水貂源铜绿假单胞菌的分离鉴定及药敏试验

为了对山东省水貂出血性肺炎病例进行微生物学诊断,采用细菌分离、PCR扩增、基因序列比对等方法对分离菌进行鉴定,并对分离率最高的铜绿假单胞菌进行药敏试验。共分离出65株菌,其中铜绿假单胞菌17株。药敏试验结果表明:铜绿假单胞菌对哌拉西林、环丙沙星、替卡西林、头孢吡肟和氨曲南的耐药性达到80%以上;对阿米卡星、亚胺培南和美罗培南的敏感性很高。     

獭兔源铜绿假单胞菌的分离鉴定及药敏试验

为了确定某獭兔养殖场獭兔发病的主要病原菌,分析该病原菌的耐药性,本试验对青岛市某獭兔养殖场送检的病死兔进行病理剖检,并从肺脏中分离得到1株细菌,随后进行分离菌形态观察、生化试验、细菌16S rRNA基因测序。该株分离菌为革兰阴性杆菌,博检革兰阴性细菌鉴定系统的生化鉴定结果为铜绿假单胞菌,细菌的16S rRNA基因序列经同源性比较,与铜绿假单胞菌同源性为100%。药敏试验结果表明该株分离菌对多种头孢类、喹诺酮类药物高度敏感。细菌分离鉴定和药敏试验结果为临床用药治疗该病提供参考依据。     

水貂铜绿假单胞菌的分离鉴定及药敏试验

对河北某水貂养殖场送检的6只具有出血性肺炎症状的病死水貂脏器进行细菌分离鉴定、致病性试验及药物敏感性分析,为临床诊断和用药提供参考依据。通过细菌分离纯化、形态学观察、生化鉴定及PCR鉴定,共分离到6株铜绿假单胞菌;小鼠致病性试验结果显示,6株铜绿假单胞菌均能使小鼠发病死亡;西药药敏试验结果显示,6株铜绿假单胞菌均对多西环素、阿米卡星、恩诺沙星敏感,对卡那霉素、头孢拉定等9种抗生素耐药;中药药物试验结果显示,6株铜绿假单胞菌均对诃子、乌梅、五味子极度敏感,对女贞子、夏枯草等12种中药耐药。     

肉鸽铜绿假单胞菌分离与鉴定

从南京某肉鸽养殖场死亡病鸽肝脏中分离到1株细菌,经分离培养、形态染色镜检、生化试验、药敏试验、实验动物致病性试验和16S rDNA基因片段PCR检测及基因测序试验,结果表明,该菌可以在普通营养琼脂和SS琼脂平板上生长,革兰染色镜检为革兰阴性菌,生化试验检测结果鉴定值为1 655,符合铜绿假单胞菌生化特性;药敏试验表明,该菌对磷霉素、环丙沙星和阿米卡星高度敏感,接种小鼠能导致其死亡并分离出同一细菌,16S rDNA基因片段测序后与GenBank中登录的铜绿假单胞菌同源性为99%。综合以上结果鉴定该分离菌为铜绿假单胞菌。     

致仔猪肠壁囊泡性脓肿铜绿假单胞菌的生物学特性研究

为研究猪肠壁囊泡性囊肿的可能病原,从发病猪肠道囊泡分离细菌,从11头发病死亡猪肠壁囊泡分离到1株共同性的细菌,对其进行了细菌生化鉴定和16sRNA测序,结果鉴定该株细菌为铜绿假单胞菌。通过药敏试验和小鼠攻毒试验,证实该株细菌具有多重耐药性和强致病性。本研究首次报道了铜绿假单胞菌致仔猪肠壁裳泡性脓肿的病例,并证明了假铜绿单胞菌强的致病作用,为深入铜绿假单胞菌对畜禽养殖的威胁及条件致病菌的变异奠定基础。     

