大肠杆菌焦磷酸酶基因的克隆和序列分析

按ＣＴＡＢ法提取大肠杆菌Ｋ－１２的ＤＮＡ,应用ＰＣＲ技术获得目的基因片段（ＰＰａｓｅ基因）,低熔点胶回收后,在Ｔ４ＤＮＡ连接酶的作用下,将目的基因克隆到ｐＵＣｍ－Ｔ载体上,并转化ＪＭ１０９感受态菌中。转化获得的克隆提取质粒ＤＮＡ,０．８％琼脂糖凝胶电泳分析,并进行ＰＣＲ扩增鉴定、序列分析证明插入片段确为ＰＰａｓｅ基因。本文用ＰＣＲ技术扩增并克隆大肠杆菌焦磷酸酶基因,为导入甜菜选育高含糖量品种奠定基     

鸡传染性支气管炎病毒地方-分离株S1基因克隆和基因型鉴定

利用ＩＢＶ全长Ｓ１基因特异性引物,以纯化的３个标准株Ｍ４１、Ｈ５２、Ｔ和６个地方分离株（ＱＤ、ＺＺ、ＧＺ、ＧＪ、ＤＬ和ＹＣ）的基因组ＲＮＡ为模板,用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增出预期大小约１．７３ｋｂｃＤＮＡ片段,经ＢＡＭＨＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切插入到质粒ｐＵＣ１８中,并在大肠杆菌ＪＭ８３中实现了克隆。对６个分离株的Ｓ１基因ＰＣＲ产物进行ＨａｅⅢＲＦＬＰ分析,表明ＱＤ、ＴＪ属于Ｍ４１基因型,ＺＺ和ＧＺ与Ｔ基因     

马立克氏病病毒Ⅰ型疫苗毒克隆株pp38基因同源物的扩增和克隆

用ＰＣＲ技术,从马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＣＶ１９８８／Ｃ株感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）基因组ＤＮＡ中扩增出含起始密码子的ＭＤＶｐｐ３８基因同源物编码序列,在以Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的ｐｐ３８基因作为探针,在Ｓｏｕｌｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ中,该探针能识别该ＰＣＲ扩增片段。将该ＰＣＲ扩增片段在ＢａｍＨ Ｉ和ＰｓｔＩ位点克隆进ｐＵ１８质粒载体,酶切分析筛选到含ｐｐ３８基因同源物的重组质粒并进行了全序     

拟南芥菜LEAFY基因片段的分离及果树基因组中存在LEAFY同源基因…

利用ＰＣＲ技术从拟南芥菜基因组ＤＮＡ中扩增出一条长４１４ｂｐ的ＤＮＡ片段。该片段被克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（－）手ＥｃｏＲＶ位点上。序列分析结果证实扩增和克隆的ＤＮＡ片段是分生组织特征基因ＬＥＡＦＹ３＇端的部分片，不含内含子序列。结果表明，供试果树，基因组中均存在单拷贝的ＬＥＡＦＹ同源基因。     

利用PCR技术体外扩增牛Y染色体特异DNA序列的研究

本实验建立了用ＰＣＲ（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术体外扩增牛Ｙ染色体特异ＤＮＡ序列的方法。根据牛的ＳＲＹ序列设计一对引物，两条引物均为２３ｂｐ，对公牛１９４ｂｐ序列进行体外扩增。从屠宰的公、母牛肝和血液中提取ＤＮＡ，用作ＰＣＲ模板，ＰＣＲ仪内进行扩增。结果表明公牛个体样品显示清晰可见的特异ＤＮＡ扩增带，而母牛个体样品无扩增片段出现，与预期的结果完全符合。     

干细胞因子基因5''''旁侧1.42 kb调控序列的PCR扩增

通过ＰＣＲ扩增从基因组中获得长达１．４２ｋｂ人干细胞因子基因５’旁侧调控序殓，为后续表达调控研究做准备。方法：对常规ＰＣＲ缓冲液调节ＰＨ值到９．０，ＴａｑＤＮＡ聚合酶中加入适量的具有校正功能的ＴｌｉＤＮＡ聚合酶，退火温度升至６８℃，加大模板量，增加模板预变性时间，进行２５个循环。结果经过改变条件，成功地获得了所需的１．４２ｋｂ的ＳＣＦ调控序列片段。结论在一般的ＰＣＲ体系中汪厍适量的具有３’→５’外     

