初步建立LAMP技术检测粪样内华支睾吸虫虫卵DNA的方法及反应条件优化

华支睾吸虫病(clonorchiasis)是由华支睾吸虫(Clonorchiasis sinensis)寄生于终末宿主人、哺乳动物肝胆系统内引起的以肝胆病变为主的一种重要的人畜共患寄生虫病,一般表现为消瘦、营养不良,严重影响人类健康以及畜牧业的发展。该病是我国最严重的食源性寄生虫病之一,已被卫生部列为我国重点防     

一起雏鹅发生鸡皮刺螨病的诊断与治疗

皮刺螨属于中门亚目（Mesostigmata）、皮刺科（Dermanyssidae）的皮刺螨属（Dermanyssus）。该属在我国记述有5种，即鸡皮刺螨（D．gallinae）、鼠皮刺螨（D．muris Hirst）、美洲皮刺螨（D．americanus Ewing）、短沟皮刺螨（D．brevirivulus）、五台...     

广西片形吸虫中间宿主—小土窝螺线粒体rrnL基因遗传多态性研究

为研究广西小土窝螺不同地理株线粒体大亚基（large subunit ribosomal rRNA,rrnL）基因的遗传多态性,对广西大片吸虫6个流行地区96个小土窝螺样品的rrnL基因进行PCR扩增,通过单链构象多态性（single strand conformation polymorphism,SSCP）技术筛选出具有代表性的样品进行克隆、测序,并用DNAStar 5.0及MEGA 4.0软件加以比对分析。结果显示,6个地区小土窝螺rrnL基因PCR扩增长度约500 bp,在长度为273 bp的序列中检测到15个变异位点,占核苷酸总数的5.49%。百色、南宁和桂林3个地区相同地理株间存在较大的遗传差异。种系发育分析表明,线粒体rrnL基因在一定程度上不是研究小土窝螺种群遗传变异的良好分子标记。本研究为阐明片形吸虫中间宿主—小土窝螺的种群遗传关系提供了基础数据。     

猪脑心肌炎病毒GXLC株的分离及其3D基因分子特征的分析

采集临床疑似脑心肌炎死亡仔猪的组织作为接种材料,接种于BHK-21细胞系,观察细胞病变（CPE）,并用RT-PCR和间接荧光抗体试验（IFA）进行鉴定,证实分离到1株脑心肌炎病毒（encephalomyocarditis virus,EMCV）,命名为GXLC株。应用RT-PCR方法扩增GXLC株的3D基因,扩增产物克隆入pMD18-T载体后进行测序,对获得的3D基因序列进行分析。序列分析结果表明,GXLC株3D基因全长1380 nt,编码460个氨基酸,含有7个抗原表位。同源性分析结果表明,GXLC株与国内外其它EMCV分离株3D基因核苷酸序列的同源性在84.7%～99.7%之间,氨基酸序列的同源性在96.1%～99.6%之间。遗传进化分析结果表明,基于3D基因核苷酸序列绘制的系统进化树可将所有EMCV分离株分成2个群：Ⅰ群和Ⅱ群,Ⅰ群可再细分为Ⅰa亚群和Ⅰb亚群,其中猪源EMCV在Ⅰ群和Ⅱ群中均有分布,而鼠源EMCV分布在Ⅰ群,人源EMCV分布在Ⅱ群;GXLC株与其它中国分离株均属于Ⅰa亚群。     

多重PCR技术在寄生虫病诊断上的应用及其建立方法的浅析

对于未知病原体感染和多病原体的混合感染,应用常规PCR方法往往需要多次扩增筛选,相对费时、费力。而多重PCR能够在同一反应体系内扩增多个靶序列,可进行多病原体的快速鉴定。目前多重PCR技术已广泛应用于病毒性、细菌性疾病的临床诊断,在寄生虫病诊断方面,多重PCR的应用也日渐增多,应用前景广阔。     

