香猪SRY基因的克隆及序列分析

试验参照猪SRY基因保守序列设计了1对引物,对香猪基因组DNA进行PCR扩增。将扩增产物通过T—A互补法克隆到质粒pGEM—T载体中,筛选阳性克隆进行DNA测序。测序结果显示,香猪SRY基因开放阅读框全长627bp,编码227个氨基酸。其中核心区域HMG—box长237bp,并且编码79个氨基酸。与白鲸、人、牛、绵羊4种哺乳动物的SRY基因序列相比较,香猪和白鲸的SRY序列具有较高的相似性,相似度达82．1％。序列相似性和邻接法聚类树的结果均显示,在SRY基因中香猪和白鲸有着较近的亲缘关系,表明以白鲸为代表的鲸目和以香猪为代表的偶蹄目有较近的亲缘关系。     

哺乳动物SRY基因研究进展

尽管SRY基因的发现已有10多年，但到目前为止，人们还没有弄清楚SRY基因是如何调控胚胎双性腺发育成睾丸的。经过10多年的研究，人们对SRY基因有了新的认识。作者综述了SRY基因的功能，SRY蛋白以及SRY基因在性腺中表达的最新研究进展。     

锯缘青蟹Sox基因的PCR扩增

SRY基因(sex-determining region of the Y chromosome)是人类及哺乳动物睾丸决定因子TDF(testisdetermining factor)的最佳候选基因。SRY蛋白含有204个氨基酸,其中1个约79个氨基酸区域即HMG盒(high mobility group box)是SRY基因编码蛋白质的唯一功能区。由于SRY的发现,人们进而发现了1个庞大的与性别决定有关的SRY盒-Sox(SRY-related HMG box gene)基因家族。锯缘青蟹是我国重要的海洋经济蟹类之一,其性染色体和性别决定机制仍处于进化的早期阶段,在分子水平上探讨其性别决定机制尚不多见。通过采用PCR技术,以特异扩增人SRY基因HMG盒保守区的1对兼并引物,扩增了锯缘青蟹基因组的Sox基因。结果表明锯缘青蟹雌雄个体与人一样,均能扩增出1条大小约为216bp左右的基因片段,显示出该基因在进化上的高度保守性,为探索锯缘青蟹的性别决定机制及Sox基因的进化提供了分子资料。     

绵羊、山羊早期胚胎性别鉴定体系的建立

根据绵羊、山羊和牛SRY(sexdeterminingregionoftheY)基因中的183bp同源序列设计跨度为170bp的两对半嵌套式雄性特异性引物,同时根据β-珠蛋白基因序列设计240bp的常染色体引物作为内标引物,对提纯的血液DNA样品和胚胎细胞DNA样品进行PCR(polymerasechainreaction)以准确鉴定早期胚胎性别。扩增产物的琼脂糖凝胶电泳分析表明:0.2mmol/LdNTPs、2.0mmol/LMg2+、53℃退火条件下,雄性胚胎具有170bpSRY基因序列扩增带及240bpβ-珠蛋白基因序列扩增带;而雌性胚胎只有240bp常染色体基因序列扩增带。因此这个鉴定体系是可行的。     

中国荷斯坦牛SRY基因编码区的克隆与原核表达

利用PCR技术从雄性中国荷斯坦牛的基因组DNA中克隆了Y染色体性别决定基因(Sex-deter-m in ing R eg ion on the Y Chrom osom e,SRY)的编码区全长序列,构建了表达载体pET-28a/SRY,并将其在大肠杆菌(E.coli)中进行了诱导表达,对表达产物进行了检测。结果表明,SRY基因编码区长687 bp,编码229个氨基酸;表达载体pET-28a/SRY构建成功;表达产物中含有相对分子质量为33 ku的SRY蛋白。     

锯缘青蟹Sox基因的PCR扩增(英文)

