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针对J亚群禽白血病病毒(ALV-J)基因序列保守区域设计一对特异性引物和一条特异性探针,通过构建重组阳性标准质粒作为阳性标准品,建立了检测ALV-J核酸的荧光定量PCR方法。优化反应体系和条件后进行特异性、敏感性、重复性试验。结果显示,该检测方法特异性强,与其它禽源病毒如A亚群禽白血病病毒(ALV-A)、B亚群禽白血病病毒(ALV-B)、新城疫病毒( NDV)、禽流感病毒(AIV)、鸡传染性贫血病毒(CIAV)和马立克病病毒(MDV)均不发生交叉反应;该方法可检测到3.2×102拷贝/μL的病毒核酸,与常规RT-PCR相比,敏感性高100倍;重复性试验的变异系数小于2%。研究结果表明,建立的Real-time RT-PCR 检测方法特异性强、灵敏度高、可重复性好,可用于ALV-J的定量检测。 相似文献
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为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV基因序列设计3对特异性引物,即第1对通用引物扩增美洲型和欧洲型病毒株ORF7基因(433 bp/398 bp)、第2对引物扩增美洲型经典病毒株和高致病性变异株(HP-PRRSV)Nsp2基因(338 bp/248 bp)、第3对引物扩增欧洲型病毒株ORF5基因(614 bp)。经过反应条件的优化,建立了能够同时检测并区分美洲型经典病毒株、HP-PRRSV株以及欧洲型病毒株的多重RT-PCR检测方法。该方法可以特异扩增3种病毒的基因,其重组质粒标准品的检出下限均为1.67×103拷贝;而与猪的其它重要病原均无交叉反应。应用该方法检测176份临床疑似病料样品,结果 PRRSV阳性45份,其中美洲型变异病毒株41份、经典病毒株4份,未检测到欧洲型病毒株。表明本研究建立的多重RT-PCR检测方法可以用于PRRSV的快速鉴别诊断和流行病学调查。 相似文献
3.
对2个猪场的母猪血清、扁桃体、全血样品和公猪精液分别应用荧光抗体染色法、RT-PCR、CS-FV抗原ELISA、CSFV糖蛋白Erns ELISA 4种方法进行CSFV对应检测和比较。结果显示,荧光抗体染色法检出率最高,但与其他3种方法存在较大差异,RT-PCR方法检出率和重复性次之;猪瘟抗原ELISA方法检出率第3,重复性第1;CSFV糖蛋白Erns检出率和重复性均最低,但可筛选是否感染猪瘟病毒野毒。在母猪3种样品中扁桃体的检出率最高,全血样品次之,血清检出率最低。4种样品中公猪精液重复性最好,其次是母猪全血样品,母猪扁桃体第3;母猪血清样品最差。 相似文献
4.
为了解广西动物防疫物资管理情况,广西动物疫病预防控制中心采用现况调查法,制定调查表,对所辖市、县、乡三级动物疫病预防控制机构进行问卷调查。结果显示:100%的市级机构配备了动物疫苗冷藏设备,使用率达到92.86%,动物疫苗冷链运输温度100%合格,而县级机构的冷藏设备配备和使用率分别为75.23%和59.63%,仅67.89%能保障冷链运输温度;100%的市级、90.83%的县级、89.90%的乡级机构能够按要求贮存消毒药品,92%以上的各级机构能够按要求正确填写有关物资凭证,95%以上的各级机构能够做到“账账相符、账实相符”;不到70%的乡级防疫机构回收屠宰、养殖环节的畜禽标识,不到70%的养殖场申报政府采购疫苗计划及对自购强制免疫疫苗进行备案。结果表明:广西市级机构的动物疫苗冷藏和冷链运输设备齐全,而县、乡两级配备明显不足;各级机构能够按要求贮存消毒药品,相关台帐、凭证管理到位,但畜禽标识回收率偏低,养殖场自购强制免疫疫苗备案意识淡薄。结果提示:应积极与财政部门沟通、协调,争取资金,完善基层机构的动物疫苗冷藏设施设备配备;加强各环节畜禽标识的回收和销毁管理,尽快建立“移动戴标制度”;继续加强物资监管,做好重大动物疫病防控应急物资的储备和管理工作。 相似文献
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6.
