水貂生长激素的原核表达及特异性抗血清制备

本研究旨在建立水貂生长激素(mink growth hormone,mGH)的原核高效表达体系,探索mGH蛋白规模化生产方法,利用获得的目的蛋白制备特异抗血清。将已构建的原核表达载体pET28b-mGH转化大肠杆菌Rosetta(DE3)TMpLysS感受态细胞,经IPTG诱导表达,超声破碎菌体后离心获得包涵体蛋白,利用8mol/L尿素对其进行溶解和复性,经Ni-NTA树脂亲和层析纯化获得重组蛋白。通过Western blotting检测及MALDI-TOFMS质谱分析对获得的蛋白进行鉴定。用SDS-PAGE电泳法检测蛋白纯度,用BCA法测定其浓度。复性mGH蛋白与完全弗氏佐剂或不完全弗氏佐剂乳化制备免疫抗原,采用皮下多点注射法免疫3只新西兰大白兔,首次免疫剂量为600μg/只,二免剂量为600μg/只,三免剂量为400μg/只。三免10d后分离制备血清,Western blotting法检测其特异性,间接ELISA法检测其效价。结果表明,原核表达的包涵体经Ni-NTA柱纯化后所得蛋白鉴定为mGH融合蛋白;SDS-PAGE电泳鉴定复性mGH蛋白条带单一,纯度达90%以上,BCA法计算蛋白浓度为669μg/mL,均达到了免疫动物的要求;制备的抗血清经Western blotting检测具有良好的结合特异性,间接ELISA法测定其抗体效价达1∶256 000以上。上述结果表明,原核表达载体pET28b-mGH可在大肠杆菌Rosetta(DE3)TMpLysS细胞中高效表达mGH融合蛋白,表达蛋白经变性、复性和纯化后免疫新西兰大白兔,可制备高效价特异性抗血清。     

印楝嫩枝扦插育苗

印楝 (AzadirachtaindicaA .Juss) ,楝科楝属常绿乔木 ,原产于缅甸和印度等热带地区 ,适宜生长在无霜冻的干热河谷地区。我国广东、云南、海南等地已引种成功。适应性强 ,抗性强 ,材质优良 ,树形优美 ,具有很好的发展前途。 2 0 0 1年起 ,我们在山东的一些苗圃采用嫩枝扦插繁殖的方法进行了试种 ,试验取得了初步成功 ,幼苗在苗圃条件下能够安全越冬。印楝嫩枝扦插繁殖系数高 ,方法简便易行 ,成活率高 ,生长量大 ,当年苗木高度可达 3m以上 ,地径可达 2 .8cm。1　种根催芽早春选背风向阳处建催芽池 ,池宽 1m ,长度视地形而定。池内先铺 15～…     

禽流感与新城疫二联RT—PCR诊断方法的建立及其应用

根据禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)基因组序列高度保守区，设计合成了2对引物，以AIV、NDV培养物提取RNA并反转录，进行RT-PCR特异性片段扩增，扩增的片段大小分别为470和320bp。结果，扩增产物与设计的2对引物之间的序列大小一致。通过特异性与敏感性试验，AIV、NDV培养物均可扩增至10^-4，表明本方法对2种病毒具有快速、特异和高度敏感的特点。     

鲜食枣新品种—早脆王

早脆王,是河北省沧县在红枣资源普查过程中发现的优质、大果型、早熟、鲜食优良单株。1989年通过嫁接引入河北省沧县金丝小枣良繁基地品种基因库,进行栽培和观察研究。2000年4月经河北省林木良种审定委员会审定,命为为早脆王。     

母猪产后疾病的诊断与防治要点

近十余年来,我们在国内300余个不同规模的养猪场户诊治猪病时,发现母猪产后疾病发生较多,常因诊断和防治失误,致使病猪久治不愈、死亡或淘汰,严重影响仔猪成活,给养猪场户造成经济损失较大。为交流和提高此类猪病的诊治能力,现仅     

鲜食枣新品种——早脆王

早脆王,是河北省沧县在1988年枣树资源普查中,发现的优良单株.自1989年开始该县红枣良繁基地对其进行保存和栽培研究,经10余年的观测比较,性状稳定、品质突出,被确定为优种,后经同行专家鉴定,被命名为早脆王.     

日本乙型脑炎病毒E抗原表位的筛选

为筛选日本乙型脑炎病毒(JEV)的E抗原表位,本实验以抗JEV E蛋白的单克隆抗体(MAb)作为固相筛选分子,应用噬菌体表面展示技术,按消减、结合、洗脱、扩增的顺序筛选噬菌体七肽库,挑取噬菌体单克隆培养并采用MAb包被的ELISA鉴定,对阳性克隆测序分析,确定JEV E抗原模拟表位的氨基酸序列.设计合成包含该表位的E抗原15肽(E-365GGADSMSMAGMAVSYE-379)cDNA序列,与pGEX-KG构建重组表达质粒,诱导表达重组多肽并进行western blot验证.经过4轮筛选后,噬菌体得到高度富集,挑取单克隆采用MAb包被进行ELISA鉴定,有22个克隆呈阳性.对重组多肽进行western blot验证,结果表明该重组多肽能够特异结合兔抗JEV多克隆抗体.本实验成功筛选出JEV结构蛋白E的特异性噬菌体模拟表位,为开展用JEV抗原表位探索JEV的防制研究创造了条件,为多肽疫苗研制、药物筛选以及特异血清学诊断方法的建立提供重要依据.     

山东省林木种质资源现状分析及保护利用研究

该文以林木种质资源保护和开发利用为目标,分析了山东省林木种植资源现状,提出了林木种质资源保护、开发利用和优良品种选育对策,为现代林业可持续发展打下基础     

山东省国有苗圃深化改革及加快发展对策

该文以深化国有苗圃改革,加快国有苗圃发展为目标,分析了山东省国有苗圃近年来取得的成绩和存在的问题,提出了搞好国有苗圃工作的对策,以指导全省国有苗圃管理。     

口蹄疫与经典猪瘟二联RT-PCR诊断方法的建立及其应用

根据口蹄疫病毒(FMDV)与猪瘟病毒(CSFV)基因组序列高度保守区,设计合成2对引物,以CSFV和FMDV培养物提取RNA并反转录,进行RT-PCR特异性片段扩增,扩增片段大小分别为200 bp、141 bp.结果表明,扩增产物与设计的2对引物之间的序列大小一致.通过特异性与敏感性试验,CSFV与FMDV培养物均可扩增至10-5倍稀释,最终建立的二联RT-PCR方法对上述2种病毒的敏感性亦可达10-4倍稀释,约10 pg的总RNA,证明本法对上述2种病毒具有快速、特异和高度敏感的特点.