利用杆状病毒表达系统表达奶牛触珠蛋白及其单克隆抗体的制备

为了建立奶牛早期妊娠诊断检测方法,试验用GenBank公布的奶牛触珠蛋白(haptoglobin)Hp基因序列设计引物,扩增出Hp基因全长片段,将Hp基因亚克隆至Bac-to-Bac昆虫/杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTb的多克隆位点中,转入含昆虫杆状病毒骨架质粒的E.coli DH10Bac感受态细胞中,通过蓝白斑筛选获得穿梭质粒rBacmid-Hp阳性克隆,在脂质体介导下转染昆虫细胞sf_9,获得含Hp基因的重组杆状病毒质粒rBacmid-Hp;用纯化的rBacmid-Hp蛋白免疫Balb/c小鼠,将免疫小鼠的脾细胞和鼠SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA法和有限稀释法筛选杂交瘤细胞;分别用ELISA法、Western-blot检测单克隆抗体腹水效价及特异性。结果表明:在sf_9细胞中成功表达Hp蛋白,该蛋白具有良好的生物学活性;制备了8株单克隆抗体,分别命名为3B_(12)、4F_4、4F_(11)、5D_7、5G_8、7E_5、10C_3和12F_9,腹水效价均在1∶5.12×10~4以上;亚类鉴定显示,除3B_(12)、4F_(11)、10C_3为IgG_(2a)外,其余单克隆抗体均属于IgG_1;筛选出1对配对单克隆抗体,分别为12F_9和4F_(11)。说明Hp蛋白可在Bac-to-Bac昆虫/杆状病毒表达系统中高效表达,并成功筛选出一对配对的高效单克隆抗体。     

SbER10＿X1调控饲用高粱光合作用和生物产量的功能特性分析

为了分析SbER10＿X1调控高粱光合作用和生物产量的功能特性，本研究以高粱SbER10＿X1基因过表达株系（SbERex）、目的基因沉默株系（SbERin）和野生型对照株系（WT）为材料，鉴定转基因株系的阳性和目的基因表达水平，挑选SbERex 5和SbERin 6株系，切片观察茎秆细胞大小，测定主茎秆内植物激素含量，分析光合作用相关参数，并连续两年调查生物量相关指标。结果表明：与WT株系相比，SbERex 5茎秆中赤霉素含量显著增加，脱落酸含量显著降低，导致过表达株系茎秆细胞显著增大，株高显著增加，而SbERin 6株系的赤霉素含量显著减少，脱落酸含量显著升高，但主茎秆细胞大小变化不显著。SbERex 5株系的光合速率和水分利用效率显著增加，引起SbERex 5的株高、分蘖数、叶面积、单株产量和单株生物量显著高于WT，而SbERin 6仅存在减小趋势。结果表明SbER10＿X1可以影响植物激素合成，导致高粱细胞体积增大，光合能力增强，有效提升饲用高粱生物产量。     

植物黄酮在奶牛生产中的应用研究进展

植物黄酮是指以植物为提取来源的黄酮类物质,是一种来源广泛、效果优良、应用环保的奶牛饲料添加剂。植物黄酮主要包含黄烷醇、黄酮、黄酮醇、黄烷酮、异黄酮和花青素等亚类。植物黄酮在奶牛生产中已经被证实具有抗炎、抗菌、抗氧化、免疫等积极作用。本文主要综述了植物黄酮的理化性质、生物活性功能和在奶牛生产中的应用,以期为植物黄酮在奶牛产业实践中精准利用提供科学参考。     

农业行业协会在我国农产品反倾销中的定位分析

基于进口产品对我国农产品市场造成极大冲击及我国对其实施反倾销的现状,从反倾销主体、农产品生产经营、农产品从业者的法规认知等角度分析我国对进口产品反倾销不足的原因,明确农业行业协会在反倾销活动中的主体地位及角色定位,旨在更好地发挥其自身作用,维护我国农产品企业合法权益。     

siRNA抑制牛子宫内膜上皮细胞Nrf2基因的表达研究

为探讨核因子E2相关因子(nuclear factor E2 related factor,Nrf2)基因沉默及激活后对牛子宫内膜上皮细胞的影响,本试验利用小分子干扰(siRNA)技术及Nrf2的激动剂叔丁基对苯二酚(tBHQ),分别从Nrf2基因的下调和上调表达来研究Nrf2对牛子宫内膜上皮细胞中血红素加氧酶-1(HO-1)和Homebox A10(HOXA10)基因表达的影响。结果显示,经实时荧光定量PCR方法检测,在设计的2条siRNA序列(siRNA-1209和siRNA-1672)中,siRNA-1672在终浓度为75 nmol/L、作用时间24 h时抑制效果较好,抑制效率在80%以上;经Western blotting方法检测,Nrf2蛋白表达水平在转染后96 h极显著下降(P0.01),而HO-1和HOXA10的mRNA表达量分别下降了60%和70%(P0.01),蛋白表达量在96 h后极显著或显著下降(P0.01;P0.05)。此外,经CCK8方法检测,Nrf2基因表达沉默后,牛子宫内膜上皮细胞增殖能力减弱。而在tBHQ激活Nrf2试验中,经Western blotting方法检测,tBHQ终浓度为30μmol/L时Nrf2蛋白表达量最高,极显著高于对照组(P0.01),且HO-1和HOXA10的蛋白表达量与对照组相比也明显上升。结果表明,本试验设计的siRNA-1672能特异性地抑制牛子宫内膜上皮细胞Nrf2的表达,而抑制Nrf2的表达会导致牛子宫内膜上皮细胞增殖能力下降,且Nrf2对牛子宫内膜上皮细胞HO-1和HOXA10基因表达存在调控作用。     