袋鼠源铜绿假单胞菌分离鉴定

为确定袋鼠死亡原因,本研究采用Biolog快速鉴定系统、16SrRNA序列分析以及传统细菌鉴定方法对2株分离自北京动物园袋鼠肺脏的菌株进行形态学、培养特性、生化特性、小鼠致病性、系统发育分析等生物特性的鉴定和分析,结果表明2菌株均为铜绿假单胞菌,对昆明小鼠有强致病性。系统发育分析结果表明2株袋鼠源铜绿假单胞菌16SrRNA序列与ATCC10145模式株差异很小,同源性分别为99.9%和100%,并且位于系统发育树的同一分支。     

雏鸡铜绿假单胞菌的分离鉴定及生物学特性分析

对5起雏鸡铜绿假单胞菌感染病例进行了发病情况、临床特征、主要病理变化等方面的检验,取病死鸡肝组织或卵黄为材料做细菌的分离,经对分离做纯培养的50株菌进行形态特征、理化特性、代表菌株的16S rRNA基因序列测定及系统发育学等方面的鉴定,表明为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),血清型为6型。从每起病例选择1个代表菌株对健康雏鸡做人工感染试验,明确了相应的病原学意义。用37种抗菌类药物对10株菌做敏感性测定,结果对供试的头孢哌酮等12种药物敏感或高度敏感,对卡那霉素等10种在不同菌株间存在耐药性差异,对青霉素G等15种药物耐药。     

进口奶牛感染铜绿假单胞菌的微生物学诊断

从病死奶牛脏器中分离出1株革兰氏阴性短杆菌,通过染色镜检、培养特性分析及生化鉴定,证明为铜绿假单胞菌。动物试验证明,分离株对小鼠有较强的致病性,并从死亡鼠体内分离到相应细菌。药敏试验结果显示,铜绿假单胞菌对多种抗菌药物有耐药性。     

一株牛源铜绿假单胞菌的分离鉴定

为了确诊秦皇岛市昌黎县某肉牛养殖场肉牛肺炎的病因,试验对肉牛肺脏中的病原进行分离培养,并对纯化培养的分离菌采取革兰氏染色、细菌生化鉴定及16S rDNA鉴定,对分离菌进行药敏试验和小鼠致病性试验。结果表明:从病死牛严重病变的肺脏实质部分离到一株优势菌,为革兰氏阴性杆菌。生化试验结果表明,该优势菌与铜绿假单胞菌符合率高达99.9%,将该分离菌命名为PaQHD-1。16S rDNA鉴定结果表明,PaQHD-1与铜绿假单胞菌参考菌株处于同一分支,并且同源性在99%以上。PaQHD-1仅对环丙沙星表现敏感,对其余的14种抗生素均表现耐药;分离菌可致小鼠死亡,小鼠死亡率100%(5/5)。说明本次致牛肺炎的病原为铜绿假单胞菌,且该分离菌具有一定的致病性及耐药性。     

虹鳟荧光假单胞菌的分离鉴定

为鉴定分析出甘肃省永登县某养鳟场疑似爆发赤皮病的病因,通过对发病虹鳟鱼进行临床症状、病理变化的观察,对发病鱼主要器官进行细菌的分离培养,并对分离培养的细菌利用16S rRNA序列分析,对菌株进行鉴定及遗传进化分析。结果表明,成功分离出一株荧光假单胞菌,将其16S rRNA基因序列与GenBank中登录的荧光假单胞菌参考株的16S rRNA基因序列进行比对,同源率达到99%。经MEGA7.0软件分析后,其位于不同的分支上。本研究结果为鳟鱼赤皮病的快速检测和对甘肃永登地区赤皮病的有效防治提供理论依据。     

