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为了建立奶牛早期妊娠诊断检测方法,试验用GenBank公布的奶牛触珠蛋白(haptoglobin)Hp基因序列设计引物,扩增出Hp基因全长片段,将Hp基因亚克隆至Bac-to-Bac昆虫/杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTb的多克隆位点中,转入含昆虫杆状病毒骨架质粒的E.coli DH10Bac感受态细胞中,通过蓝白斑筛选获得穿梭质粒rBacmid-Hp阳性克隆,在脂质体介导下转染昆虫细胞sf_9,获得含Hp基因的重组杆状病毒质粒rBacmid-Hp;用纯化的rBacmid-Hp蛋白免疫Balb/c小鼠,将免疫小鼠的脾细胞和鼠SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA法和有限稀释法筛选杂交瘤细胞;分别用ELISA法、Western-blot检测单克隆抗体腹水效价及特异性。结果表明:在sf_9细胞中成功表达Hp蛋白,该蛋白具有良好的生物学活性;制备了8株单克隆抗体,分别命名为3B_(12)、4F_4、4F_(11)、5D_7、5G_8、7E_5、10C_3和12F_9,腹水效价均在1∶5.12×10~4以上;亚类鉴定显示,除3B_(12)、4F_(11)、10C_3为IgG_(2a)外,其余单克隆抗体均属于IgG_1;筛选出1对配对单克隆抗体,分别为12F_9和4F_(11)。说明Hp蛋白可在Bac-to-Bac昆虫/杆状病毒表达系统中高效表达,并成功筛选出一对配对的高效单克隆抗体。 相似文献
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为了利用禁食初乳(colostrum-deprived,CD)仔猪构建可靠的猪格拉泽氏病实验动物模型,本研究分别选取12头新生通城仔猪和15头新生杜长大仔猪,母猪自然分娩后对新生仔猪立即隔离并做必要消毒处理后实施人工喂养;45~46日龄,CD仔猪经气管内接种致死剂量(109 CFU)的副猪嗜血杆菌(0165菌株,血清型5)。结果显示:⑴利用本研究优化、建立的饲喂方案使得CD仔猪攻毒前存活率达到80%~83.3%;⑵所有通城CD仔猪经攻毒后临床上表现出典型的格拉泽氏病病征,其中66.7%的CD仔猪可于攻毒后存活3d;而杜长大CD仔猪可能由于存在猪胸膜肺炎放线杆菌感染导致攻毒后无明显病征;⑶通城CD仔猪剖检后明显可见纤维素性心包炎、腹膜炎、关节炎等病症,并在血液和肺脏组织中成功鉴定到细菌;⑷组织病理分析发现,细菌感染导致心脏等多种组织存在纤维蛋白沉积伴随血管肿胀和血栓,脾脏组织淋巴细胞数量减少;⑸感染可能抑制淋巴细胞增殖并导致外周血中单核细胞数量减少。以上结果表明,本研究利用通城CD仔猪成功建立了副猪嗜血杆菌感染的实验动物模型;副猪嗜血杆菌和猪胸膜肺炎放线杆菌双阴性是保证模型构建成功的关键。 相似文献
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荸荠(Eleacharis tuberosa),俗称"地栗"、"马蹄"、"乌芋",属莎草科,多年生水生草本植物.取用于地下匍匐球茎,是一种多用途的农产品.除作水果食用外,还可作菜肴、制淀粉、加工罐头及药用.近年来,随着人民生活水平的提高,荸荠的市场需求量日益增大,荸荠已成为镇宁县农民经济收入的重要部份.2004年全县种植面积493 hm2,平均667 m2产1 450kg,比正常年份减产550kg,减产率27.5%,严重影响农民经济收入和县财政收入.鉴于镇宁县实际情况,结合气象因子、品种资源、品种布局及耕作制度等综合分析,对2004年荸荠减产原因特作如下分析: 相似文献
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试验旨在研究精氨酸(Arg)对干扰素-tau(interferon-tau,IFNT)处理的牛子宫内膜上皮细胞的调控作用及其可能的机制。将牛子宫内膜上皮细胞接种至6孔细胞培养板中,当达到70%~80%融合度时,向细胞培养基中加入不同浓度的IFNT(0、100 ng/mL),12 h后收集细胞检测未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)通路相关基因的表达情况;用不同浓度(0、0.05、0.1、0.2、0.5、1、2 mmol/L)Arg处理牛子宫内膜上皮细胞,24 h后用CCK8法检测其对增殖率的影响,筛选出Arg的最佳作用浓度;将子宫内膜上皮细胞随机分为Arg饥饿组、Arg饥饿+IFNT处理组、Arg添加+IFNT处理组,在Arg饥饿或添加处理6 h后加入100 ng/mL IFNT,IFNT处理12 h后检测UPR通路(BiP、PERK、CHOP、ATF6)、凋亡(BAX、Caspase9)和容受性(HOXA10)相关基因表达情况。结果显示,IFNT刺激可诱导牛子宫内膜上皮细胞UPR通路相关基因BiP、PERK、CHOP、ATF6的表达显著上调;0.5 mmol/L Arg可显著提高牛子宫内膜上皮细胞的增殖率(P<0.05);Arg缺失可显著上调IFNT诱导下牛子宫内膜上皮细胞中BiP、PERK、CHOP、ATF6和BAX基因mRNA的表达(P<0.05),并显著下调HOXA10基因mRNA的表达(P<0.05),但对Caspase9基因mRNA表达无显著影响(P>0.05)。结果表明,Arg缺失可导致牛子宫内膜上皮细胞发生内质网应激,并影响子宫内膜宫受性的建立,可为进一步揭示Arg对牛子宫内膜的调控机制及制定减少妊娠早期胚胎丢失的营养调控策略提供参考。 相似文献