2012年全国家畜血吸虫病疫情状况

本文通报了2012年全国家畜血吸虫病疫情状况。在2012年,湖南省、湖北省、江西省、四川省、安徽省、云南省、江苏省等7省共有存栏牛1 033 056头,存栏羊2 024 512只,其他家畜存栏数891 301头（匹、只）。2012年共检查了684 899头牛,其中牛血吸虫病阳性3961头,阳性率0.58%,比2011年的阳性数下降了42.57%;检查了71 473只羊,其中羊血吸虫病阳性406只,阳性率0.57%,比2011年的阳性数下降了4.19%,并对142 976头其他家畜进行了检查,其中血吸虫病阳性为21头,阳性率0.01%。湖南省和江西省的病牛数占到了全国病牛数的80.06%。2012年,全国家畜血吸虫病疫情较之2011年继续下降,但是洞庭湖和鄱阳湖地区依然是今后家畜血吸虫病疫情控制的难点和重点。     

日本血吸虫四跨膜孤儿受体(TOR)克隆及其第一个膜外区基因的表达

埃及血吸虫和曼氏血吸虫四跨膜孤儿受体(trispanning orphan receptors,TOR)受体可以结合补体C2a,可能在血吸虫免疫逃避过程中起重要作用。为研究日本血吸虫TOR受体的特性和功能,利用PCR扩增到Sj TOR基因并进行了生物信息学分析;同时克隆了Sj TOR基因N端第一个膜外区(ed1)基因,构建了重组质粒p ET-28a-Sj TOR-ed1,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达后用组蛋白亲和层析纯化获得重组蛋白Sj TOR-ed1,Western blot结果显示r Sj TOR-ed1能被日本血吸虫阳性小鼠血清识别。该研究为进一步开展研究日本血吸虫TOR受体的功能提供了基础。     

pVAX1/SjTSP2 DNA疫苗免疫预防小鼠日本血吸虫病的效果评估

为评估SjTSP2分子作为日本血吸虫DNA疫苗候选抗原分子的潜力,本实验扩增了编码该分子的DNA片段,构建了重组真核质粒pVAX1/SjTSP2,检测其在哺乳动物细胞中表达情况后,通过基因枪轰击法免疫小鼠,应用ELISA、流式细胞术等检测重组质粒诱导的免疫反应,计算减虫减卵率,评估对小鼠日本血吸虫病的免疫保护效果。间接免疫荧光试验结果显示该质粒能在293T细胞中表达。质粒免疫小鼠诱导了显著升高的特异性IgG抗体和IFN-γ、IL-4等细胞因子。小鼠免疫保护试验结果表明,免疫组小鼠虫荷数较PBS对照组增加12.4%(P=0.368),但肝组织虫卵减少10.01%(P=0.486)。说明制备的DNA疫苗能刺激小鼠产生较强的免疫反应,但诱导的免疫保护作用并不理想,为血吸虫DNA疫苗研究提供了参考数据。     

免疫调节剂研究现状及其作用机理

本文从免疫调节剂的概念出发,综述了生物性免疫调节剂、天然源免疫调节剂、细胞因子免疫调节剂、细菌性免疫调节剂、化学性免疫调节剂、营养性免疫调节剂及其它免疫调节剂,并就各类免疫调节剂的作用机理与临床应用做了详尽论述。     

一种快速提取血吸虫虫卵方法的建立

为探索一种快速提取血吸虫虫卵并保持虫卵抗原性的方法,本研究用血吸虫尾蚴感染兔并收集其肝脏,分别用不同浓度的Na OH、不同温度和时间消蚀含有虫卵的肝脏匀浆液,以确定最佳提取虫卵条件。通过方阵法确定所提取虫卵的可溶性抗原最佳包被浓度,并对虫卵抗原灵敏度进行了检测。另外,通过测定75份阳性血吸虫水牛血清和60份阴性水牛血清,进一步检测了此法提取并制备抗原的灵敏性。结果表明,本研究所建立的方法在不同Na OH浓度、作用温度和作用时间下,对提取的虫卵均产生影响。Na OH浓度越高,作用时间越久,消蚀温度越高,对虫卵的破坏越显著,表现在虫卵内容物的凝聚和消融,虫卵的空壳化增多。3种不同浓度Na OH提取虫卵的抗原检测下限分别为1/800、1/1600、1/3200,较过筛法的抗原检测下限1/400有显著提高。对水牛的血清检测结果表明,用Na OH消蚀法提取的虫卵抗原检测血吸虫灵敏性是93%,比常规过筛法高5%,特异性是100%,比常规过筛法高3%。本研究结果表明Na OH消蚀法可快速提取高洁净度的虫卵并保持虫卵的抗原性不被破坏,该法提取虫卵的最佳Na OH浓度是5%~10%,作用温度是45℃左右,作用时间是5~10 min。在最佳条件下制备的虫卵较常规过筛法的纯净度高,虫卵得率也是常规过筛法的3倍以上。     