鸡卡氏杆菌的分离与16S rRNA基因的分析鉴定

四川雅安某种鸡场种鸡出现消瘦,腹部膨大,肝脏肿大破裂出血,腹膜和输卵管炎为主要特征的疾病。为诊断和预防此病的发生,通过对细菌分离纯化、形态学观察、生化试验、药物敏感性试验鉴定出1株致病菌,应用通用引物对细菌的16S rRNA基因进行克隆和测序,测序结果于NCBI上进行BLAST比对,选择同源性较高的巴氏杆菌科15个属的29株细菌16S rRNA序列进行比对分析,构建遗传进化树。结果表明,分离纯化的细菌能在血平板上生长,革兰氏染色阴性短杆状,能发酵大多数糖和醇类,对头孢类抗生素敏感,16S rRNA序列与卡氏杆菌属细菌的同源性最高,在92.2%～99.5%之间,特别是与鸭卡氏杆菌同源在97.5%～99.5%之间。遗传进化树分析结果表明,该菌株与卡氏杆菌属细菌属于同一大分类群,与鸭卡氏杆菌位于同一个小分支,最终诊断该鸡场为卡氏杆菌感染。     

Isolation,Identification and Drug Susceptibility Test of Pseudomonas aeruginosa in Chickens

In order to detect the main bacterial pathogens and analyze the drug resistance for providing therapeutical guidance for drug administration,4 stains were isolated from death chickens of a breeding chicken farm in Qinhuangdao area.All 4 isolates were identified by morphological characteristics,biochemical test,immunofluorescent staining,amplification of 16S rRNA genes by PCR,sequence analysis and drug susceptibility test.The results showed that all 4 isolates were gram-negative,bacillus brevis with green fluorescent,and the sequence of 16S rRNA gene of isolates were analyzed and test results showed that specific amplified band was consistent with the expected size.The isolated bacteria were identified to be Pseudomonas aeruginosa.Results of drug susceptibility test indicated that the bacterial isolates were highly sensitive to gentamycin,amikacin,spectinomycin,ceftazidine,ceftriaxone,levofloxacin,enrofloxacin,florfenicol,polymyxin B and fosfomycin,intermidiate sensitive to tetracycline and doxycyclin,resistant to neomycin,cefotaxime,cephalothin,amoxicillin,ampicillin,erythromycin,trimethoprim-sulfamethoxazole and oxygen sulfamethoxazole isoxazole.The results suggested that the resistances of Pseudomonas aeruginosa isolates to commonly used antibiotics were serious.So antibiotics should be reasonably selected based on the result of drug susceptibility test in this farm.     

鸡源绿脓杆菌的分离鉴定及药敏试验

为确诊引起秦皇岛某鸡场细菌性疾病的主要病原菌,分析其耐药情况,为临床用药和治疗提供依据,本试验对送检的病死鸡肝脏中分离得到的4株菌进行形态特征观察、生化鉴定、免疫荧光染色观察、细菌16S rRNA基因PCR扩增与测序分析及药敏试验.结果显示,4株分离菌均为革兰氏阴性、带绿色荧光的短杆菌,PCR扩增出的特异性条带与预期大小相吻合,确定为绿脓杆菌.药敏试验结果显示,分离株对庆大霉素、阿米卡星、大观霉素、头孢他啶、头孢曲松、左氧氟沙星、恩诺沙星、氟苯尼考、多黏菌素B和磷霉素高度敏感,对四环素和强力霉素中度敏感,而对新霉素、头孢噻肟、头孢噻吩、阿莫西林、氨苄西林、红霉素、复方新诺明和磺胺甲氧异唑耐药.提示,该分离菌对常用抗生素耐药情况严重,养殖场应根据药敏试验结果选择敏感药物进行合理用药.     

