猪极体的排出与退化规律及其活性保存

哺乳动物卵母细胞二次减数分裂分别产生第一极体(PbⅠ)和第二极体(PbⅡ),极体(Pb)含有与卵母细胞相似的遗传物质。为探索猪Pb的排出与退化规律,并建立有效的Pb保存方法,从屠宰后的母猪卵巢中采集卵母细胞进行体外成熟培养及体外受精,分别对PbⅠ和PbⅡ的排出与退化规律及其在不同保存温度下的存活情况进行研究。结果表明:PbⅠ在卵泡卵母细胞体外培养40 h时排出率最高,PbⅠ在39℃条件下保存6 h形态正常率为85.5%,但存活率只有18.2%,4℃保存40 h存活率为85.0%,-20℃保存168 h存活率为95.0%,-196℃超低温保存1 344 h存活率和形态正常率分别达89.1%和97.8%。PbⅡ在卵母细胞受精后20 h排出率最高,PbⅡ在39℃条件下保存16 h形态正常率为69.0%,但存活率只有34.5%,4℃保存30 h存活率为87.5%,-20℃保存240h存活率为84.6%,-196℃超低温保存1 344 h存活率和形态正常率分别达87.0%和95.7%。     

猪GRP78基因克隆、生物信息学分析及组织表达谱研究

本研究旨在克隆猪葡萄糖调节蛋白78（glucose-regulated protein 78，GRP78）基因，并进行生物信息学分析，探讨其在猪不同组织中的表达情况。根据GenBank上公布的猪GRP78基因序列（登录号：XM_001927795.6）设计引物，PCR扩增及测序获得猪GRP78基因CDS序列，使用在线软件分析GRP78的理化性质、跨膜结构、信号肽、疏水性、保守结构域、二级结构和三级结构，并进行同源性比对及系统进化树构建，利用实时荧光定量PCR方法检测猪GRP78基因在各组织中的表达情况。结果显示，猪GRP78基因CDS区长1 965 bp，可编码654个氨基酸。生物信息学分析表明，GRP78理论分子质量为72.3 ku，等电点（pI）为5.06，半衰期为30 h，其水溶液在280 nm处的消光系数为30 495，肽链N端为蛋氨酸（Met），不稳定系数为32.39，属于稳定蛋白。脂肪系数为85.40，总平均疏水指数为-0.496，无跨膜结构，存在信号肽序列，说明该蛋白属于分泌型蛋白；GRP78蛋白只包含1个超家族保守结构域：HSP70结构域。蛋白二级结构分析显示，GRP78蛋白中α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲分别为40.06%、20.49%、8.10%和31.35%。同源性比对结果显示，猪GRP78基因与人（登录号：NM_005347.4）、小鼠（登录号：NM_001163434.1）、大鼠（登录号：NM_013083.2）、山羊（登录号：XM_005687138.3）、牛（登录号：NM_001075148.1）核苷酸序列的同源性分别为93%、91%、90%、95%、95%，氨基酸序列的同源性分别为99%、98%、98%、99%、99%，各个物种之间GRP78基因保守性较高。实时荧光定量PCR结果显示，GRP78基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小肠、胃、卵巢、输卵管、乳腺、小脑、大脑、垂体等组织中均有表达，在心脏、脾脏、肺脏中相对高表达。本研究结果为今后深入研究GRP78基因的生物学功能提供了基础材料。     

花生栽培技术及病虫害防治措施探讨

正花生是山东省的主要油料作物之一,常年种植面积1100万亩左右,是各地农民的主要经济收入之一。然而,花生种植在各个地区的病虫害发生程度不同,这在一定程度上影响了花生的品质和产量。要想花生获得优质高产,必须懂得花生栽培技术和病虫害防治技术。为了规范花生种植,笔者将多年从事花生种植工作的实践经验总结如下,供花生种植户参考。1花生种植技术1.1土地整理花生是地下结果的作物,需要较深的土层,做到上松下     

姜黄素与根皮素联合作用对金黄色葡萄球菌的抑菌作用研究

试验旨在研究姜黄素与根皮素联合使用对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑菌作用。采用微量肉汤法测定亚抑菌浓度；菌落分析仪测定抑菌圈大小；酶标仪微量法测定OD₂₆₀和OD₂₈₀数值、碱性磷酸酶活力(AKP)、乳酸脱氢酶活性(LDH);SDS-PAGE凝胶电泳检测金黄色葡萄球菌菌体总蛋白。结果表明：与对照组相比，15.625μg/m L姜黄素、根皮素分别作用于金黄色葡萄球菌16 h时，均显著抑制其生长；与姜黄素、根皮素单独处理组相比，15.625μg/m L姜黄素和根皮素联合作用显著抑制金黄色葡萄球菌生长；与对照组相比，姜黄素、根皮素单独与联合处理均显著增加OD₂₆₀、OD₂₈₀数值和AKP活力、降低LDH活性以及减少菌体胞内总蛋白含量。综上，姜黄素与根皮素联合使用对金黄色葡萄球菌的抑菌作用优于单独使用。     