寄生虫蛋白质磷酸化修饰及磷酸化蛋白质组学研究进展

蛋白质的磷酸化修饰是生命体内一种重要的且普遍存在的蛋白质翻译后修饰方式之一,蛋白质的磷酸化和去磷酸化是一种动态的生物调节过程,在生命过程中起着重要的作用。论文介绍了蛋白质磷酸化修饰的研究进展及其在寄生虫领域中的应用,并对其研究前景进行了展望。     

日本血吸虫还原性辅酶I(SjNADH)基因的克隆表达及其免疫保护效果分析

为了评估日本血吸虫还原性辅酶I(SjNADH)在小鼠体内诱导的免疫保护效果,应用PCR获得SjNADH基因片段,其开放阅读框为474 bp,编码157个氨基酸,并在大肠杆菌中成功表达,纯化得到该重组蛋白。Western blot结果显示,SjNADH在日本血吸虫童虫和成虫中的表达量稳定,SjNADH融合蛋白也能被免疫血清识别,具有较好的免疫原性。应用重组蛋白免疫小鼠能诱导产生较高的特异性抗体水平,并诱导了20.13%的减虫率和23.06%的肝脏减卵率。结果表明,获得的SjNADH重组蛋白在小鼠体内诱导产生了部分免疫保护,有作为血吸虫疫苗候选抗原分子的潜力。     

日本血吸虫精氨酸酶的克隆表达及酶活性分析

为解析日本血吸虫精氨酸酶的功能,本研究克隆了SjARG基因、长度为1095 bp,并将该基因克隆一到原核表达载体pET-28a,获得重组质粒pET-28a-SjARG,并在大肠杆菌中成功表达,Western blot显示重组蛋白具有良好的抗原性;通过酶活性分析显示,重组蛋白SjARG在添加Mn2+后活性得到提高,酶活性大小为502 U/mg,Km值为82.7mM。该研究结果为进一步深入研究该基因的表达特性、酶学性质以及候选疫苗分子研究方面提供了基础。     

重组日本血吸虫抱雌沟蛋白诱导的免疫机制研究

应用大肠杆菌表达日本血吸虫抱雌沟蛋白（Schistosoma japonicum gynecophoral canal protein, SjGCP）。将重组蛋白rSjGCP与FCA、ISA206、ISA70M三种佐剂混合后免疫BALB／c小鼠,分析重组抗原诱导的免疫保护机制。用流式细胞术检测三次免疫后小鼠体内CD4＋、CD8＋T淋巴细胞亚群和IL-2、IL-4、γ—IFN、IL-10等细胞因子,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗SjGCP特异性1gG抗体及其亚型lgG1水平。和空白对照组相比,GCP—FCA组和GCP-206组小鼠脾细胞中CD8＋T淋巴细胞比例显著下降,而GCP-70M组的CD4＋T淋巴细胞显著下降;GCP—FCA组、GCP-206组中IL-4、IL-10表达水平均显著上升;GCP—FCA组、GCP-206组、GCP-70M组血清中特异性IgG1亚型抗体含量显著升高。本研究为探讨重组日本血吸虫抱雌沟蛋白诱导的免疫保护机制积累了有价值的数据。     

东方田鼠感染日本血吸虫前后血常规和血清生化指标的动态变化

东方田鼠具有天然抗日本血吸虫病特征,为了探索东方田鼠抗日本血吸虫机制,本研究分析了东方田鼠和小鼠感染日本血吸虫尾蚴前后血液细胞以及生化指标的动态变化。东方田鼠和BALB/c鼠定量感染日本血吸虫尾蚴,于感染后第0、1、3、5、8、12、16、21、28、35、42 d分别采集抗凝血和血清,进行血常规和血清生化分析。血常规检测结果表明,东方田鼠感染后第3~16 d,WBC数量显著升高(Neu数量显著升高),而小鼠血常规检测结果正常;血清生化结果显示,东方田鼠感染日本血吸虫后ALB、HDL-C显著升高,小鼠各指标变化不明显。本研究结果显示东方田鼠天然免疫细胞Neu和血清ALB可能与其抗日本血吸虫特性相关,对补体杀伤日本血吸虫机制研究具有重要的指导意义。