高新技术疫苗研究的现状与发展趋势

随着分子生物学技术的迅猛发展,近年来国际上出现了新一代高新技术疫苗,主要包括:基因工程疫苗、合成肽疫苗、抗独特型抗体疫苗、病毒一抗体复合物疫苗、"自杀性"DNA疫苗、转基因植物疫苗等.     

应用23S rRNA对禽波氏杆菌分离株的进化分析

通过PCR扩增分离保存的8株禽波氏杆菌、3株兔支气管败血波氏杆菌及1株猪支气管败血波氏杆菌菌株的23S rRNA基因的片段(710bp),分别克隆到载体pMD18-T后测序。利用BLAST工具进行同源性搜索;用DNAStar分析软件进行同源核苷酸序列的多重比较分析并构建禽波氏杆菌菌株的系统生物进化树。结果显示,8株禽波氏杆菌核苷酸序列之间同源性为99.2%～99.7%,与GenBank中收录的NC_010645株禽波氏杆菌核苷酸序列同源性为92.4%～92.5%,与兔支气管败血波氏杆菌和猪支气管败血波氏杆菌的核苷酸序列同源性均为98.5%～99.2%。国内分离的禽波氏杆菌菌株和支气管败血波氏杆菌菌株均与国外分离菌株在遗传基因上有一定的差异。结果表明,23S rRNA序列分析可以作为鉴定禽波氏杆菌的一种快速简便的方法。     

鸡奇异变形杆菌的分离鉴定和16S rRNA基因序列测定与系统进化分析

从山东泰安一鸡场发病雏鸡眼中分离到1株致病菌(编号为QY),通过细菌形态学等常规鉴定符合奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)特性。用奇异变形杆菌阳性血清诊断结果呈阳性,人工感染证明该菌株是造成该鸡场雏鸡大批发病死亡的致病菌。药敏试验结果显示对头孢类、恩诺沙星等高度敏感,而对青霉素和复合磺胺等不敏感。以细菌16SrRNA基因通用引物进行PCR扩增,得到QY的16SrRNA基因序列,长约1 453bp(GenBank,登录号为GU477712)。将该序列与GenBank中序列进行Blast比对,发现与其匹配度最高的均是奇异变形杆菌各株系的16SrRNA序列,均高达98%以上。运用DNAStar软件与其中10株奇异变形杆菌分离株构建系统进化树,结果表明,分离株(QY菌株)与10个代表菌株的同源性均为98.9%～99.9%,其中与AB272366同源性最高为99.9%。从分子水平证明该菌是奇异变形杆菌并分析了其遗传进化规律,为鸡奇异变形杆菌的鉴定及其引起的疾病的诊断与治疗提供了参考。     

传染性法氏囊病超强病毒株VP2基因原核表达及其免疫原性检测

为检测传染性法氏囊病超强毒株(vvIBDV)重组VP2蛋白的免疫原性,本研究利用RT-PCR方法扩增vvIBDV的结构蛋白VP2基因,并将其克隆到表达载体pGEX-4T-3中,构建重组表达质粒pGEX-VP2。将其转化受体菌E.coli BL21(DE3)plysS,经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳和western blot分析表明,表达的重组蛋白约69 ku,并以包涵体形式存在。表达的重组蛋白经纯化后,免疫6周龄BALB/c小鼠制备免疫血清,ELISA分析表明制备的血清效价在1∶5 120以上,表明vvIBDV VP2具有良好的免疫原性,为建立vvIBDV的ELISA检测方法提供了试验依据。     

兔支气管败血波氏杆菌的病原特点及控制措施

兔支气管败血波氏杆菌病是一种家兔常见的传染病,主要引起哺乳仔兔和断乳仔兔的急性死亡,成年兔的鼻炎、支气管炎和脓疱性肺炎等,对养兔业造成很大的危害.本病多发于春秋季节,主要以呼吸道感染,因此每年春秋季节,注射兔波氏杆菌灭活菌苗,可有效预防本病.由于兔支气管败血波氏杆菌是一种环境致病菌,在全国兔场中普通存在,所以控制该病要采取综合措施,平时要注意加强饲养管理,搞好环境卫生,采取灭活疫苗预防注射,发病时及时作出正确诊断,使用敏感药物及时治疗.另外,对于规模化的养殖场应该坚持自繁自养.在引进种兔时,则应隔离观察1个月,建立无支气管败血波氏杆菌病的兔群.在此基础上加强饲养管理,做好日常兽医卫生防疫工作,进行兔波氏杆菌灭活菌苗预防注射,一般此类菌苗免疫期为4～6个月,每年至少春秋两季各接种1次.同时要及时检出鼻炎症状的可疑兔,给予治疗或淘汰.     