PCR方法进行牛Y—DNA特异性片段的分子克隆

本研究应用聚合酶链反应扩增牛Ｙ染色体特异性ＤＮＡ片段,从宰后成年公,母牛肝提取ＤＮＡ,分别俄为ＰＣＲ扩增模板,扩增产物电泳结果,公牛样品具有特异性ＤＮＡ扩增谱带,而母牛样品则没有扩增带,以ｐＵＣ１８为载体,将扩增片段构建成牛Ｙ特异性的部分Ｙ染色体文库。本实验所克隆的牛Ｙ特异性ＤＮＡ片段可以作为奶牛胚胎性别鉴定的探针ＤＮＡ。     

用牛血清白蛋白改善荸荠基因组DNA的RAPD扩增

在荸荠基因组ＤＮＡ的ＲＡＰＤ（随机扩增多态性ＤＮＡ）扩增中，具合适浓度和片段长度的ＤＮＡ常常在适宜条件下无法扩增。这种现象常在干燥叶状茎ＤＮＡ的扩增中发生。提取的ＤＮＡ中存在一些ＲＡＰＤ（或ＰＣＲ）抑制剂可能是ＲＡＰＤ扩增失败的原因。多糖、多酚和其他...     

猪生殖和呼吸综合征中国分离株ORF5基因的克隆及序列分析

本研究利用对应于ＰＲＲＳＶＡＴＣＣＶＲ－２３３２株及ＬＶ株ＯＲＦ５基因保守序列的１对均为２５个碱基的引物１００５ＰＳ、１００６ＰＲ对ＰＲＲＳＶ中国分离株Ｂ１３进行ＲＴ－ＰＣＲ,扩增出了包括完整ＯＲＦ５基因的ＤＮＡ片段,片段长约７３０ｂｐ。将此片段定向克隆入ｐＵＣ１８载体的ＥｃｏＲＩ和ｓｔＩ位点之间,获得了Ｂ１３ＯＲＦ５基因与ｐＵＣ１８载体的重组质粒。通过ＥｃｏｒＩ／ＰｓｔＩ、ＥｃｏｒＩ／ＨｉｎｄⅢ     

鸡传染性贫血病毒ORF2基因的扩增及酶切分析

根据鸡传染性贫血病毒ＣＵＸ－１标准毒株ＤＮＡ序列中ＯＲＦ２基因片段设计一对引物，对ＣＵＸ－１进行扩增，得到参小为６８４ｂＰ的片段，符合设计目的。以疑似ＣＩＡＶ的分离物ＳＲ４３感染鸡马立克氏病淋巴瘤细胞，提取全细胞ＤＮＡ，用该引物进行扩增，也得到同样大小的片段。     

牛BRY基因的分子克隆及序列分析

以荷斯坦奶牛、西门塔尔牛和甘南牦牛为观测对象,利用Y染色体上特异性序列BRY基因进行性别预测,并对其进行PCR扩增、分子克隆及序列分析;最后以牛基因组DNA为模板,利用牛BRY基因作为雄性特异性基因,ZFX/ZFY作为内标基因进行双重PCR.结果表明:公牛可获得长度约为300 bp和445 bp两条扩增带的PCR产物,母牛则仅获得1条长度约为445 bp的PCR产物,与实际性别完全相符,说明该基因可用于牛的性别预测.对BRY-PCR产物克隆测序,得到300 bp的BRY基因部分核苷酸序列,与GenBank上登录的牛和绵羊的同源性序列进行比对发现,同源性都高于87.0%,表明哺乳动物的BRY基因具有高度保守性,种间差异很小.     

毛干DNA的快速提取及其对PCR的影响

[目的]建立毛干DNA快速稳定的提取扩增策略,使这一简便取材能在畜牧、野生动物保护等采样困难的领域得以普及应用.[方法]采用PCR缓冲液快速提取及2轮PCR逐级稀释扩增的策略提取扩增黄牛毛干DNA微卫星位点.[结果]该方法可从低至0.1mg（约1 cm长）的毛干中提取得到DNA,并成功扩增核DNA微卫星位点.48份黄牛牛毛样本均成功提得DNA.72份扩增样本,除4份样本扩增效果较差,其余样品均能正常扩增.[结论]该研究方法可快速稳定的提取扩增目标基因,为毛干在相关领域的普及应用奠定了基础.     

