东方田鼠肝脏T7噬菌体展示cDNA文库的构建

本项研究的目的是构建东方田鼠肝脏T7噬菌体展示cDNA文库,为筛选东方田鼠抗血吸虫病抗性相关基因奠定基础.用TRIzol试剂提取东方田鼠肝脏总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA.在双链cDNA末端加上EcoRⅠ/HindⅢ定向接头并用EcoRⅠ和Hind Ⅲ酶切,使其两端分别带EcoRⅠ和HindⅢ粘性末端.用Mini Column纯化、收集300 bp以上的双链cDNA片段,再连接于带有EcoRⅠ和HindⅢ末端的T7 Select 10-3b载体,经体外包装后,以BLT5403为受体菌构建T7噬菌体展示cDNA文库.经测定,库容量为1.3×107 PFU/mL,扩增后文库滴度为1.8×1011 PFU/mL.对从原始文库中随机挑取的100个噬菌斑进行PCR鉴定,重组率为91.7%,阳性克隆片段大小分布在200 bp～1 000 bp,其中有95.5%的插入片段大于300 bp.用日本血吸虫童虫可溶性抗原对文库进行了初筛,得到了21个ESTs,将这些阳性噬菌体克隆和血吸虫童虫共培养,其中大部分克隆诱导的童虫死亡率比阴性噬菌体对照高出2%～13%.     

2012年全国家畜血吸虫病疫情状况

本文通报了2012年全国家畜血吸虫病疫情状况。在2012年,湖南省、湖北省、江西省、四川省、安徽省、云南省、江苏省等7省共有存栏牛1 033 056头,存栏羊2 024 512只,其他家畜存栏数891 301头（匹、只）。2012年共检查了684 899头牛,其中牛血吸虫病阳性3961头,阳性率0.58%,比2011年的阳性数下降了42.57%;检查了71 473只羊,其中羊血吸虫病阳性406只,阳性率0.57%,比2011年的阳性数下降了4.19%,并对142 976头其他家畜进行了检查,其中血吸虫病阳性为21头,阳性率0.01%。湖南省和江西省的病牛数占到了全国病牛数的80.06%。2012年,全国家畜血吸虫病疫情较之2011年继续下降,但是洞庭湖和鄱阳湖地区依然是今后家畜血吸虫病疫情控制的难点和重点。     

日本血吸虫四跨膜孤儿受体(TOR)克隆及其第一个膜外区基因的表达

埃及血吸虫和曼氏血吸虫四跨膜孤儿受体(trispanning orphan receptors,TOR)受体可以结合补体C2a,可能在血吸虫免疫逃避过程中起重要作用。为研究日本血吸虫TOR受体的特性和功能,利用PCR扩增到Sj TOR基因并进行了生物信息学分析;同时克隆了Sj TOR基因N端第一个膜外区(ed1)基因,构建了重组质粒p ET-28a-Sj TOR-ed1,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达后用组蛋白亲和层析纯化获得重组蛋白Sj TOR-ed1,Western blot结果显示r Sj TOR-ed1能被日本血吸虫阳性小鼠血清识别。该研究为进一步开展研究日本血吸虫TOR受体的功能提供了基础。     

pVAX1/SjTSP2 DNA疫苗免疫预防小鼠日本血吸虫病的效果评估

为评估SjTSP2分子作为日本血吸虫DNA疫苗候选抗原分子的潜力,本实验扩增了编码该分子的DNA片段,构建了重组真核质粒pVAX1/SjTSP2,检测其在哺乳动物细胞中表达情况后,通过基因枪轰击法免疫小鼠,应用ELISA、流式细胞术等检测重组质粒诱导的免疫反应,计算减虫减卵率,评估对小鼠日本血吸虫病的免疫保护效果。间接免疫荧光试验结果显示该质粒能在293T细胞中表达。质粒免疫小鼠诱导了显著升高的特异性IgG抗体和IFN-γ、IL-4等细胞因子。小鼠免疫保护试验结果表明,免疫组小鼠虫荷数较PBS对照组增加12.4%(P=0.368),但肝组织虫卵减少10.01%(P=0.486)。说明制备的DNA疫苗能刺激小鼠产生较强的免疫反应,但诱导的免疫保护作用并不理想,为血吸虫DNA疫苗研究提供了参考数据。     

寄生虫蛋白质磷酸化修饰及磷酸化蛋白质组学研究进展

蛋白质的磷酸化修饰是生命体内一种重要的且普遍存在的蛋白质翻译后修饰方式之一,蛋白质的磷酸化和去磷酸化是一种动态的生物调节过程,在生命过程中起着重要的作用。论文介绍了蛋白质磷酸化修饰的研究进展及其在寄生虫领域中的应用,并对其研究前景进行了展望。     

望江县长江江滩放牧牛蠕虫感染状况调查

为了解安徽省望江县江滩放牧牛寄生蠕虫的感染情况,本研究采用饱和盐水漂浮法、沉淀法、贝尔曼法对此地区的115头放牧牛的新鲜粪便进行检查,同时对虫种感染率以及不同品种、性别、年龄牛感染率进行了统计分析。调查结果显示,当地放牧牛感染的蠕虫有夏伯特线虫、捻转血矛线虫、奥斯特线虫、肝片吸虫以及肺线虫,总感染率达到90.4%(104/115)。其中捻转血矛线虫为感染优势虫种,感染率达70.4%;捻转血矛线虫、夏伯特线虫在雄牛和雌牛中感染率的差异具有显著性统计学意义。调查结果对长江流域江滩放牧牛蠕虫病防治工作以及了解蠕虫与宿主的相互关系具有一定参考意义。     