"高热病"病猪细菌性病原的分离鉴定

2006年-2007年对济宁地区不同养殖场（户）猪“高热病”进行流行病学调查,通过细菌病原学检查,从表现出“高热病”症状的患猪体内主要分离到5种细菌。通过对分离株的病原形态学、培养特征、生化特性和致病性等方面进行传统鉴定,结果表明,引起猪“高热病”的细菌性病原主要为大肠埃希菌（64．4％）、沙门菌（61．6％）、巴氏杆菌（34．9％）、猪丹毒杆菌（30．8％）和链球菌（34．2％）,并且多呈混合感染。通过药敏试验测定,结果显示,多数细菌对环丙沙星、头孢噻肟有较高的敏感性,而对复合磺胺、青霉素等有不同程度的耐药性。     

奶牛附红细胞体病继发巴氏杆菌病的诊治

2008年9月,山东省泰安市某奶牛场发生一种急性、热性、散发性的传染病,经过临床症状观察、病理剖检及实验室诊断,确诊为奶牛附红细胞体病继发巴氏杆菌感染,并及时采取紧急治疗措施,5d后疫情得到较好控制.     

鸡奇异变形杆菌外膜蛋白的抗血清制备及其荧光标记抗体检测方法的建立

为建立鸡奇异变形杆菌(P.mirabilis)直接荧光标记抗体检测方法,本研究提取P.mirabilis外膜蛋白(OMP),以OMP免疫健康新西兰家兔制备兔抗鸡P.mirabilis OMP高免血清,纯化的IgG,用FITC标记得到兔抗鸡P.mirabilis OMP-IgG的荧光标记抗体,建立直接荧光标记抗体检测方法。应用该方法检测临床样品184份,检测结果与细菌分离法和微量平板凝集比较,结果表明提取的OMP含有6种成分,分子量分别为67.0ku、63.1ku、57.5ku、53.7ku、43.0ku和31.6ku,经过优化的OMP-IgG荧光标记抗体最佳工作浓度为0.25mg/mL,最佳感作时间为30min。临床检测结果显示该方法具有简便、快速、敏感和特异性强等优点,为鸡P.mirabilis病的流行病学调查和临床快速诊断提供了技术保障。     

AA肉种鸡内源性类ALV-J gp85基因及其抗原表位的分析

利用ALV-J gp85基因两侧的序列片段为引物,从山东潍坊某肉种鸡场送检的7日龄肉种鸡基因组中完整地扩增了内源性类ALV-J gp85基因。利用ALV-J env基因特异性引物不能扩增出长度为2.2kb的目的片段,用ALV-J特异性单抗JE-9做间接免疫荧光检测,也呈现阴性反应。这种内源性类ALV-J gp85基因与已报道的禽内源性反录病毒EAV-HP序列的同源性为85.6%～93.8%,其中与ADOL 0系来航鸡EAV-HP的相似性最高(93.8%)。所得到的内源性类ALV-J gp85基因与外源性ALV-J毒株HPRS-103、SD07LK1、NX0101的同源性分别为93.8%、91.8%和91.7%。并且与外源性ALV-J gp85基因具有相似的Jameson-Worlf抗原表位优势。这种内源性类gp85基因很可能与肉雏鸡早期感染ALV-J后所呈现的免疫耐受现象有关。     

高新技术疫苗研究现状与发展趋势

随着分子生物学技术的迅猛发展,近年来国际上出现了新一代高新技术疫苗,主要包括：基因工程疫苗、合成肽疫苗、抗独特型抗体疫苗、病毒一抗体复合物疫苗、“自杀性”DNA疫苗、转基因植物疫苗等。新型疫苗不仅能改善机体的免疫应答和免疫保护,而且为有效地预防和控制新的传染病提供了新途径,已引起人们的广泛关注。现将各型疫苗的研究状况介绍如下。