一株猪源棒状杆菌的分离及其16S rRNA基因分析鉴定

四川某商品猪场仔猪出现以体温升高,背、腹和腿部皮肤发绀,淋巴结出血肿大,肺、脾脏出血、化脓为主要特征的疾病。通过对分离细菌的纯化培养、形态学观察、生化试验、致病性试验和药物敏感性试验,鉴定出一株致病菌。应用通用引物对其16S rRNA基因进行克隆和序列分析,序列在NCBI上进行BLAST比对,选择同源性较高的棒状杆菌属中25株不同种的菌株16S rRNA序列进行比对分析,构建遗传进化树。分离纯化的细菌在鲜血琼脂平板厌氧条件下生长良好,为革兰氏染色阳性杆状菌,能发酵部分糖类,能致死小白鼠,对头孢类抗生素敏感,16S rRNA序列与棒状杆菌属细菌的同源性最高,在78.2%~98.0%之间,遗传进化树分析结果表明,该菌株与棒状杆菌属细菌属于同一分类群,分离菌鉴定为棒状杆菌。     

红三叶根际溶磷菌的筛选与培养基优化

为从岷山红三叶根际土壤中筛选出大量高效溶磷菌株,本研究采用Pikovaskaia’s、PKOC1和PKOC2三种溶磷培养基进行溶磷菌株的初步筛选和优良溶磷菌株16S rRNA基因序列鉴定,并对分离筛选效果较好的PKOC2培养基进行响应面优化。结果表明:采用Pikovaskaia’s、PKOC1和PKOC2三种溶磷培养基,从红三叶根际分离出26株溶磷菌株;经16S rRNA基因序列对7株优良溶磷菌株进行初步比对鉴定,初步鉴定结果为:菌株MHS4为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus);菌株MHS7和MHS19为枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis);菌株MHS27为苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis);菌株MHS30为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens);菌株MHS31为盖氏假单胞菌(Pseudomonas gessardii);菌株MHS49为产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)。PKOC2溶磷培养基优化配方为:葡萄糖18.19 g·L^-1,Ca₃(PO₄)₂ 5 g·L^-1,MgCl₂·6H₂O 3.21 g·L^-1,MgSO₄·7H₂O 0.25 g·L^-1,KCl 0.2 g·L^-1,(NH₄)₂SO₄ 0.08 g·L^-1。红三叶根际溶磷菌资源丰富,优化后的溶磷培养基为高效溶磷菌资源筛选提供资源支持。     

Isolation,Identification, 16S rRNA Gene Sequencing and Genetic Evolution Analysis of Aeromonas aeruginosa from Duck

【Objective】 The experiment was aimed to study the pathogenic bacteria of acute death of ducklings in a duck farm in Henan province and its phylogenetic status.【Method】 The liver and spleen of dead ducks in the diseased duck farm were collected.The bacterial morphology, Gram-staining, biochemical characteristics, sequence analysis of 16S rRNA gene, drug sensitivity test and pathogenicity test were carried out.【Results】 The isolated bacteria grew on blood agar medium with smooth, convex, milky white and α-hemolytic Gram-positive cocci.Biochemical test results showed that the isolated bacteria were positive for maltose, sucrose, raffinose, nitrate reduction reaction, MP-VP test, urea, lysine decarboxylase, ornithine decarboxylase and aescin, and negative for xylose, lactose, glucose, sorbitol, hydrogen sulfide, citrate, peptone, mannitol, phenylalanine and methyl red.The results of 16S rRNA gene sequencing and BLAST comparison results showed that the 16S rRNA gene sequence of the isolated strain was 94.8%-99.9% similar to that of Aerococcus viridans published on NCBI, and the similarity with strains Mnlv1, Mnlv2 and W66 was the highest, up to 99.9%.The similarity with strain GXBl-1 was the lowest, which was 94.8%.Phylogenetic tree analysis showed that the isolated bacteria belonged to the same genus and group on the same branch as strains of Aerococcus viridans FL09, 15MS and Mnlv2 etc., and had the closest genetic relationship with FL09.The results of drug sensitivity showed that the isolated strain was sensitive to fosfomycin, ampicillin and amoxicillin, moderately sensitive to penicillin, neomycin and amikacin, it was resistant to rifampicin, neomycin, bacitracin, erythromycin and enrofloxacin.The results of pathogenicity test showed that the strain was lethal and increased with the increase of inoculation concentration.【Conclusion】 This study determined that the pathogen causing the acute death of ducklings in a duck farm in Henan province was Aerococcus viridans, which provided a reference basis for clinical diagnosis and treatment of the diseases caused by this bacteria.     

