应用荧光定量RT-PCR检测J亚群禽白血病病毒

针对J亚群禽白血病病毒（ALV-J）基因序列保守区域设计一对特异性引物和一条特异性探针,通过构建重组阳性标准质粒作为阳性标准品,建立了检测ALV-J核酸的荧光定量PCR方法。优化反应体系和条件后进行特异性、敏感性、重复性试验。结果显示,该检测方法特异性强,与其它禽源病毒如A亚群禽白血病病毒（ALV-A）、B亚群禽白血病病毒（ALV-B）、新城疫病毒（ NDV）、禽流感病毒（AIV）、鸡传染性贫血病毒（CIAV）和马立克病病毒（MDV）均不发生交叉反应;该方法可检测到3.2×102拷贝/μL的病毒核酸,与常规RT-PCR相比,敏感性高100倍;重复性试验的变异系数小于2%。研究结果表明,建立的Real-time RT-PCR 检测方法特异性强、灵敏度高、可重复性好,可用于ALV-J的定量检测。     

同时检测美洲型及欧洲型PRRSV的多重RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV基因序列设计3对特异性引物,即第1对通用引物扩增美洲型和欧洲型病毒株ORF7基因(433 bp/398 bp)、第2对引物扩增美洲型经典病毒株和高致病性变异株(HP-PRRSV)Nsp2基因(338 bp/248 bp)、第3对引物扩增欧洲型病毒株ORF5基因(614 bp)。经过反应条件的优化,建立了能够同时检测并区分美洲型经典病毒株、HP-PRRSV株以及欧洲型病毒株的多重RT-PCR检测方法。该方法可以特异扩增3种病毒的基因,其重组质粒标准品的检出下限均为1.67×103拷贝;而与猪的其它重要病原均无交叉反应。应用该方法检测176份临床疑似病料样品,结果 PRRSV阳性45份,其中美洲型变异病毒株41份、经典病毒株4份,未检测到欧洲型病毒株。表明本研究建立的多重RT-PCR检测方法可以用于PRRSV的快速鉴别诊断和流行病学调查。     

活猪携带猪瘟病毒检测方法比较

对2个猪场的母猪血清、扁桃体、全血样品和公猪精液分别应用荧光抗体染色法、RT-PCR、CS-FV抗原ELISA、CSFV糖蛋白Erns ELISA 4种方法进行CSFV对应检测和比较。结果显示,荧光抗体染色法检出率最高,但与其他3种方法存在较大差异,RT-PCR方法检出率和重复性次之;猪瘟抗原ELISA方法检出率第3,重复性第1;CSFV糖蛋白Erns检出率和重复性均最低,但可筛选是否感染猪瘟病毒野毒。在母猪3种样品中扁桃体的检出率最高,全血样品次之,血清检出率最低。4种样品中公猪精液重复性最好,其次是母猪全血样品,母猪扁桃体第3;母猪血清样品最差。     

广西动物防疫物资管理现状调查

为了解广西动物防疫物资管理情况，广西动物疫病预防控制中心采用现况调查法，制定调查表，对所辖市、县、乡三级动物疫病预防控制机构进行问卷调查。结果显示：100%的市级机构配备了动物疫苗冷藏设备，使用率达到92.86%，动物疫苗冷链运输温度100%合格，而县级机构的冷藏设备配备和使用率分别为75.23%和59.63%，仅67.89%能保障冷链运输温度；100%的市级、90.83%的县级、89.90%的乡级机构能够按要求贮存消毒药品，92%以上的各级机构能够按要求正确填写有关物资凭证，95%以上的各级机构能够做到“账账相符、账实相符”；不到70%的乡级防疫机构回收屠宰、养殖环节的畜禽标识，不到70%的养殖场申报政府采购疫苗计划及对自购强制免疫疫苗进行备案。结果表明：广西市级机构的动物疫苗冷藏和冷链运输设备齐全，而县、乡两级配备明显不足；各级机构能够按要求贮存消毒药品，相关台帐、凭证管理到位，但畜禽标识回收率偏低，养殖场自购强制免疫疫苗备案意识淡薄。结果提示：应积极与财政部门沟通、协调，争取资金，完善基层机构的动物疫苗冷藏设施设备配备；加强各环节畜禽标识的回收和销毁管理，尽快建立“移动戴标制度”；继续加强物资监管，做好重大动物疫病防控应急物资的储备和管理工作。     

CSFV及美洲型、欧洲型PRRSV多重qRT-PCR鉴别检测方法的建立及应用

根据猪瘟病毒(CSFV)以及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组序列特点,设计3对特异性引物和3条TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了能同时检测并区分CSFV以及美洲型、欧洲型PRRSV的多重TaqMan荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法。该方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,可以特异扩增CSFV和PRRSV,而与猪的其它常见病毒无交叉反应;对CSFV及美洲型、欧洲型PRRSV3种重组质粒标准品的检出下限均为2.68拷贝/μL;组内及组间重复试验的变异系数均小于1.5%。应用该方法对253份临床疑似样品进行检测,结果病原阳性106份,其中20份为CSFV阳性,86份为美洲型PRRSV阳性,11份为CSFV和美洲型PRRSV混合感染,未检测到欧洲型PRRSV。试验表明,研究建立的多重qRT-PCR方法可用于CSFV和PRRSV的快速鉴别检测及流行病学调查。     