为研究鸡马立克氏病病毒(MDV)广西流行株的遗传变异情况,本研究从广西发病鸡中分离鉴定了3株MDV。参照GenBank中MDV的核苷酸序列设计1对引物,利用PCR技术对分离毒株的Meq基因进行了克隆、序列测定,并与GenBank中发表的国内外参考毒株进行比对分析。结果显示, Meq基因序列全长为1020 bp,编码一条由339个氨基酸组成的多肽,分离株与国内外MDV参考毒株相比,不同MDV株的Meq基因序列相对较保守,它们之间核苷酸同源性为83.8%~99.9%,氨基酸同源性为88.4%~99.6%。3株MDV分离株Meq基因在相关报道中提到的与毒力相关的脯氨酸重复区存在点突变。3株分离株与国内参考株YL、GXY2关系较近,与参考株RB1B、GA、Md5、648A及疫苗株亲缘关系较远。该研究为中国MDV的流行、遗传变异及防控研究提供了材料。 相似文献
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根据猪瘟病毒(CSFV)以及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组序列特点,设计3对特异性引物和3条TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了能同时检测并区分CSFV以及美洲型、欧洲型PRRSV的多重TaqMan荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法。该方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,可以特异扩增CSFV和PRRSV,而与猪的其它常见病毒无交叉反应;对CSFV及美洲型、欧洲型PRRSV3种重组质粒标准品的检出下限均为2.68拷贝/μL;组内及组间重复试验的变异系数均小于1.5%。应用该方法对253份临床疑似样品进行检测,结果病原阳性106份,其中20份为CSFV阳性,86份为美洲型PRRSV阳性,11份为CSFV和美洲型PRRSV混合感染,未检测到欧洲型PRRSV。试验表明,研究建立的多重qRT-PCR方法可用于CSFV和PRRSV的快速鉴别检测及流行病学调查。 相似文献
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为了建立一种快速的新城疫病毒(NDV)病原检测方法,试验针对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)基因序列保守区域设计1对特异性引物和1条特异性探针,通过构建重组阳性标准质粒的方法建立了检测IBV核酸的荧光定量PCR方法,优化反应体系和反应条件后进行特异性、敏感性、重复性试验。结果表明:该检测方法特异性强,与其他禽源病毒如NDV、传染性喉气管炎病毒(ILTV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、禽流感病毒(AIV)、马立克病毒(MDV)均不发生交叉反应;该方法可检测到3.1×101拷贝/μL的病毒核酸,比常规RT-PCR的敏感性高100倍;重复性试验的变异系数小于2%。说明研究建立的Real-time RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于IBV的定量检测。 相似文献
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运用分子生物学、血清学以及病原分离鉴定等多种方法,对2006~2012年广西规模养殖场、农村散养鸡以及活禽市场鸡血清和组织样本进行鸡白痢-伤寒沙门氏菌抗体和沙门氏菌病原检测和鉴定。结果发现,血清样本中规模场鸡白痢伤寒抗体阳性率较低,平均为2.16%,其中种公鸡的阳性率平均为1.55%,核心群母鸡阳性率平均为1.66%,生产群母鸡阳性率平均为4.16%;但广西农村散养鸡和活禽市场鸡白痢-伤寒沙门氏菌的污染情况不容乐观,其中农村散养鸡白痢-伤寒沙门氏菌阳性率为21.78%~24%,平均为22.52%(320/1421),活禽市场鸡阳性率为20.81%~33.2%,平均达到27.51%(2800/10177);发病鸡的组织样品沙门氏菌平均阳性率为4.9%(29/592),阳性株以伤寒沙门氏菌为主,共13株占44.83%(13/29),其次为亚利桑那沙门氏菌8株,占27.59%(8/29),第三种是沙门氏菌的某些亚种(无法定型),最少为猪霍乱沙门氏菌2株,占6.9%(2/29)。 相似文献