斑点叉尾鮰中一种病原菌的分离与鉴定

目的未知病菌对江苏地区斑点叉尾鮰的养殖业造成了巨大的危害,本文对该地区某养殖场病鱼中分离的细菌进行了鉴定及微生物学特性研究。方法采用VIA培养基分离优势菌株;采用回归感染实验确认病原菌;采用形态学观察、生理生化特征测定、细菌特异性引物PCR扩增检测及细菌基因测序分析鉴定细菌;采用药敏实验测定它对部分抗生素的敏感性。结果从病鱼症状及菌株的培养特性、形态特征与嗜麦芽寡养单胞菌感染斑点叉尾鮰症状十分相似,病鱼有典型的肠套叠和肝脏变性现象。分离菌株为革兰氏阴性杆菌,氧化酶阴性、硝酸还原阴性,不发酵糖类,无动力。最初判为嗜麦芽寡养单胞菌,而经过VITEK2生化及16S rRNA基因系统发育进化显示,与不动杆菌16S rRNA核苷酸同源性最高,为98.7%～99.8%,该菌株为约翰逊不动杆菌。结论分离出的约翰逊不动杆菌grp2580083能导致斑点叉尾鮰患病,症状与嗜麦芽寡养单胞菌感染具有类似性,对渔业养殖造成影响。     

First isolation and molecular characterization of Ehrlichia canis in Spain

This paper reports the first isolation and culture of Ehrlichia canis in Spain from a naturally infected dog using the DH82 cell line. After DNA extraction and PCR amplification, a nearly complete (1412bp) sequence of the 16S rRNA gene of the new E. canis strain was obtained. The GenBank accession number for the nucleotide sequence of this strain is AY394465. This sequence was aligned with the 16S rRNA gene sequences of other Ehrlichia strains accessible in GenBank. The 16S rRNA gene sequence of the E. canis strain reported here showed a high percentage of similarity with the 16S rRNA gene sequence of E. canis from different geographic areas including Japan, Venezuela and Israel. These data confirm the presence of E. canis in Spain.     

豫陕两省14株鸡杆菌的gyrB、16S rRNA和rpoB基因序列比较分析

分析河南、陕西分离的14株鸡杆菌(Gallibacterium)之间的进化关系,及gyrB基因序列比较在该菌进化分析中的作用。PCR扩增鸡杆菌分离株的gyrB、16SrRNA和rpoB3个看家基因,PCR产物纯化后直接测序。将鸡杆菌分离株、国外参考株的3个看家基因序列进行比较分析,用Phylip 3.67软件构建进化树。结果表明,14株鸡杆菌与鸭源鸡杆菌(Gallibacterium anatis)模式株间的相似性为96.3%～98.0%(gyrB)、97.7%～99.6%(16SrRNA)和97.7%～99.0%(rpoB);14株鸡杆菌与鸡杆菌复合群1(Gallibacterium genomosp.1)参考株间的相似性为88.8%～89.9%(gyrB)、96.2%～97.5%(16SrRNA)和92.6%～93.6%(rpoB)。基于3个看家基因序列的进化分析,均显示14株鸡杆菌和鸭源鸡杆菌模式株形成单独的一个群。14株鸡杆菌分离株均属于鸭源鸡杆菌种;在3个看家基因位点,鸡杆菌河南株与陕西株之间、鸡杆菌输卵管炎病鸡分离株与健康鸡分离株之间均无明显遗传上的差异;gyrB基因序列分析可用于鸡杆菌分离株的种类鉴定,且对14株鸡杆菌与复合群1参考株的区别能力优于另外2个看家基因。