猪瘟病毒DNA疫苗的构建及动物免疫试验

利用DNA重组技术将猪瘟病毒（CSFV） C株E2囊膜蛋白全长基因克隆到真核表达载体pcDNA4.0的CMV启动子下游,采用磷酸钙转染法将重组质粒转入293T细胞,流式细胞仪(FACS)检测293T细胞瞬时表达了E2囊膜蛋白。将构建的重组质粒肌肉注射BALB/c小鼠,用流式细胞仪和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测证明成功诱导小鼠产生了抗E2蛋白的抗体,为下一步利用DNA疫苗免疫小鼠研制抗猪瘟病毒单克隆抗体打下基础。     

NDV单抗针对多肽抗原的鉴定

经对液氮保存的抗鸡新城疫病毒单抗杂交瘤细胞株进行复苏、再克隆,并用ELISA 和IIF筛选,得到24 株分泌力较强的细胞株。将这些细胞株再接种BALB/C小鼠,取其腹水进行预处理,测其ELISA 效价、IIF效价,并用Westernblotting 测定它们所针对的中国标准强毒株F48 E8 的多肽抗原表位。测得的结果均为针对血凝素-神经氨酸酶的单抗     

鸡T细胞特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

以鸡胸腺细胞免疫ＢＬＡＢ／ｃ小鼠,进行细胞融合,获得了１５株杂交瘤克隆株,其中有５株（１Ｂ６、１Ｃ５、３Ｅ４、９Ｈ６、５Ｅ１０）杂交瘤克隆抗体（ＭｃＡｂｓ）只对鸡胸腺细胞和外周血Ｔ细胞发生特异性反应。ＷｃｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析表明,这组ＭｃＡｂｓ反应的膜抗原分子量为６０～６５ＫＤ,该抗原分布于６３３～７２４％的胸腺细胞、１７３％～２４５％的脾细胞,２３％～２７％的外周血淋巴细胞,而法氏襄细胞的反应性不超过１３％。以此ＭｃＡｂｓ作诊断试剂,对禽类Ｔ细胞分离、纯化及Ｔ细胞亚类鉴定提供了重要的研究手段。     

H5亚型AIV HA抗原表位重组蛋白McAbs的制备及应用

目的以H5亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的血凝素(HA)抗原表位重组表达蛋白为抗原,探索H5亚型AIV单克隆抗体制备的简便有效途径。方法利用H5亚型AIV的HA抗原表位原核表达重组蛋白为抗原,4次免疫8～10周龄雌性BALB/c小鼠后,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA方法筛选能分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的特性及初步应用价值进行测试。结果得到一株能稳定分泌针对H5亚型AIVHA抗原表位的特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株,单克隆抗体ELISA效价达1:5×104,为具有IgK轻链的IgM亚类。该单克隆抗体能特异性地与H5亚型AIV产生肉眼可见的WesternBlot免疫印迹反应,与其它供试的禽病抗原无反应。H5N1亚型AIV阳性血清能有效阻断辣根过氧化酶标记的单克隆抗体与HA抗原表位重组蛋白的结合。结论本研究探索出一条利用H5亚型AIV的HA抗原表位重组表达蛋白为抗原的单克隆抗体制备的简便、高效途径,所制备的单克隆抗体稳定性好、效价高、特异性强,在H5亚型禽流感病毒及其血清学检测中有较高的应用价值。     

用单克隆抗体鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株

应用ＰＲＲＳＶ单克隆抗体,采用直接与间接免疫荧光抗体试验对分离获得的ＰＲＲＳＶ６个毒株进行了鉴定,结果所有分离毒株均能被单克隆抗体（ＳＤＯＷ１７、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ）所识别,呈现特异荧光,６个分离毒株均能与仅识别美洲型ＰＲＲＳＶ的单克隆抗体Ｆ反应,结果表明６个分离毒株均属于美洲型ＰＲＲＳＶ。利用微量细胞培养对分离毒株ＴＣＩＤ５０测定结果表明,６个分离毒株的ＴＣＩＤ５０分别为１０－７．５／０．１ｍｌ、１０－７．５／０．１ｍｌ、１０－７．５／０．１ｍｌ、１０－７．７５／０．１ｍｌ、１０－７．２５／０．１ｍｌ、１０－６．２５／０．１ｍｌ。病毒感染细胞的超薄切片电镜观察表明,在感染细胞浆内可见典型的ＰＲＲＳＶ病毒粒子,呈球形或椭圆形,直径约为６０ｎｍ左右,可见囊膜。     

