非洲猪瘟病毒E183L、B602L、K205R和A104R基因表达及诊断抗原筛选

为了获得非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)重组蛋白pK205R、pE183L、pA104R和pB602L,将Ba71V株的K205R、E183L、A104R和B602L基因分别亚克隆进行原核表达载体pET30a(+),构建重组质粒pET-E183L、pET-B602L、pET-K205R和pET-A104R,转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)。IPTG诱导后,纯化表达的蛋白,并进行Western blotting鉴定,结果4种重组蛋白与预期大小一致,且与ASFV抗体发生特异性反应。为了从表达的4种重组蛋白中筛选最佳诊断抗原,将其分别包被酶标板,间接ELISA检测ASFV阳性血清,发现重组蛋白pK205R、p54和pB602L血清学反应良好;在检测ASFV感染后第13天分离血清时,重组蛋白p54和pK205R效果更佳,这表明p54和pK205R重组蛋白是较好的诊断抗原,可用于ASFV感染后早期或中后期血清学诊断。     

类弹性蛋白和内含肽融合表达纯化重组人防御素3

为建立简单、经济的重组人β防御素3(HBD3)制备方法,将HBD3序列插入类弹性蛋白(ELP)与△I-CM内含肽融合表达载体,将重组载体转化大肠杆菌,20℃下用IPTG诱导融合蛋白表达,在优化条件下进行相变循环,用内含肽自裂解活性释放目的蛋白,用琼脂扩散和最小抑菌浓度法测定重组HBD3抗菌活性。结果表明:融合蛋白在重组菌中获得可溶性表达,第1轮相变循环的纯度为85.7%,再次相变循化的纯度达93.1%;内含肽裂解温度为28℃,孵育12 h裂解效率达90.3%;重组HBD3回收率达74.8%,产量为0.98 mg·L~(-1),纯度为92.6%,内毒素含量低于0.03 U·mg~(-1)(蛋白),对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有显著的抑菌活性。说明基于ELP相变循化和内含肽自裂解的重组蛋白表达与纯化系统可用于重组}tBD3的规模化制备。     

非洲猪瘟病毒无标签重组B602L抗原制备与鉴定

为了获得无标签重组抗原用于非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体检测,本研究将B602L与类弹性蛋白多肽(ELP)基因进行融合表达,利用简单、经济的相变循环(ITC)纯化ELP-B602L融合蛋白,用烟草蚀纹病毒(TEV)蛋白酶活性包涵体切除ELP标签,再用ITC回收重组B602L蛋白;用抗体阳性猪血清对重组B602L进行鉴定;以重组B602L蛋白为包被抗原进行ELISA鉴定。结果显示重组大肠杆菌能正确表达ELP-B602L融合蛋白,纯化融合蛋白纯度大于85%;TEV蛋白酶活性包涵体切除ELP标签的效率大于90%,回收的重组B602L蛋白纯度大于90%,能与抗体阳性猪血清反应;以重组B602L蛋白为包被抗原建立的ELISA与抗体阳性血清反应为阳性,与抗体阴性血清反应为阴性,OD450值与血清稀释倍数具有线性相关性。     

盘尾丝虫ASP1蛋白佐剂活性区不同标签融合表达与佐剂活性比较

为了探明纯化标签对盘尾丝虫活化相关分泌蛋白1(activation-associated secreted protein 1,ASP1)佐剂活性的影响,将其佐剂活性区PR-1编码序列分别与类弹性蛋白多肽(elastin-like polypeptide,ELP)、ELK16自聚肽或His标签进行融合表达,用相变循环、离心洗涤和镍亲和层析进行融合蛋白纯化;将ELP与传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)VP2基因片段进行融合表达,用蛋白酶切除ELP标签后与不同标签融合PR-1免疫小鼠,两次免疫后不同时间采血分离血清,采用ELISA检测VP2特异IgG、IgG1和IgG2c滴度,用试剂盒检测免疫小鼠血清的IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-10浓度。结果显示,ELP-PR1、ELK-PR1、His-PR1和ELP-VP2融合蛋白在重组大肠杆菌中均获得正确表达,纯化蛋白纯度大于90%;3种标签融合PR-1均能增强免疫小鼠的抗原特异IgG、IgG1和IgG2应答,并能刺激小鼠产生IFN-γ、TNF-α、IL-6或IL-10细胞因子。在3种PR-1融合蛋白中,ELP-PR1的佐剂活性最强,ELK-PR1与不完全弗氏佐剂相当。本研究探索了不同纯化标签对PR-1免疫佐剂活性的影响,为传染性法氏囊病新型亚单位疫苗佐剂研制提供思路。     