一种快速提取血吸虫虫卵方法的建立

为探索一种快速提取血吸虫虫卵并保持虫卵抗原性的方法,本研究用血吸虫尾蚴感染兔并收集其肝脏,分别用不同浓度的Na OH、不同温度和时间消蚀含有虫卵的肝脏匀浆液,以确定最佳提取虫卵条件。通过方阵法确定所提取虫卵的可溶性抗原最佳包被浓度,并对虫卵抗原灵敏度进行了检测。另外,通过测定75份阳性血吸虫水牛血清和60份阴性水牛血清,进一步检测了此法提取并制备抗原的灵敏性。结果表明,本研究所建立的方法在不同Na OH浓度、作用温度和作用时间下,对提取的虫卵均产生影响。Na OH浓度越高,作用时间越久,消蚀温度越高,对虫卵的破坏越显著,表现在虫卵内容物的凝聚和消融,虫卵的空壳化增多。3种不同浓度Na OH提取虫卵的抗原检测下限分别为1/800、1/1600、1/3200,较过筛法的抗原检测下限1/400有显著提高。对水牛的血清检测结果表明,用Na OH消蚀法提取的虫卵抗原检测血吸虫灵敏性是93%,比常规过筛法高5%,特异性是100%,比常规过筛法高3%。本研究结果表明Na OH消蚀法可快速提取高洁净度的虫卵并保持虫卵的抗原性不被破坏,该法提取虫卵的最佳Na OH浓度是5%~10%,作用温度是45℃左右,作用时间是5~10 min。在最佳条件下制备的虫卵较常规过筛法的纯净度高,虫卵得率也是常规过筛法的3倍以上。     

单性血吸虫带虫免疫对继发血吸虫病的影响

研究表明,辐照致弱血吸虫尾蚴疫苗能够诱导宿主产生较高的免疫保护作用,是所有血吸虫候选疫苗中保护力最强的,且辐照致弱尾蚴在宿主体内不能发育成熟,不会对宿主造成严重的病理损害。单性感染的血吸虫同样不能在宿主体内发育成熟,其发育状态停留在童虫阶段,也不会对宿主造成严重的病理损害,在童虫状态下对宿主持续进行的免疫刺激,是否也能诱导宿主对继发血吸虫病产生较高的免疫保护作用呢？为此,本研究通过让宿主携带单性血吸虫雄虫的带虫免疫方式来检测其对继发血吸虫病的影响。选用雄性血吸虫尾蚴感染BALB/c小鼠（100条/只）,于单性血吸虫尾蚴攻击后第5、7 w用吡喹酮进行治疗（300mg/kg）,第9 w进行雌雄血吸虫混合尾蚴攻击实验动物（40条/只）,第15 w剖杀实验动物,收集宿主荷虫、宿主肝卵负荷、肝卵孵化、宿主肝单卵肉芽肿体积数据,并检测宿主血清特异性抗体变化趋势。结果表明单性带虫免疫可以引起宿主肝虫卵孵化率及组织病理损伤显著降低,对宿主有一定的免疫保护效果。     

日本血吸虫Wnt1基因的鉴定及在不同发育阶段表达水平分析

为研究Wnt信号通路对血吸虫发育的调节作用,本研究克隆鉴定了日本血吸虫的Wnt1基因(SjWnt1).序列分析显示,SjWnt1蛋白具有Wnt信号蛋白家族的结构功能域,但比高等生物的Wnt1少一个保守的Cys.mRNA和蛋白的定量分析结果显示,SjWnt1表达于血吸虫的整个发育过程,而在虫卵和早期童虫中呈高表达水平,提示SjWnt1对卵胚发育和早期童虫的细胞分化具有调节作用.来源于非适宜宿主及单性感染的发育不良虫体中SjWnt1 mRNA水平比发育正常的虫体高,表明不良发育的虫体相应的Wnt信号阻滞.SjWnt1表达下调后则引起Wnt/β-catenin、Wnt/PCP及Wnt/Ca2+通路的相应下游基因的mRNA水平下降,推测SjWnt1可能通过这3种传递途径行使信号传递的功能.     

洲岛型地区牛血吸虫病流行动态调查与分析

目的 准确掌握洲岛型地区牛血吸虫病流行动态规律,分析评估防治措施的效果,探索这类地区控制血吸虫病流行的技术和措施。方法 以洲岛型地区江苏省丹徒区世业镇为观测点,通过牛血吸虫病感染率、感染强度、主要传染源及螺情调查,统计分析各种调查数据。结果 经连续15年的调查观测,牛血吸虫病感染率、感染强度、野粪阳性率及螺情均呈无规律变化。结论 由于世业乡地处长江中心,随着水位涨落,上游钉螺附着于漂浮物带到江滩草洲,繁殖孳生,灭螺困难,传染源难以控制,疫情时高时低,可通过以机耕代牛耕,发展水禽控制传染源,达到控制血吸虫病疫情的目的。