猪SENP1基因克隆、生物信息学分析与表达研究

试验旨在对猪SUMO特异性蛋白酶1(sentrin-specific protease 1,SENP1)基因CDS区进行克隆和生物信息学分析,并探讨SENP1基因在乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染PK15细胞后的表达情况。根据GenBank中公布的猪SENP1基因预测序列(登录号:XM_013997974.2)设计特异性引物,通过RT-PCR和T/A克隆技术对猪SENP1基因CDS区序列进行克隆测序,并进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR分析猪SENP1基因在JEV感染PK15细胞不同时间点(0、12、24、36、48 h)的表达情况。结果显示,猪SENP1基因CDS序列全长2 034 bp,共编码677个氨基酸。序列比对和系统进化树分析结果表明,猪SENP1蛋白序列和山羊、犬、人、牛的相似性分别为94.8%、94.2%、93.9%和93.8%,说明在这些物种中SENP1的保守性较强;猪与犬的SENP1分子亲缘关系较近。生物信息学分析结果显示,猪SENP1蛋白相对分子质量为76 825.76,等电点为8.53,体外半衰期为30 h,不稳定系数为53.59,总平均亲水指数为－0.622。SENP1蛋白不含信号肽序列,无跨膜结构域。二级结构分析结果显示,SENP1蛋白中α-螺旋、无规则卷曲、延伸链和β-转角分别占31.31%、46.68%、16.25%和5.76%。三级结构分析结果显示,猪SENP1蛋白中存在8个α-螺旋区和7个β-转角区。实时荧光定量PCR结果显示,猪SENP1基因在JEV感染的PK15细胞中呈现上调表达趋势,其中在感染后48 h SENP1基因表达量显著高于对照组(P<0.05)。本试验结果为后续深入研究SENP1基因功能提供了参考。     

沙棘茶中脂肪酸的分析与测定

[目的]分析并测定沙棘茶中的脂肪酸。[方法]采用索氏提取法提取沙棘绿茶和沙棘红茶中的脂肪酸,并通过气质联用法对脂肪酸的化学组成及含量进行了测定分析。[结果]气质检测结果表明,2种沙棘荼的脂肪酸化学组成相同,均含有十四烷酸（肉豆蔻酸）、十五烷酸、十六烷酸（棕榈酸）、十八碳二烯酸（亚油酸）、十八碳烯酸（油酸）、十八碳三烯酸（亚麻酸）、十八烷酸（硬脂酸）、二十烷酸（花生酸）和二十烷烯酸等9种脂肪酸。[结论]该方法准确、简便,适用于沙棘茶中脂肪酸的分析和含量测定。     

猪DNM2基因克隆、序列分析与组织表达谱研究

本研究旨在对猪发动蛋白2（dynamin-2,DNM2）基因进行克隆和生物信息学分析,并探讨DNM2基因在猪不同组织中的表达情况。利用RT-PCR结合RACE方法克隆猪DNM2基因cDNA部分序列,与猪表达序列标签进行拼接,获得猪DNM2基因cDNA全长,并对其进行生物信息学分析,同时采用实时荧光定量PCR检测DNM2基因在猪不同组织中的表达情况。结果表明,猪DNM2基因的开放阅读框（open reading fram,ORF）为2 616 bp,共编码871个氨基酸。DNM2相对分子质量为98 071.30,等电点（pI）为7.04;无信号肽和跨膜结构域,即该蛋白不属于分泌蛋白;DNM2蛋白的二级结构预测发现,构成α-螺旋、β转角、无规则卷曲、延展链的氨基酸数量分别为361、53、335和122个。多重分析结果显示,猪DNM2基因与牛、人、小鼠、大鼠的序列同源性分别为92.6%、91.8%、88.6%和89.3%;进化树分析表明,DNM2基因在物种间具有较高的保守性,不同物种间DNM2基因序列的差异符合物种间的进化性。实时荧光定量PCR结果显示,DNM2基因在脾脏中表达量较高,在乳腺、腿肌、输卵管、卵巢和子宫中表达量均较低。本研究结果为今后深入研究DNM2基因的生物学功能奠定了基础。     

当前我国农村养老状况之我见

老龄问题是指保障老年人的各种权益问题以及老龄化给社会发展带来的问题。它有两层含义：第一层意思是人口老龄化过程本身规律性发展必然引起的一些社会问题。第二层意思是人口老龄化过程本身非规律性发展所引起的一些社会问题。随着老年人群在总人口中比重的增大,必然会对社会提出一些相应的要求,对社会发展产生重大影响。     

论造林绿化工程中苗木移栽技术的应用

在生态环境营造和城市绿化美化等项目建设过程中,造林绿化工程是重要内容,而苗木移栽施工是项目建设的基础环节,掌握相关的栽培技术,对提高绿化苗木的成活率来说非常重要。本文结合陕南地区造林绿化工程建设的具体实践情况,介绍了苗木移栽技术在造林绿化中的作用,提出了一些新方法和新思路,对苗木移栽过程提高存活率有很好的借鉴价值。     

猪卵泡卵母细胞的体外成熟与体外受精

本试验对猪卵泡卵母细胞不同体外成熟培养时间、不同精子获能时间、不同精卵共孵育时间对体外受精的影响进行了研究。结果表明,体外成熟培养44 h左右,精子获能时间在1～2 h之间,精卵共孵育时间在6～8 h之间,受精后卵裂率最高。