猪极体的排出与退化规律及其活性保存

哺乳动物卵母细胞二次减数分裂分别产生第一极体(PbⅠ)和第二极体(PbⅡ),极体(Pb)含有与卵母细胞相似的遗传物质。为探索猪Pb的排出与退化规律,并建立有效的Pb保存方法,从屠宰后的母猪卵巢中采集卵母细胞进行体外成熟培养及体外受精,分别对PbⅠ和PbⅡ的排出与退化规律及其在不同保存温度下的存活情况进行研究。结果表明:PbⅠ在卵泡卵母细胞体外培养40 h时排出率最高,PbⅠ在39℃条件下保存6 h形态正常率为85.5%,但存活率只有18.2%,4℃保存40 h存活率为85.0%,-20℃保存168 h存活率为95.0%,-196℃超低温保存1 344 h存活率和形态正常率分别达89.1%和97.8%。PbⅡ在卵母细胞受精后20 h排出率最高,PbⅡ在39℃条件下保存16 h形态正常率为69.0%,但存活率只有34.5%,4℃保存30 h存活率为87.5%,-20℃保存240h存活率为84.6%,-196℃超低温保存1 344 h存活率和形态正常率分别达87.0%和95.7%。     

玉米种子发芽试验

玉米种子单粒播种已经成为一种趋势,但同时也要求种子有较高的成苗率,影响其高低的一个主要原因是种子的活力。为不断适应新营销模式,试验以不同品种、不同年份、不同类型的玉米种子在一定条件下处理的表现,以期选择适宜检测的方法为生产经营者提供更有价值的参考数据。     

猪极体的保存研究

将从屠宰场采集的猪卵巢卵母细胞进行体外成熟培养和体外受精,得到猪第一极体和第二极体.通过形态学观察和台盼蓝染色,探讨不同保存温度(39 ℃、4 ℃、-20 ℃、-196 ℃)下猪第一极体和第二极体的存活情况.试验结果表明:随着保存温度的降低,猪第一极体和第二极体的存活率随之升高.第一、二极体在39 ℃条件下大都在几小时内发生退化;4 ℃条件下保存40 h存活率为70%～80%;-20 ℃保存7 d时存活率达90%以上;而在液氮中保存1个月时,第一极体和第二极体的存活率仍接近90%.     

影响猪卵母细胞体外成熟的若干因素

介绍了以屠宰场废弃的猪卵巢为材料,通过系统技术途径得到猪早期胚胎的基本方法。重点探讨了不同发育阶段、不同培养系统、不同添加成分培养液以及不同培养时间等因素对猪卵母细胞体外成熟的影响,并对其体外受精卵裂能力进行了比较与评价。结果表明,采用mTCM199作为体外成熟基础培养液,并添加直径5~8 mm卵泡的卵泡液(pFF)和雌二醇(E2),直径为2~8 mm的卵巢卵泡COCs经体外成熟培养40 h,可得到较高的成熟率(66.7%)和体外受精卵裂率(29.2%)。本研究初步建立了猪2-细胞~4-细胞早期胚胎的体外批量生产技术,可望进一步改进和完善后应用于养猪业科研与生产实践。     

影响猪卵巢卵母细胞体外成熟的若干因素

介绍了以屠宰场废弃的猪卵巢为材料,通过系统技术途径得到猪早期胚胎的基本方法。新鲜的猪卵巢采集后,25～35℃条件下保存,在3h内进行卵泡卵母细胞与卵丘细胞复合体(COCs)采集与分级,对COCs中卵母细胞体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)及其受精卵体外发育(IVD)等关键技术环节进行了系统地探索,重点探讨了不同发育阶段(直径大小)卵泡卵母细胞、不同培养系统与添加成分以及不同培养时间等关键因素对猪卵母细胞IVM的影响,并对其IVF卵裂能力进行了比较与评价。实验结果表明,采用mTCM199作为基础成熟培养系统液,并添加ф5～8mm卵泡液(pFF)和雌二醇(E2),ф2～8mm卵巢卵泡COCs经IVM40h可得到较高的成熟率(66.7%)和IVF卵裂率(29.2%)。本研究初步建立了猪2-4-细胞早期胚胎的体外批量生产技术,可望进一步改进和完善,应用于养猪业科研与生产实践。     

猪第一极体核物质参与卵母细胞受精及其胚胎发育的研究

旨在探索猪卵母细胞第一极体核物质能否参与体外受精及其进一步的胚胎正常发育.第一极体(FPB)获自猪卵巢卵泡中卵丘卵母细胞复合体(COCs)体外成熟培养的MⅡ期卵母细胞.存活极体从成熟卵母细胞内分离后采用显微操作术注入去核卵母细胞胞质中.第一极体重组卵母细胞分别采用常规体外受精和单精子胞浆注射法进行受精,来自极体核重组的受精卵进行体外培养,观察和分析其进一步体外卵裂发育的能力.结果显示:极体显微操作重组的成功率约为80%,20%左右的重组卵母细胞于重组后的受精和发育培养过程中退化、崩解;常规体外受精和单精子注射后2-细胞卵裂率分别达到12.9%和29.8%.结论:猪第一极体核物质具有参与卵母细胞受精和进一步胚胎发育的能力.据此推测利用第一极体将有可能繁殖正常仔猪后代.