山豆根提取物的制备与体外抗菌及清除自由基作用的试验

采用三种不同的方法从山豆根中获得有效成分总生物碱、醇提物和水提物,观察三种提取物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的体外抑菌效果,并探讨其体外抗氧化能力.结果表明:山豆根总生物碱的最小抑菌浓度为62.5 mg/ml,山豆根醇提物的最小抑菌浓度为31.25 mg/ml,金黄色葡萄球菌对山豆根醇提物中度敏感.山豆根醇提物能够清除体外产生的羟自由基和超氧阴离子,并能对抗过氧化氢诱导的红细胞氧化溶血.     

硫酸化茯苓多糖对PRRSV体外感染Marc-145细胞作用的影响

用稀碱法从茯苓中提取茯苓多糖,应用氯磺酸-吡啶法得到硫酸化茯苓多糖。通过观察细胞病变(CPE)效应来评价不同浓度硫酸化茯苓多糖和不同作用方式对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染Marc-145细胞的影响。结果表明,硫酸酯化茯苓多糖预作用于单层细胞12 h后感染104TCID50PRRSV,能明显阻断病毒感染细胞,其阻断病毒感染作用的最小浓度为100 mg/L;而硫酸化茯苓多糖预作用4 h后感染104TCID50的PRRSV阻断感染作用不明显,显示硫酸化茯苓多糖体外对PRRSV感染细胞的阻断感染作用呈一定的浓度和时间依赖性。感染剂量为104TCID50PRRSV后加入不同浓度硫酸化茯苓多糖,也能有效抑制病毒在细胞上的感染与增殖,其作用最小浓度为50 mg/L;而不同浓度多糖与104TCID50病毒在体外共同孵育12 h后加入到单层细胞,多糖直接杀灭PRRSV的最小浓度为100 mg/L。     

布鲁菌介导细胞自噬的研究进展

布鲁菌是布鲁菌病的病原体,在世界范围内给养殖业带来巨大损失。自噬是细胞的一种代谢方式,细胞在自噬相关基因的调控下清除细胞内病原微生物和吞噬降解受损、衰老细胞器及大分子物质,以维持机体内环境平衡。布鲁菌入侵细胞后,能够诱发细胞自噬,而这一复杂的过程需要很多细胞因子的参与,探究布鲁菌引发的细胞自噬已成为揭示布鲁菌致病机制的新热点,现就这一新热点的研究进展进行综述。     

猪戊型肝炎病毒ORF3蛋白影响HepG2细胞核黄素代谢的lncRNA-mRNA调控网络的鉴定

为初步鉴定并挖掘出猪戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)ORF3蛋白影响HepG2细胞核黄素代谢信号通路的lncRNA-mRNA调控网络,本试验通过构建腺病毒过表达载体,制备高滴度过表达腺病毒,介导猪 HEV-ORF3在HepG2细胞中实现过表达。Western blotting检测ORF3蛋白过表达成功后,运用lncRNA高通量组学测序,筛选出差异表达的lncRNA并进行靶向差异基因预测,对lncRNA靶向差异基因进行GO功能和KEGG通路富集分析,初步鉴定出与核黄素代谢信号通路相关的lncRNA-mRNA调控网络。Western blotting结果显示,在约为12 ku处出现目的条带,说明成功实现腺病毒介导猪HEV-ORF3在HepG2细胞中过表达。lncRNA高通量组学测序结果显示,共发现102个显著差异表达lncRNAs表达量上调,80个显著差异表达lncRNAs表达量下调。GO功能和KEGG通路富集分析显示,初步挖掘出lncRNA(MSTRG.13995.2)和lncRNA(MSTRG.1960.1)可能是与核黄素代谢信号通路相关的显著差异表达lncRNA,分别通过顺式调控其靶向基因APC-5和FLAD1来影响核黄素代谢信号通路。本试验初步鉴定出lncRNA(MSTRG.13995.2)-APC5和lncRNA(MSTRG.1960.1)-FLAD1可能是影响HepG2细胞核黄素代谢信号通路的lncRNA-mRNA调控网络。     

山豆根多糖对鸡脾脏淋巴细胞信号转导相关分子水平的影响

为探讨山豆根多糖(SSP)对体外培养的鸡脾脏淋巴细胞信号分子的影响,采用终浓度为50、100、200、400μg/mL的山豆根多糖分4、8、12、24 h 4个时间段刺激培养鸡脾脏淋巴细胞,测定培养上清或细胞内环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)、血栓素B2(TXB2)和一氧化氮(NO)信号转导分子水平。结果表明,山豆根多糖在终浓度为100μg/mL时与鸡脾脏淋巴细胞共同培养8 h后能显著升高cAMP(P0.01)、6-keto-PGF1α(P0.05)、TXB2(P0.01)水平,4种浓度的山豆根多糖对NO分子水平随时间的变化有不同程度的升高(P0.05),影响cAMP/cGMP和6-keto-PGF1α/TXB2信号体系。提示山豆根多糖可通过影响免疫细胞内的信号转导而影响机体的免疫功能。     

明矾注射液安全性研究

通过对明矾注射液的毒性、刺激性、溶血性、耐受性等项目进行研究,表明明矾注射液具有低毒性、低刺激性、无溶血性、耐受性强的特点,同时热原检查和无菌检验均符合兽药典规定。从而证实明矾注射液是一种安全性好的新兽药。     