不同烤烟品种烟叶腺毛形态和密度的扫描电镜观察分析

采用扫描电子显微镜对K326、贵烟2号、云烟85等3个不同品种烤烟的《片腺毛的形态结构及腺毛密度进行了观察。结果表明:3种烤烟的《片腺毛包括长柄腺毛、短柄腺毛,腺毛一般由1个基细胞、1至多个柄细胞和单细胞的球形头部或多细胞的纺缍形头部组成。长柄腺毛的个体较大且最多,是烤烟烟叶腺毛的主要类型;短柄腺毛粗短、数量较少。烟叶腺毛头部是腺毛分泌功能的主要部位,长柄腺毛和短柄腺毛的头部比相邻的柄部膨大,特别是短柄腺毛头部膨大明显。各品种间烟叶腺毛密度差异较大,其中K326的烟叶腺毛密度较大,为13.7根/mm2;云烟85和贵烟2号腺毛密度低于K326,分别为10.06根/mm2和9.89根/mm2。参试品种平均腺毛密度从高到低的排列顺序是:K326>云烟85>贵烟2号。     

蒺藜苜蓿小G蛋白ROP在共生过程中的作用:2.MtROP5调节根毛生长发育的功能分析

【目的】对蒺藜苜蓿MtROP5的功能进行研究,为阐明植物ROP在共生互作过程中的调控机制奠定基础。【方法】采用PCR方法克隆MtROP5的启动子序列,并构建了MtROP5的相关表达载体。利用发根农杆菌介导的遗传转化方法,对MtROP5启动子的表达模式以及MtROP5的功能进行了分析。【结果】克隆了MtROP5翻译起始位点上游2.1kb左右预测的启动子序列,MtROP5启动子驱动GUS在根系的各个部位中都有表达,在维管束组织和侧根起始的分生组织中表达较强,并且其启动子转录活力在受到根瘤菌侵染后诱导增强表达;MtROP5的过量表达和组成型激活突变均能显著促进根毛的伸长,相比对照转化根系,根毛长度分别增长了74.6%和54.8%,而通过RNAi干扰降低MtROP5的转录水平后,根毛的生长发育明显受到了抑制,其转化根系的根毛缩短了47.6%,但MtROP5显著性失活突变转化根系的根毛长度与对照转化根系没有显著差异。【结论】蒺藜苜蓿MtROP5调节了根毛的生长发育,并可能参与宿主植物与根瘤菌共生互作早期的信号传导过程。     

猪不同基因组DNA模板来源和浓度与微卫星位点扩增效果的比较研究

[目的]探讨全部使用猪毛发作为试验材料进行遗传多样性研究的可行性。[方法]以贵州黔北黑猪中的3头成年母猪为试材,分别拔取100、200根毛发和抽取5 ml全血进行DNA提取。以微卫星引物S0225和S0227为引物,设置1.0、2.5、5.0 ng/μl 3种模板浓度进行PCR扩增。[结果]采用2.5、5.0 ng/μl的模板浓度均可获得较好的PCR产物,用于聚丙烯酰胺凝胶电泳对扩增基因有较好的分辨效果。毛发DNA和血样DNA的PCR产物数量和质量均无明显差异。毛发数量与所提取DNA的浓度无直接关系。利用21个全毛样PCR产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,均可观察到清晰的条带。[结论]该研究进一步证明全毛样DNA可作为猪遗传多样性研究的材料。     