自拟催情散对乏情母猪的疗效验证

随机将30头乏情母猪分为2组,每组15头,Ⅰ组用自拟催情散按2 g/kg·体重拌料内服,每天2次,Ⅱ组用雌二醇按0.1 mg/kg·体重肌肉注射,以观察其对乏情母猪的治疗效果。结果表明:Ⅱ组母猪在用药后5 d内全部出现发情症状,但大多数在第1次发情时不能受孕,而Ⅰ组母猪大多在用药后6~10 d内发情,但通常1次配种成功。说明雌二醇的催情效果优于自拟催情散,而自拟催情散促进卵泡发育的功能优于雌二醇。     

荧光定量RT-PCR检测鸡传染性支气管炎病毒方法的建立及应用

为了建立一种快速的新城疫病毒(NDV)病原检测方法,试验针对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)基因序列保守区域设计1对特异性引物和1条特异性探针,通过构建重组阳性标准质粒的方法建立了检测IBV核酸的荧光定量PCR方法,优化反应体系和反应条件后进行特异性、敏感性、重复性试验。结果表明:该检测方法特异性强,与其他禽源病毒如NDV、传染性喉气管炎病毒(ILTV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、禽流感病毒(AIV)、马立克病毒(MDV)均不发生交叉反应;该方法可检测到3.1×101拷贝/μL的病毒核酸,比常规RT-PCR的敏感性高100倍;重复性试验的变异系数小于2%。说明研究建立的Real-time RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于IBV的定量检测。     

鸡马立克氏病病毒广西株Meq基因的克隆与序列分析

为研究鸡马立克氏病病毒(MDV)广西流行株的遗传变异情况,本研究从广西发病鸡中分离鉴定了3株MDV。参照GenBank中MDV的核苷酸序列设计1对引物,利用PCR技术对分离毒株的Meq基因进行了克隆、序列测定,并与GenBank中发表的国内外参考毒株进行比对分析。结果显示, Meq基因序列全长为1020 bp,编码一条由339个氨基酸组成的多肽,分离株与国内外MDV参考毒株相比,不同MDV株的Meq基因序列相对较保守,它们之间核苷酸同源性为83.8%~99.9%,氨基酸同源性为88.4%~99.6%。3株MDV分离株Meq基因在相关报道中提到的与毒力相关的脯氨酸重复区存在点突变。3株分离株与国内参考株YL、GXY2关系较近,与参考株RB1B、GA、Md5、648A及疫苗株亲缘关系较远。该研究为中国MDV的流行、遗传变异及防控研究提供了材料。     

广西首例家禽H7N9流感监测病例的调查分析

<正>2013年3月在上海发生了首例人感染H7N9流感病毒以来,该亚型流感疫情陆续在全国十几个省(市、自治区)发生,造成了重大的影响〔1〕。2013年4月开始,在农业部的统一部署下,广西各级动物疫控部门及时组织开展动物H7N9流感病毒感染监测和流行病学调查工作。2013年在广西没有在家禽和其他动物中发现H7N9流感病毒存在;2014年1月,在广西贵港市活禽交易市场的家禽中监测     

2006--2012年广西鸡沙门氏菌感染情况调查

运用分子生物学、血清学以及病原分离鉴定等多种方法，对2006～2012年广西规模养殖场、农村散养鸡以及活禽市场鸡血清和组织样本进行鸡白痢-伤寒沙门氏菌抗体和沙门氏菌病原检测和鉴定。结果发现，血清样本中规模场鸡白痢伤寒抗体阳性率较低，平均为2．16％，其中种公鸡的阳性率平均为1．55％，核心群母鸡阳性率平均为1．66％，生产群母鸡阳性率平均为4．16％；但广西农村散养鸡和活禽市场鸡白痢-伤寒沙门氏菌的污染情况不容乐观，其中农村散养鸡白痢-伤寒沙门氏菌阳性率为21．78％～24％，平均为22．52％（320/1421），活禽市场鸡阳性率为20．81％～33．2％，平均达到27．51％（2800/10177）；发病鸡的组织样品沙门氏菌平均阳性率为4．9％（29/592），阳性株以伤寒沙门氏菌为主，共13株占44．83％（13/29），其次为亚利桑那沙门氏菌8株，占27．59％（8/29），第三种是沙门氏菌的某些亚种（无法定型），最少为猪霍乱沙门氏菌2株，占6．9％（2/29）。