鬼臼多糖对小鼠免疫功能和抗氧化能力的影响

分离提取鬼臼多糖（PEP）,进行理化性质检测、纸层析和红外光谱分析;体外培养小鼠脾脏淋巴细胞,测定了不同浓度PEP对淋巴细胞增殖的影响;观察了PEP（200 mg/kg体重）对小鼠脾脏指数、胸腺指数和溶菌酶含量的影响;选择地塞米松诱导的免疫功能低下模型小鼠,腹腔注射PEP（200 mg/kg体重）后测定T-SOD、MDA、T-AOC活力、O2^·-活力和H2O2水平,观察了PEP对活性氧水平的影响。结果表明,PEP提取获得率为6.38%,不含淀粉、氨基酸和蛋白质,由葡萄糖、果糖、甘露糖和阿拉伯糖组成,红外光谱扫描呈现多糖类物质的特征吸收峰。药理试验表明,PEP对淋巴细胞体外增殖有促进作用（P〈0.05）;PEP可显著提高脾脏指数（P〈0.05）,可极显著对抗由地塞米松所致的T-SOD活力下降（P〈0.01）,能极显著降低血浆中MDA含量（P〈0.01）,极显著提高血浆中T-AOC能力（P〈0.01）,极显著提高脾脏抗超氧阴离子活力（P〈0.01）,降低H2O2含量（P〈0.01）。     

青蒿多糖对小鼠血清中IL-1β,IL-2,IL-6,IFN-γ水平的影响

为观察青蒿多糖(Herba Artemisiae Annuae polysaccharides,HAAP)对小鼠免疫功能的影响,采用木瓜蛋白酶法提取青蒿多糖,将50只昆明种小鼠随机分成5组进行试验.第Ⅰ组为对照组,腹腔注射生理盐水;第Ⅱ组到第Ⅴ组为青蒿多糖组,分别按25,50,100,150mg/kg剂量腹腔注射青蒿多糖,连续给药7d.分离血清测定IL-1β,IL-2,IL-6,IFN-γ质量浓度.结果显示50 mg/kg青蒿多糖能提高血清中IL-1β,IL-2和IFN-γ质量浓度(p0.01);25mg/kg青蒿多糖也能提高血清中IL-6和IFN-γ质量浓度(p0.01);100mg/kg青蒿多糖对IL-2有升高作用,对IL-6和IFN-γ有降低作用(p0.01).结果表明青蒿多糖对小鼠血清中这4种细胞因子有调节作用.提示适当质量浓度的青蒿多糖可能对Th1/Th2的平衡有调节作用.     

山豆根多糖对鸡免疫器官发育及体内活性氧水平的影响

为探讨山豆根多糖(SSP)对鸡免疫功能及体内抗氧化能力的影响,将山豆根多糖分别按50、100、200 mg/kg体重对14日龄公鸡胸部肌肉注射,在21、28、35、42日龄分别测定了鸡血浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性、总抗氧化力(TAOC)、丙二醛(MDA)水平、谷胱甘肽(GSH)含量和一氧化氮(NO)的水平及鸡胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数。结果表明,鸡28日龄时,50～200 mg/kg山豆根多糖能显著提高鸡血浆中还原型谷胱甘肽水平(P0.05,P0.01);鸡35日龄时,50 mg/kg山豆根多糖能显著提高鸡的胸腺指数(P0.05),100 mg/kg山豆根多糖组鸡血浆中SOD活性极显著升高(P0.01),200 mg/kg山豆根多糖组鸡血浆NO水平显著升高(P0.01);鸡42日龄时,50 mg/kg山豆根多糖能显著提高鸡脾脏指数和法氏囊指数(P0.05),100 mg/kg山豆根多糖组鸡血浆中MDA水平极显著升高(P0.01)。提示山豆根多糖能够促进鸡免疫器官发育,并对鸡体内活性氧水平具有调节作用。     

布鲁氏菌介导的mmu-miR-671-5p的靶基因预测与功能富集性分析

为进行布鲁氏菌介导的mmu-miR-671-5p的靶基因预测,本试验利用布鲁氏菌(Brucella)感染RAW264.7细胞后,分别运用miRanda和TargetScan软件进行差异表达的mmu-miR-671-5p靶基因的预测,预测的靶基因分别有11 953和9 252个,将预测结果取交集进行韦恩(Venn)分析,重叠部分的靶基因有3 681个;利用GO与KEGG进行功能富集性分析,再利用PicTar软件进一步对mmu-miR-671-5p的靶基因进行预测,将预测结果与Venn分析结果进一步取交集,结果显示,mmu-miR-671-5p的预测靶基因有7个;实时荧光定量PCR分别验证7个预测靶基因的相对表达量发现,Tnfrsf1b与Tnip1基因相对表达量极显著降低(P0.01);在RAW264.7细胞中转染mmu-miR-671-5p inhibitors,分别验证7个预测靶基因的相对表达量发现,Tnfrsf1b与Tnip1基因的相对表达量极显著升高(P0.01);对mmu-miR-671-5p与Tnfrsf1b和Tnip1的3′非翻译区(3′UTR)结合靶位点分别进行预测,结果初步表明,mmu-miR-671-5p的靶基因为Tnfrsf1b与Tnip1,其预测结合靶位点均只有1个,分别位于Tnfrsf1b和Tnip1 3′UTR全长位置的91和305 bp。本研究结果为进一步揭示mmu-miR-671-5p在布鲁氏菌感染RAW264.7细胞过程中的功能提供科学依据。