SRY基因(sex-determining region of the Y chromosome)是人类及哺乳动物睾丸决定因子TDF(testisdetermining factor)的最佳候选基因。SRY蛋白含有204个氨基酸,其中1个约79个氨基酸区域即HMG盒(high mobility group box)是SRY基因编码蛋白质的唯一功能区。由于SRY的发现,人们进而发现了1个庞大的与性别决定有关的SRY盒-Sox(SRY-related HMG box gene)基因家族。锯缘青蟹是我国重要的海洋经济蟹类之一,其性染色体和性别决定机制仍处于进化的早期阶段,在分子水平上探讨其性别决定机制尚不多见。通过采用PCR技术,以特异扩增人SRY基因HMG盒保守区的1对兼并引物,扩增了锯缘青蟹基因组的Sox基因。结果表明锯缘青蟹雌雄个体与人一样,均能扩增出1条大小约为216bp左右的基因片段,显示出该基因在进化上的高度保守性,为探索锯缘青蟹的性别决定机制及Sox基因的进化提供了分子资料。     

Determination of nucleotide sequence of SRY gene in sika deer (Cervus nippon)

The aim of the present study was to determine the whole nucleotide sequence of the open reading frame of the sex‐determining region Y (SRY‐ORF) in wild sika deer. The SRY gene of wild sika deer was obtained by polymerase chain reaction (PCR) with DNA from blood samples. The whole nucleotide sequence of the SRY‐ORF in wild sika deer consisted of 687 bp and encoded 229 deduced amino acids. In comparison with the bovine SRY gene, the percentage of nucleotide sequence homology was 91.0% in the overall ORF, and those of the N‐terminal, high mobility group (HMG) box, and C‐terminal regions within ORF were 88.9%, 96.2% and 87.9%, respectively. The nucleotide sequences of sika deer SRY‐ORF characterized in the present study can be used for phylogenetic analysis or sexing in wild sika deer.     

动物性别决定的分子机理及性别鉴定与控制新技术

哺乳动物中位于Ｙ染色体短臂临界区域的ＳＲＹ基因启动雄性性状的发育。该基因在生殖腺脊中的表达可激发下游基因ＭＬＳ的转录,引起缪氏体抑制物和睾酮分泌,促使睾丸组织器官的发育。针对该基因制备特异探针或产该区域片段得到引物对就可用ＦＩＳＨ或ＰＣＲ准确,快速鉴定出植入母体前的胚胎性别,以及对精子筛选分离的结果作出准确评价。与ＰＣＲ相比,ＦＩＳＨ技术更具检测优势。     

应用PCR方法通过毛发进行哺乳动物性别鉴定

以哺乳动物的新鲜毛发和在冷冻条件下保存４个月的毛发作为材料。从毛囊中提取ＤＮＡ,应用ＰＣＲ方法扩增ＳＲＹ基因片段,ＺＦＸ／ＺＦＹ基因片段,探讨哺乳动物性别鉴定的最优化ＰＣＲ方案。结果表明,毛发ＤＮＡ和血液ＤＮＡ均可获得相同的扩增结果。证实了毛发作为ＰＣＲ扩增材料是可靠的。对不同材料量、不同模板量、不同提取方法进行比较,优化实验方案,达到１根毛发用Ｃｈｅｌｅｘ－１００提取得到的ＤＮＡ即可以成功地进行     

使用粪球形态指标快速判别天山马鹿的性别

通过观察来自于新疆乌鲁木齐市南山山区的未知性别的天山马鹿种群粪便样本,依粪球形态可分为2类：子弹状、枣核状。子弹状呈短粗型,长宽比较小;枣核状呈细长型,长宽比较大。140份样品中子弹状86份、枣核状54份。通过扩增SRY基因进行分子鉴定知雄性94份、雌性46份。形态分类与实际性别吻合率88.34%,即子弹状为雄性,枣核状为雌性。并以样品长、宽平均值的比值（R）为指标快速聚类,建立了判别方程,统计指出判别结果与实际性别吻合率85.48%。结果提示今后的野外研究可直接利用粪球形态判定天山马鹿性别,长宽比判别方程可作为辅助。