H9N2亚型禽流感病毒纯化及病毒HA蛋白定量方法研究

为实现H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)疫苗上下游过程的控制,本研究结合蔗糖密度梯度离心和SDS-PAGE灰度分析建立了H9N2亚型AIV纯化和病毒HA蛋白定量的方法。首先将收获的病毒原液经差速离心、PEG6000沉淀和蔗糖密度梯度离心分别进行澄清、浓缩和分离纯化;其次,采用改装过的高效液相色谱仪系统(HPLC)准确定位和收集病毒离心区带,并对该区带进行SDS-PAGE和Western blotting分析,同时考察该收集方式的线性和重复性;然后,在此基础上优化病毒液的澄清工艺以提高病毒回收率;最后,观察还原SDS-PAGE分离的H9N2亚型AIV蛋白条带的共迁移情况并确定糖苷酶PNGase F脱糖基处理的最佳条件,采用Image J软件分析SDS-PAGE图谱中4个主要病毒蛋白条带(NP、HA1、M1和HA2)的灰度以确定流感病毒血凝素的含量。结果表明,HPLC收集的病毒离心区带的蛋白浓度与PEG6000浓缩的上清体积在8～32 mL范围内具有良好的线性关系(R~2=0.994),且该收集方式重复性好,批内和批间变异系数分别为1.29%和4.11%。病毒液经过澄清、浓缩和分离纯化后,最终的病毒回收率为79.55%。纯化的H9N2亚型AIV的蛋白浓度为1 000μg/mL时,经糖苷酶PNGase F脱糖基处理后便能得到条带清晰平整且分离良好的SDS-PAGE图谱。经灰度分析,HA含量占总病毒蛋白含量的46.18%。本研究初步建立了H9N2亚型AIV纯化和病毒HA蛋白定量的方法,为H9N2亚型AIV全病毒灭活疫苗的研发和生产提供了简单、准确的检测手段。     

35%阿维菌素·灭蝇胺悬浮剂防治黄瓜美洲斑潜蝇效果研究

本文进行了阿维菌素·灭蝇胺防治美洲斑潜蝇的田间药效试验,结果表明,阿维菌素·灭蝇胺有效成分用量在210g/hm~2、157.5g/hm~2、105g/hm~2条件下,对美洲斑潜蝇具有良好的防治效果,药后10d防效分别为94.54%、89.66%和80.09%,速效性较好,持效期为10d左右,建议与其它农药进行轮用。     

H9N2亚型禽流感病毒纯化及病毒HA蛋白定量方法研究

为实现H9N2亚型禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）疫苗上下游过程的控制，本研究结合蔗糖密度梯度离心和SDS-PAGE灰度分析建立了H9N2亚型AIV纯化和病毒HA蛋白定量的方法。首先将收获的病毒原液经差速离心、PEG6000沉淀和蔗糖密度梯度离心分别进行澄清、浓缩和分离纯化；其次，采用改装过的高效液相色谱仪系统（HPLC）准确定位和收集病毒离心区带，并对该区带进行SDS-PAGE和Western blotting分析，同时考察该收集方式的线性和重复性；然后，在此基础上优化病毒液的澄清工艺以提高病毒回收率；最后，观察还原SDS-PAGE分离的H9N2亚型AIV蛋白条带的共迁移情况并确定糖苷酶PNGase F脱糖基处理的最佳条件，采用Image J软件分析SDS-PAGE图谱中4个主要病毒蛋白条带（NP、HA1、M1和HA2）的灰度以确定流感病毒血凝素的含量。结果表明，HPLC收集的病毒离心区带的蛋白浓度与PEG6000浓缩的上清体积在8~32 mL范围内具有良好的线性关系（R²=0.994），且该收集方式重复性好，批内和批间变异系数分别为1.29%和4.11%。病毒液经过澄清、浓缩和分离纯化后，最终的病毒回收率为79.55%。纯化的H9N2亚型AIV的蛋白浓度为1 000 μg/mL时，经糖苷酶PNGase F脱糖基处理后便能得到条带清晰平整且分离良好的SDS-PAGE图谱。经灰度分析，HA含量占总病毒蛋白含量的46.18%。本研究初步建立了H9N2亚型AIV纯化和病毒HA蛋白定量的方法，为H9N2亚型AIV全病毒灭活疫苗的研发和生产提供了简单、准确的检测手段。     

β-胡萝卜素缓解哺乳期犊牛氧化应激的研究进展

哺乳期犊牛是发生应激的高发群体，其生长性能、健康状况易受应激反应干扰。β-胡萝卜素是一种非酶类抗氧化剂，具有抗氧化、增强免疫力、提高动物生长性能等多种作用。本文结合国内外研究，对引起哺乳期犊牛氧化应激的主要因素以及β-胡萝卜素的主要作用进行综述，旨在为β-胡萝卜素应用于哺乳期犊牛提供参考。