用链球菌疫苗免疫罗非鱼前后其差异表达基因的鉴定与分析

采用抑制性差减杂交技术（SSH）成功构建了罗非鱼O reochrom is nilotica被链球菌Streptococcus iniae疫苗免疫前后正、反两个淋巴细胞cDNA差减文库,富集了免疫过程中表达谱发生变化的淋巴细胞基因,并对文库进行了斑点杂交筛选、测序和ESTs初步分析。结果表明：文库富集了高丰度的差异表达基因,阳性率较高。正向文库中筛选得到21个免疫期间表达丰度上调的基因,其中1个基因与罗非鱼已知基因具有相似性,10个基因与其他鱼类已知基因相似,1个基因与其他物种已知基因具有相似性,9个为未知新基因;负向文库中筛选得到24个免疫期间表达丰度下调的基因,其中3个与罗非鱼已知基因具有相似性,15个与其他鱼类已知基因相似,6个为未知新基因。进一步功能注解发现,正向文库功能基因包括免疫信号传导相关蛋白、防御相关蛋白、肿瘤免疫相关蛋白和淋巴细胞相关蛋白,这些基因免疫后表达丰度升高,提高了机体免疫抵抗力。负向文库功能基因包括细胞免疫相关蛋白、感染相关蛋白和肿瘤发生相关蛋白,这些基因免疫后表达丰度降低,可以降低机体感染和发病几率。     

不同重悬细胞法在洗涤过程中对水牛外周血单个核细胞活率的影响

为了探讨在离心洗涤水牛外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell, PBMC）过程中以移液器吹打法和晃动离心管法重悬细胞对其活率的影响。对经密度梯度离心后初步收集到的PBMC,分别用移液器吹打和晃动离心管2种方法重悬细胞,离心洗涤后对细胞活率进行计数。结果发现,移液器吹打法得到的细胞活率为（74.9±2.6）%,而晃动离心管法使细胞活率达到（98.5±0.5）%,差异极显著（P<0.01）。说明在洗涤PBMC时,晃动离心管法重悬细胞能大大提高细胞活率,可为那些对细胞活率要求高的试验提供一个较为有效的方法。     

绵羊和水牛实验感染大片吸虫后外周血白细胞计数的分析

对绵羊和水牛在感染大片吸虫后外周血白细胞总数计数和白细胞分类计数(嗜酸性细胞、嗜中性细胞、嗜碱性细胞、淋巴细胞和单核细胞)的特性进行研究。结果表明,绵羊对大片吸虫很不易感,水牛对大片吸虫很易感。未感染绵羊和水牛的白细胞总数有较大的差距,分别为5 956(±825)个细胞/mm3血液和12 657(±1 053)个细胞/mm3血液。未感染绵羊和水牛的嗜酸性细胞占白细胞总数的百分比小于5%。淋巴细胞占的比例最大,绵羊为59.5%,水牛达70.8%。感染绵羊和未感染绵羊的白细胞总数、嗜酸性细胞计数在感染过程中总体上存在显著差异,感染后绵羊的嗜酸性细胞的数量迅速升高,在感染后4周(4W P I)达到高峰。而感染水牛和未感染水牛白细胞总数差异不显著,但嗜酸性细胞存在显著差异,感染后水牛的嗜酸性细胞的数量升高缓慢,到8 W P I达到高峰。结果提示嗜酸性细胞在感染绵羊中更加有效地参与了杀灭大片吸虫。     

两株水牛伊氏锥虫内转录间隔区基因序列的测定与系统进化关系

为研究从水牛分离到的伊氏锥虫广西株和湖北株的分类学地位,对2株伊氏锥虫的核糖体基因内转录间隔区(ITS1-5.8S-ITS2)基因进行了克隆和测序分析.用CLUSTALXl.83软件多重比对分析了序列差异,应用MEGA4.0软件绘制系统进化树.结果表明,这2株水牛伊氏锥虫的ITS1-5.8S-ITS2 rRNA基因扩增产物分别为1 102 bp和1 095 bp,序列存在多态性,其中广西株的ITS-1序列长为340 bp,ITS-2序列长为582 bp,湖北株的ITS-1序列长为339bp,ITS-2序列长为587 bp.系统进化分析显示,这2株伊氏锥虫分布在同一大枝的不同亚群中.     

附红细胞体体外交叉感染初步研究

附红细胞体(eperythrozoon,)(以下简称附红体)是寄生于红细胞表面、血浆及骨髓中的一群微生物。1984年版《伯杰细菌鉴定手册》将附红体列为立克次体目(Rickettsiaies)、无浆体科(Anaplasmatace-ae)、附红细胞体属(Eperythrozoon)。在不同动物中寄生的附红体各有其名,如绵羊附红体(E.ovis)、猪附红体(E.suis)、牛附红体(E.wenyoni)、人附红体(E.humanus)等。迄今已发现和命名的附红体有14种。目前已有30多个国家和地区报告了人及动物附红体感染。目前该病的流行病学尚不清楚。调查发现,附红细胞体病没有严格的地域性、季节性和年龄阶段性,…