抗狂犬病毒单克隆抗体的纯化及标记

对一株稳定、特异、高效的单克隆抗体（mAb）进行了纯化和荧光素（FITC）的标记,利用标记产物与已有的抗狂犬病毒核蛋白单克隆抗体标记物相比较,效果良好,二者可以结合（或单独）使用;应用标记好的荧光抗体与FITC-抗狂犬病毒免疫球蛋白比较进行血清样品效价测定实验,来确定纯化、标记后的单克隆抗体的灵敏度,结果表明本实验制备的单克隆抗体与FITC-抗狂犬病毒免疫球蛋白具有相同的灵敏度,该单克隆抗体测得的血清样品效价结果与FITC-抗狂犬病毒免疫球蛋白测得的结果相同。因此,此荧光抗体可应用于狂犬病病毒检测（FAT）、病毒毒力测定（TCID50）、中和抗体实验（FAVN）等方面的检测实验,此荧光抗体可为狂犬病的相关研究提供有力的保障。     

单克隆抗体夹心ELISA检测蚕豆萎蔫病毒研究

利用 ２ 株特异性单抗,建立了检测蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）的灵敏度高、特异性好的单抗夹心ＥＬＩＳＡ 方法⒚经测定,ＭｃＡｂ 最适包被浓度为０４ μｇ／ｍ Ｌ,ＨＲＰＭｃＡｂ 最佳工作浓度为１∶２ ０００,该方法最小检出浓度为０１６ μｇ／ｍ Ｌ,与几种常见的病毒无交叉反应⒚对杭州地区的 １４０ 多个样本进行了检测,发现蚕豆、豌豆中ＢＢＷ Ｖ 的阳性率达 ８０％ ⒚     

单克隆抗体ELISA双抗体夹心法与ELISA间接法检测小鼠肝炎病毒抗体的比较

用辣根过氧化物酶标记的抗小鼠肝炎病毒(MHV)单克隆抗体(McAb),建立了ELISA 双抗体夹心法,并与 ELISA 间接法检测小鼠血清中的 MHV 抗体进行了比较。发现两种方法在检出率、特异性、稳定性方面并无明显差异,但由于间接法操作更为简便,因此认为,检测血清中 MHV 抗体采用间接法较好。     

应用单克隆抗体鉴别水稻白叶枯病菌血清型的研究

从已建立的15株稳定分泌抗水稻白叶枯病原细菌的单抗杂交瘤细胞株中筛选出4株,用其抗体采用琼脂双扩散和酶联免疫吸附试验检测了作者从采集的病叶分离和从各地收集的水稻白叶枯病菌菌株63株,将其分为4个血清型,其结果与常规多抗血清划分的血清型一致.并运用免疫电泳和琼脂双扩散试验比较了各血清型之间的差异,其结果表明,单抗较多抗特异性强,在鉴别血清型方面较优越.     

溴苯腈单克隆抗体的制备纯化与性能考察

以人工合成溴苯腈免疫原免疫BALB/CF1小鼠,采用杂交瘤技术制备了3株能稳定分泌抗溴苯腈单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用培养扩增后的各建株细胞诱导小鼠生长腹水,腹水效价达10-6～10-7。琼脂双扩试验表明,各单抗蛋白均为IgG,抗体蛋白10B6为IgG1亚类蛋白,3D6和8H2均为IgG2a型亚类蛋白。用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体腹水,对纯化的单抗进一步做交叉反应试验,与其他苯腈类农药交叉反应率低于10%,结果表明该单抗有较好的特异性,可用于对溴苯腈的酶联免疫检测,线性检测范围为10～1000μg·kg-1,溴苯腈检测限为10μg·kg-1。