蒺藜苜蓿小G蛋白ROP在共生过程中的作用：2. MtROP5调节根毛生长发育的功能分析#br#

【目的】对蒺藜苜蓿MtROP5的功能进行研究,为阐明植物ROP在共生互作过程中的调控机制奠定基础。【方法】采用PCR方法克隆MtROP5的启动子序列,并构建了MtROP5的相关表达载体。利用发根农杆菌介导的遗传转化方法,对MtROP5启动子的表达模式以及MtROP5的功能进行了分析。【结果】克隆了MtROP5翻译起始位点上游2.1 kb左右预测的启动子序列,MtROP5启动子驱动GUS在根系的各个部位中都有表达,在维管束组织和侧根起始的分生组织中表达较强,并且其启动子转录活力在受到根瘤菌侵染后诱导增强表达;MtROP5的过量表达和组成型激活突变均能显著促进根毛的伸长,相比对照转化根系,根毛长度分别增长了74.6%和54.8%,而通过RNAi干扰降低MtROP5的转录水平后,根毛的生长发育明显受到了抑制,其转化根系的根毛缩短了47.6%,但MtROP5显著性失活突变转化根系的根毛长度与对照转化根系没有显著差异。【结论】蒺藜苜蓿MtROP5调节了根毛的生长发育,并可能参与宿主植物与根瘤菌共生互作早期的信号传导过程。     

沙狐直针毛的显微形态学特征观察

[目的]为沙狐毛的进一步鉴别、研究及犬科各属间亲缘关系的鉴定提供依据。[方法]应用扫描电镜及偏振光显微镜,对沙狐背部和腹部直针毛的髓质指数、鳞片花纹类型进行观察。[结果]沙狐背部直针毛的髓质指数为81.7%,腹部为72.0%,2个部位的髓质指数区间为71.4%~82.9%,说明同科动物的髓质指数存在一定的差异。沙狐背部、腹部直针毛的鳞片排列顺序基本相同,长瓣型鳞片所占的比例最大,其次是杂波型和方瓣型,冠状型仅见于毛尖,扁平型仅见于毛根部,过渡型所占比例较小,与豺同部位的直针毛鳞片类型相比,差别明显。[结论]动物毛发的鳞片类型及髓质指数可为动物的分类鉴别提供参考。     

貉直针毛的显微形态学特征研究

[目的]为貉毛的进一步鉴别、研究及犬科各属间的亲缘关系的鉴定提供依据。[方法]应用扫描电镜及偏振光显微镜,对貉背部和腹部的直针毛的毛髓质指数和鳞片类型进行观察,同时观察了貉颈部和臀部直针毛的髓质指数。[结果]貉背部直针毛的髓质指数为65.7%,腹部为52.3%,颈部为35.1%,臀部为36.4%,4个部位的髓质指数区间为34.5%~66.7%。貉背部、腹部的直针毛的鳞片排列顺序基本相同,背毛的主要鳞片类型是杂波型和杂瓣型,腹毛的主要鳞片类型为杂波型,背毛、腹毛的毛尖均为冠状型,毛根均为扁平型,与其他犬科动物同部位的直针毛鳞片类型相比,差别明显。[结论]动物毛发的鳞片类型及髓质指数可为动物的分类鉴别提供参考。     

东北黑熊不同基因组DNA模板来源的比较研究

文章主要探讨使用黑熊毛发作为试验材料替代其他生物样品进行遗传多样性研究的可行性,筛选满足试验需求的最佳使用量.以延边白头山制药有限公司养熊场的4头成年东北黑熊为试验材料,分别5次拾取2头黑熊铁笼内散落的带有毛囊的50、100根毛发,对麻醉的2头黑熊抽取全血3 mL以及皮下结缔组织1 g,并分别采用不同方法提取基因组DNA.以微卫星位点ABB12和UT35为引物,设置20、50、100 ng·μL-13种模板浓度进行PCR扩增.结果显示,采用50 ng·μL-1的模板浓度均可获得较好的PCR产物,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对扩增基因具有较好的分辨效果.毛发DNA、血液DNA和组织DNA的PCR产物数量和质量并无明显差异.毛发数量与所提取的DNA浓度有一定关系.利用15个毛发DNA的PCR产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,均可观察到清晰的条带.研究结果进一步证明毛发DNA可作为东北黑熊遗传多样性研究的试验材料.     

Three distinct genes in human DNA related to the transforming genes of mammalian sarcoma retroviruses

Southern blot hybridization was used to identify human and other vertebrate DNA sequences that were homologous to cloned DNA fragments containing the oncogenic nucleic acid sequences of three different type C mammalian retroviruses (simian sarcoma virus, the Snyder-Theilen strain of feline sarcoma virus, and the Harvey strain of murine sarcoma virus). Each onc gene counterpart has a single genetic locus, which probably contains non-onc intervening sequences. The human DNA sequences may represent genes important to cell growth or cell differentiation, or both. Their identification and isolation may allow elucidation of their role in these processes and in neoplasias.