2010-2016年四川省食品动物源大肠杆菌的耐药性研究

【目的】了解2010-2016年四川省食品动物源大肠杆菌产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)情况及其耐药基因的变迁。【方法】以2010―2016年收集的444株食品动物源大肠杆菌(鸡源225株，猪源219株)为对象，采用纸片扩散法和微量肉汤稀释法分别检测其产ESBLs情况和药物敏感性；采用PCR测序法和脉冲场凝胶电泳(PFGE)检测携带ESBLs菌株的基因型特征和部分菌株的亲缘关系。【结果】444株大肠杆菌中，产ESBLs菌株的检出率为27.7%，其中鸡源菌和猪源菌检出率分别为42.2%和12.8%。2010-2016年产ESBLs菌株从16.9%升高至40.4%，鸡源菌株ESBLs检出率随时间变化比猪源菌更明显；ESBLs阳性菌株对大多数药物的耐药率显著高于阴性菌株，且多重耐药性问题更严重；产ESBLs菌株携带的耐药基因以bla_TEM和bla_CTX-M为主，并以bla_TEM-1(63.3%)、bla_TEM-52(32.1%)、bla_CTX-M-55(42.2%)、bla_CTX-M-65(27.8%)和bla_CTX-M-14(21.1%)为主要流行亚型，且检出率及ESBLs基因亚型复杂性呈逐年上升趋势；ESBLs阳性菌株有广泛PFGE谱型，即便携带相同基因型的菌株也不存在亲缘关系。【结论】四川食品动物源大肠杆菌产ESBLs菌株检出率及其耐药基因亚型的复杂程度呈逐年上升趋势，ESBLs是造成多重耐药性的主要原因，ESBLs耐药基因以水平传播为主。     

四川省食品动物源大肠杆菌mcr-1与ESBLs基因共转移分析

为了解四川省食品动物源大肠杆菌mcr-1耐药基因流行情况,及其与超广谱β-内酰胺酶基因(ESBLs)共存和共转移的特征,采用微量肉汤稀释法检测菌株对不同抗菌药物的敏感性;采用PCR检测菌株mcr-1,以及mcr-1阳性菌株中ESBLs基因类型;采用质粒接合转移试验分析了mcr-1与ESBLs基因共转移的耐药机制。结果显示:190株大肠杆菌的mcr-1检出率为36.84%,75.71% mcr-1阳性菌株中同时检出ESBLs基因,主要以blaTEM-1、blaCTX-M-55和blaCTX-M-14为优势基因;mcr-1阳性菌对氨曲南(ATM)、头孢噻肟(CTX)和多黏菌素E(COL)耐药率极显著高于mcr-1阴性菌(P<0.01);质粒转移率为47.14%,其中获得mcr-1和ESBLs基因共转移的接合子表现出与供体菌相同的耐药表型及耐药基因。综上,在四川省食品动物源大肠杆菌中,mcr-1与ESBLs基因共存现象广泛存在,且耐药基因易发生水平传播,对菌株多重耐药性的产生具有重要意义。     

鸭大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶检测(ESBLs)及药物敏感性测定

对国内7个省份临床分离的32株鸭大肠杆菌进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检测及药物敏感性研究。结果表明,32株分离的鸭大肠杆菌中产ESBLs菌株7株,阳性检出率为21.87%;产ESBLs菌株对常用头孢三代及半合成青霉素类药物的敏感率低于42.9%,耐药率则高于28.6%,对阿莫西林、氨苄西林、头孢噻呋的耐药率高达100%。产酶菌株和非产酶菌株对新型头孢四代产品头孢吡肟及碳青霉烯类药物亚胺培南、美罗培南的敏感率高于96%。加酶抑制剂的β-内酰胺类抗生素如阿莫西林/棒酸、氨苄西林/舒巴坦、头孢哌酮/舒巴坦等对产酶菌株和非产酶菌株的敏感率全部高于未加酶抑制剂的单方药物。产ESBLs菌株存在多重耐药现象,酶抑制剂能够部分解决此类耐药性问题。     

禽致病菌ESBLs和AmpC酶的检测及药敏分析

用全自动微生物鉴定系统(VITEK-32)鉴定了禽分离致病菌,分别进行了β-内酰胺酶(BLA)、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、AmpC酶的检测,并用试管两倍稀释法测定了各种抗生素对非产酶菌、产ESBLs菌及产AmpC菌的抗菌活性。结果表明,鉴定分离的20株致病菌有大肠埃希菌15株、阴沟肠杆菌1株、铜绿假单胞菌1株、法氏柠檬酸杆菌1株、肺炎克雷伯菌1株及鹑鸡肠球菌1株,其中法氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯菌及鹑鸡肠球菌系兽医上首次检出。报道所分离的20株致病菌均产β-内酰胺酶,其中产ESBLs 9株,同时产ESBLs和AmpC酶1株。产酶菌株对抗生素的耐药性严重,而抗生素/抑制剂联用能降低药物对细菌的MICs。     

