌,根据副猪嗜血杆菌的16 S rRNA基因设计特异性引物进行PCR扩增鉴定,结果表明,分离菌为副猪嗜血杆菌.药敏试验显示,该分离菌对阿米卡星、头孢氨苄、新霉素高度敏感.     

一例雏鸡铜绿假单胞菌的分离鉴定及其16SrRNA基因序列分析

为对死亡雏鸡进行病因诊断,通过大体剖检、细菌分离、生化鉴定,证实为铜绿假单胞菌感染。测定了该分离株的16SrRNA基因序列,并与GenBank中收录的序列比较,结果发现所分离的铜绿假单胞茵及参考株的16SrDNA基因序列极其保守,相似性达99％～100％;与大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌的相似性差异约为9％;与鸭疫里默氏...     

鸡卡氏杆菌的分离与16S rRNA基因的分析鉴定

四川雅安某种鸡场种鸡出现消瘦,腹部膨大,肝脏肿大破裂出血,腹膜和输卵管炎为主要特征的疾病。为诊断和预防此病的发生,通过对细菌分离纯化、形态学观察、生化试验、药物敏感性试验鉴定出1株致病菌,应用通用引物对细菌的16S rRNA基因进行克隆和测序,测序结果于NCBI上进行BLAST比对,选择同源性较高的巴氏杆菌科15个属的29株细菌16S rRNA序列进行比对分析,构建遗传进化树。结果表明,分离纯化的细菌能在血平板上生长,革兰氏染色阴性短杆状,能发酵大多数糖和醇类,对头孢类抗生素敏感,16S rRNA序列与卡氏杆菌属细菌的同源性最高,在92.2%～99.5%之间,特别是与鸭卡氏杆菌同源在97.5%～99.5%之间。遗传进化树分析结果表明,该菌株与卡氏杆菌属细菌属于同一大分类群,与鸭卡氏杆菌位于同一个小分支,最终诊断该鸡场为卡氏杆菌感染。     

Isolation，Identification and Antibiotics Resistance Analysis of Enterococcus from Yak

17 feces samples of yak which were collected in Hongyuan county were measured with Gram staining method and 16S rRNA molecular identification in this study.8 suspected Enterococcus were separate from feces samples by bacteria purification and PCR amplification with 1 500 bp specific band. 6Enterococcus faecalis and 2Enterococcus faecium were identified through 16S rRNA sequencing.The homology analysis of the strains revealed that the homology between Enterococcus faecalis and reference strains sequence were 99.7% to 100%,that of Enterococcus faecium and reference sequence were 98.2% to 99.2%,indicating that the yak Enterococcus was highly conserved in the process of genetic evolution.The drug sensitive test results showed that the isolated strains were highly resistance to aminoglycoside antibiotics.Enterococcus faecium 11-1-2 strain was not only 5 multi-resistant,but also showed resistence to vancomycin.Enterococcus faecalis strains was most 3 multi-resistant.The antibiotics resistance results revealed that the resistance of yak Enterococcus was serious and should be taken seriously.