欧李在宁夏银川的引种表现及丰产栽培技术

概述了欧李在宁夏银川的引种表现,并介绍了其丰产栽培技术,包括整地、栽植、肥水管理、修剪、病虫害防治等内容,以供种植户参考。     

以市树市花彰显回乡城市园林特色

市树市花是一个城市功能建设完成后，提升城市化品味、彰显城市文化形象的重要标志。银川市评选出的市树市花具有浓郁的回乡园林特色，是银川现代城市园林形象的“名片”。因此，应加大种质资源研究、保护、规划和开发推广力度。     

产蛋鸡非典型性新城疫并发鸡白痢沙门氏菌病的诊治

1发病情况及流行病学 山东某鸡场蛋鸡4000只于5月龄开始产蛋，7月龄产蛋率达65％，从25周龄开始发病，到32周龄达发病高峰，这期间产蛋率在50％徘徊很久，且软皮蛋和破蛋比例居高不下。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒接触感染仔猪模型的建立

为了建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)接触感染模型,将易感仔猪与PRRSV人工感染仔猪在隔离器中同居饲养,每日观察记录体温变化和临床症状,定期采集血清和粪便样品,用荧光定量RT-PCR检测病毒血症和粪便排毒水平;对病死猪和试验结束迫杀猪进行剖检和肺脏组织病理学检查,并检测各器官病毒载量和组织分布。结果显示:接触感染仔猪出现高热和PRRS症状时间分别较人工接种猪推迟2~3d;第3天起血清检测PRRSV阳性,第10天病毒血症上升至较高水平(108.6拷贝/mL);第5天起粪便检测PRRSV阳性,第7天粪便排毒量上升至较高水平(103.9拷贝/0.1g);3头接触感染仔猪分别于同居后第12天和第13天死亡,较人工接种猪推迟1~2d,病死猪的主要器官病毒载量以及剖检和肺脏显微病理变化与人工接种病死猪相似。这些结果表明,本研究建立的接触感染仔猪模型可用于PRRS疫苗免疫效果评价。     

联合注射牛γ干扰素和人溶菌酶表达质粒对奶牛乳房炎的治疗效果

通过乳腺注射牛γ干扰素(BoINF-γ)和人溶菌酶(LYZ)表达质粒,比较单独和联合注射重组质粒与抗生素对奶牛乳房炎的治疗效果。将PCR扩增的BoINF-γc DNA插入真核表达载体pcDNAK,用重组质粒pcDNAK-BoINF-γ转染NIH 3T3细胞,经免疫荧光试验证明,重组质粒能正确表达。将91个奶牛乳房炎乳区分为4组,通过乳腺穿刺法注射,第1组注射400μg pcDNAKLYZ,第2组注射400μg pcDNAK-BoINF-γ,第3组注射400μg pcDNAKLYZ和400μg pcDNAK-BoINF-γ,第4组注射100 IU青霉素和25μg链霉素,次日重复注射1次。在注射后10 d进行临床症状观察、乳汁体细胞检测和细菌培养计数。结果显示:注射pcDNAKLYZ对临床型乳房炎的治疗效果为80%,对隐性乳房炎的治疗效果为79.2%;注射pcDNAK-BoINF-γ对临床型乳房炎的治疗效果为50%,对隐性乳房炎的治疗效果为66.7%;联合注射pcDNAKLYZ和pcDNAKBoINF-γ对临床型乳房炎的治疗效果为100%,对隐性乳房炎的治疗效果为83.5%;青链霉素合剂对临床型乳房炎的治疗效果为50%,对隐性乳房炎的治疗效果为60%。试验结果表明,联合注射人溶菌酶和牛γ干扰素表达质粒对奶牛乳房炎具有更好的治疗效果。     

草坪增绿剂在营造冬季景观中的应用

介绍了草坪增绿剂在宁夏银川冬季景观营造中的应用，经过在相同面积喷施不同浓度草坪增绿剂和相同浓度不同喷施面积及不同时期、不同浓度、不同修剪高度的喷施试验；筛选出适宜弥补生长期缺陷的草坪增绿剂最佳稀释浓度为60～70倍、每1L药喷施面积为300m^2～400m^2；枯黄期稀释30～40倍，喷施面积为150m^2；喷施最佳修剪高度为生长期3cm～6cm、枯黄期为6cm～9cm。枯黄期最佳喷施时期为草坪表色黄底色绿．当温度在 3℃以上时，着色期可维持90～120天，对城市冬季景观起到了改善作用。