鸡源大肠杆菌浮游菌与生物被膜菌超广谱β-内酰胺酶的检测

采用平板培养法建立鸡源大肠杆菌生物被膜的体外模型,银染后经显微镜观察鉴定,并用双纸片协同法检测浮游菌与生物被膜菌超广谱β-内酰胺酶的产生情况,同时用双光束紫外分光光度计测定超广谱β-内酰胺酶的活性,为研究鸡源大肠杆菌生物被膜的耐药机制奠定方法学基础。结果表明,27株鸡源大肠杆菌均形成了生物被膜,肉眼可以看到硅胶片上有黑色膜样物质形成,用银染法处理过的生物被膜菌在显微照相系统下可清楚地看到生物被膜的结构;鸡源大肠杆菌生物被膜中超广谱β-内酰胺酶的检出率(70.4%)高于浮游菌的检出率(55.6%),且生物被膜菌中超广谱β-内酰胺酶的酶活性((0.71±0.23)U.mg-1)高于浮游菌的酶活性((0.42±0.12)U.mg-1),前者是后者的1.73倍。     

动物源大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶与头孢菌素酶基因型分析

为了解重庆地区动物源大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)及头孢菌素酶(AmpC)基因型的分布,利用初筛及表型确认方法,从临床分离的192株仔猪白痢大肠杆菌、65株奶牛乳腺炎大肠杆菌、69株鸡大肠杆菌中筛选出19株产ESBLs、6株产ArnpC酶大肠杆菌,并应用PCR扩增及PCR产物测序方法进行ESBLs及AmpC基因型分析.结果显示,重庆地区动物源大肠杆菌携带TEM型、CTX-M型、DHA-1型和CMY-2型基因的阳性率分别为2.15%、5.21%、0.61%和0.61%.其中,有5株同时携带2种基因.而DHA-1型基因为国内兽医临床首次检出,获得GenBank登录号为FJ386455.结果提示,重庆地区以TEM型和CTX-M型β-内酰胺酶为主,且产ESBLs与AmpC酶大肠杆菌为多重耐药菌株,需引起兽医临床的高度重视.     

鸡源性大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶基因型分布

摘要: 检测鸡大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的基因型并了解辽宁省鸡源性大肠杆菌产ESBLs基因型分布。对大连4个地区不同鸡场临床分离32株产ESBLs鸡大肠杆菌分别用TEM、OXA、CTX-M和SHV等4种通用引物进行PCR扩增确定其基因型。结果显示32株鸡大肠杆菌均检出TEM型基因、12株检出CTX-M型基因、2株检出OXA型、未检出SHV型;TEM+CTX-M双阳性检出11株、TEM+OXA双阳性检出2株。TEM基因亚型占检出比例最高（100％）。结论：目前辽宁省产ESBLs鸡大肠杆菌基因亚型以TEM为主,其次为CTX-M型,未发现SHV型;以TEM+CTX-M双阳性检出率最高（34.4％）。     

中西结合治疗产ESBLs大肠杆菌引起的种鸭输卵管炎

采用实验室方法分离鉴定了种鸭输卵管炎细菌,并对分离菌进行超广谱β-内酰胺酶(ES-BLs)检测和其时24种抗菌药的敏感性测定.结果显示,分离细菌为产ESBLs大肠杆菌.药敏试验结果表明,该菌对兽医临床中常用的β-内酰胺类抗生素、氟喹诺酮类、氯霉素类、氨基糖苷类等均产生耐药性;对黏杆菌素、亚胺培南、美罗培南敏感;β-内酰...     

猪源大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶的检测及其耐药性分析

为了解辽宁地区猪源大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况及耐药情况,采用纸片扩散法对从辽宁地区分离到的65株大肠埃希菌进行ESBLs检测及耐药性分析,并用PCR方法对确证的产ESBLs大肠埃希菌进行TEM、CTX-M、OXA和SHV基因型检测。结果发现,在65株大肠埃希菌中,20株大肠埃希菌产ESBLs,阳性率为30.77%;在20株产ESBLs大肠埃希菌中,9株为TEM型,1株为CTX-M型,8株为同时携带TEM型和CTX-M型,1株为同时携带TEM型和OXA型,1株为同时携带TEM型、CTX-M型和OXA型。药敏试验结果表明,产ESBLs菌株的耐药率明显高于非产ESBLS菌株,且产ESBLs菌株均为多重耐药菌株。可见,辽宁地区产ESBLs猪源大肠埃希菌的检出率较高,流行的主要基因型为TEM型和TEM+CTX-M型。     

舒巴坦和EDTA使产ESBLs鸡大肠杆菌恢复对抗菌药物敏感性

摘要：为测定舒巴坦和EDTA对抗菌药物体外抗菌活性的影响,采用微量肉汤稀释法,测定10种抗菌药物及其与舒巴坦、EDTA、舒巴坦 EDTA联用对产ESBLs鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)。结果表明,舒巴坦和EDTA可以增强部分抗菌药对产ESBLs鸡大肠杆菌的抗菌活性,产ESBLs菌对常用第三代头孢头孢噻呋、头孢噻肟的耐药率高于80%,对氟喹诺酮类、多西环素、氟苯尼考、阿米卡星、磷霉素的耐药率高达100%,对第四代头孢头孢吡肟的敏感率为100%;对加舒巴坦的头孢噻肟、氟苯尼考、阿米卡星及磷霉素的耐药率低于未加舒巴坦的单方药物,分别为0、88.9%、88.9%、0;对加EDTA的加替沙星、多西环素、氟苯尼考、阿米卡星及磷霉素的耐药率低于未加EDTA的单方药物,分别为30%、11.1%、22.2%、11.1%、0;多数菌株对加舒巴坦 EDTA的阿米卡星、磷霉素、氟苯尼考、头孢噻呋的耐药率较加舒巴坦或EDTA进一步降低,耐药率均为0。