精氨酸对干扰素-tau处理牛子宫内膜上皮细胞基因表达的影响

试验旨在研究精氨酸（Arg）对干扰素-tau（interferon-tau,IFNT）处理的牛子宫内膜上皮细胞的调控作用及其可能的机制。将牛子宫内膜上皮细胞接种至6孔细胞培养板中,当达到70%~80%融合度时,向细胞培养基中加入不同浓度的IFNT（0、100 ng/mL）,12 h后收集细胞检测未折叠蛋白反应（unfolded protein response,UPR）通路相关基因的表达情况;用不同浓度（0、0.05、0.1、0.2、0.5、1、2 mmol/L）Arg处理牛子宫内膜上皮细胞,24 h后用CCK8法检测其对增殖率的影响,筛选出Arg的最佳作用浓度;将子宫内膜上皮细胞随机分为Arg饥饿组、Arg饥饿+IFNT处理组、Arg添加+IFNT处理组,在Arg饥饿或添加处理6 h后加入100 ng/mL IFNT,IFNT处理12 h后检测UPR通路（BiP、PERK、CHOP、ATF6）、凋亡（BAX、Caspase9）和容受性（HOXA10）相关基因表达情况。结果显示,IFNT刺激可诱导牛子宫内膜上皮细胞UPR通路相关基因BiP、PERK、CHOP、ATF6的表达显著上调;0.5 mmol/L Arg可显著提高牛子宫内膜上皮细胞的增殖率（P<0.05）;Arg缺失可显著上调IFNT诱导下牛子宫内膜上皮细胞中BiP、PERK、CHOP、ATF6和BAX基因mRNA的表达（P<0.05）,并显著下调HOXA10基因mRNA的表达（P<0.05）,但对Caspase9基因mRNA表达无显著影响（P>0.05）。结果表明,Arg缺失可导致牛子宫内膜上皮细胞发生内质网应激,并影响子宫内膜宫受性的建立,可为进一步揭示Arg对牛子宫内膜的调控机制及制定减少妊娠早期胚胎丢失的营养调控策略提供参考。     

热应激对奶山羊瘤胃发酵指标的影响及有机铬对其的调控作用

本试验旨在研究热应激对奶山羊瘤胃内pH、氨态氮(NH3-N)和挥发性脂肪酸(VFA)浓度的影响,以及添加吡啶羧酸铬对其的调控作用。选用体重相近[(20.75±1.88)kg]的波尔山羊4只,采用自身对照,分3期试验,分别为对照组、热应激组和加铬组:对照组山羊在空调房中饲喂,温湿指数(THI)在70以下,处于非热应激状态;热应激组和加铬组山羊在室温动物房中饲喂,2组THI无显著差异(P>0.05),达79以上,处在相似的热应激状态。加铬组饲粮为基础饲粮中添加吡啶羧酸铬(铬含量为0.2 mg/kg饲粮)。每期试验14 d,在试验的第13天采集瘤胃液,测定pH、NH3-N和VFA浓度。结果表明:热应激可以显著降低奶山羊瘤胃内pH(P<0.05),显著提高瘤胃内NH3-N、总挥发性脂肪酸(TVFA)、乙酸、丙酸浓度(P<0.05),显著降低乙酸/丙酸(P<0.05)。饲粮中添加吡啶羧酸铬后可以显著提高热应激奶山羊瘤胃乙酸、丁酸浓度和乙酸/丙酸(P<0.05),显著降低瘤胃丙酸浓度(P<0.05),对瘤胃pH、NH3-N浓度影响不显著(P>0.05)。由此可见,热应激使瘤胃pH显著降低,显著增加了VFA浓度,改变了瘤胃发酵模式;饲粮添加吡啶羧酸铬可调节瘤胃VFA浓度,对热应激造成的影响有一定的调节作用。     

湖北省奶牛乳房炎的病原学分析

为了制定有效的奶牛乳房炎防制措施,从病原菌分离、鉴定、耐药性研究等方面,调查了奶牛乳房炎病原菌的流行病学和耐药性,并研究了奶牛乳房炎的疫苗防控措施。细菌鉴定表明,导致奶牛乳房炎的病原菌主要为葡萄球菌和链球菌,占87.1%(54/62);其次是各类杆菌占12.9%(8/62)。药敏试验显示多数病原菌对3种以上的乳房炎常用药物具有耐药性。     

城市环境卫生规划实施后评估与对策——以《临沂市环境卫生专业规划(2009-2020)》为例

以《临沂市环境卫生专业规划(2009-2020)》为例,对环境卫生规划编制后实施情况进行了分析,采用定性与定量结合的方法,从主要规划目标指标和规划项目两个方面进行了评估,通过规划与实际值前后对比得出每一部分的偏差情况,评价了其符合程度。同时对规划实施存在的问题进行了分析,提出了相应的解决对策,以期为今后环境卫生规划的后评估提供参考。     

不同温度对牛精子相关抗原11D基因的影响

为探讨高温对精子膜蛋白牛精子相关抗原11D （sperm associated antigen 11,SPAG11D）表达水平的影响,试验采用了实时荧光定量PCR和Western boltting方法检测了牛睾丸原代细胞和娟姗牛、槟榔江牛、西门塔尔牛的正常精子及低活力精子中SPAG11D的表达。结果显示,牛睾丸原代细胞在不同温度（32、34、36、38和40℃）下培养24 h,SPAG11D的mRNA及蛋白在36℃时表达水平最高,且高温时表达水平比低温时要高;培养48 h时,SPAG11D的mRNA表达基本和24 h相一致,但蛋白表达水平在高温时明显下降。此外,槟榔江牛和娟姗牛低活力精子中SPAG11D的蛋白表达量比正常精子明显降低,而在西门塔尔牛的精液中变化不明显。