利用杆状病毒表达系统表达奶牛触珠蛋白及其单克隆抗体的制备

为了建立奶牛早期妊娠诊断检测方法,试验用GenBank公布的奶牛触珠蛋白(haptoglobin)Hp基因序列设计引物,扩增出Hp基因全长片段,将Hp基因亚克隆至Bac-to-Bac昆虫/杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTb的多克隆位点中,转入含昆虫杆状病毒骨架质粒的E.coli DH10Bac感受态细胞中,通过蓝白斑筛选获得穿梭质粒rBacmid-Hp阳性克隆,在脂质体介导下转染昆虫细胞sf_9,获得含Hp基因的重组杆状病毒质粒rBacmid-Hp;用纯化的rBacmid-Hp蛋白免疫Balb/c小鼠,将免疫小鼠的脾细胞和鼠SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA法和有限稀释法筛选杂交瘤细胞;分别用ELISA法、Western-blot检测单克隆抗体腹水效价及特异性。结果表明:在sf_9细胞中成功表达Hp蛋白,该蛋白具有良好的生物学活性;制备了8株单克隆抗体,分别命名为3B_(12)、4F_4、4F_(11)、5D_7、5G_8、7E_5、10C_3和12F_9,腹水效价均在1∶5.12×10~4以上;亚类鉴定显示,除3B_(12)、4F_(11)、10C_3为IgG_(2a)外,其余单克隆抗体均属于IgG_1;筛选出1对配对单克隆抗体,分别为12F_9和4F_(11)。说明Hp蛋白可在Bac-to-Bac昆虫/杆状病毒表达系统中高效表达,并成功筛选出一对配对的高效单克隆抗体。     

采用主成分分析和隶属函数法综合评价14份青贮玉米品种的生产性能

为筛选出适宜湖北地区种植的全株青贮玉米品种,采用随机区组设计,对14个青贮玉米品种的适应性、抗逆性、生物学产量和粗蛋白等指标进行研究。结果表明,明饲1号和花单1号生育期相对较长,其余品种在92~95 d。大部分品种的株高在200 cm以上;除华丰3号倒伏率较高外,其余品种几无倒伏;收获时,雅玉8号保绿度较其它品种相对较高。参试材料中,8493的鲜草和干物质产量分别为81 177.85 kg/hm2和20 044.37 kg/hm2,均显著高于其它品种(P0.05),而粗蛋白含量最高的是雅玉8号,达9.56%。对主要农艺性状、产量和品质指标进行主成分分析提取了3个主成分,累计贡献率达86.765%。结合各指标的相关性分析,选择单穗质量、干物质产量和株高3指标采用模糊数学隶属函数法进行综合评价,结果发现雅玉8号的隶属函数值最高,为0.78,其次为华玉5号,农大86表现最差。     

siRNA抑制牛子宫内膜上皮细胞Nrf2基因的表达研究

为探讨核因子E2相关因子(nuclear factor E2 related factor,Nrf2)基因沉默及激活后对牛子宫内膜上皮细胞的影响,本试验利用小分子干扰(siRNA)技术及Nrf2的激动剂叔丁基对苯二酚(tBHQ),分别从Nrf2基因的下调和上调表达来研究Nrf2对牛子宫内膜上皮细胞中血红素加氧酶-1(HO-1)和Homebox A10(HOXA10)基因表达的影响。结果显示,经实时荧光定量PCR方法检测,在设计的2条siRNA序列(siRNA-1209和siRNA-1672)中,siRNA-1672在终浓度为75 nmol/L、作用时间24 h时抑制效果较好,抑制效率在80%以上;经Western blotting方法检测,Nrf2蛋白表达水平在转染后96 h极显著下降(P0.01),而HO-1和HOXA10的mRNA表达量分别下降了60%和70%(P0.01),蛋白表达量在96 h后极显著或显著下降(P0.01;P0.05)。此外,经CCK8方法检测,Nrf2基因表达沉默后,牛子宫内膜上皮细胞增殖能力减弱。而在tBHQ激活Nrf2试验中,经Western blotting方法检测,tBHQ终浓度为30μmol/L时Nrf2蛋白表达量最高,极显著高于对照组(P0.01),且HO-1和HOXA10的蛋白表达量与对照组相比也明显上升。结果表明,本试验设计的siRNA-1672能特异性地抑制牛子宫内膜上皮细胞Nrf2的表达,而抑制Nrf2的表达会导致牛子宫内膜上皮细胞增殖能力下降,且Nrf2对牛子宫内膜上皮细胞HO-1和HOXA10基因表达存在调控作用。     

浅析奶牛繁殖障碍性疾病

本文从生殖系统疾病、饲养管理和繁殖操作技术三个因素浅析奶牛繁殖障碍的发生原因,综述了卵巢功能失调、子宫内膜炎及胎衣不下等常见奶牛繁殖障碍性疾病的治疗技术研究进展,最后提出奶牛繁殖障碍预防对策。     

不同饲用甜高粱品种与青贮玉米产量、品质的比较试验

为明确饲用甜高粱的产量和品质,筛选出适合代替青贮玉米的饲料作物,进而有效缓解冬季畜牧养殖青贮饲料资源缺乏问题,选取11个饲用甜高粱品种,以湖北省黄冈地区主要青贮玉米种植品种雅玉8号为对照,分析其产量和品质。结果显示,饲用甜高粱再生能力强,2次收获总产量均高于对照组,但大部分饲用甜高粱的品质低于对照雅玉8号;辽甜13号品质与对照相当,其中性洗涤纤维含量47.75%、酸性洗涤纤维含量30.66%、粗蛋白含量8.40%,介于青贮玉米等级2～3级,头季饲用甜高粱收获产量83.65 t/hm~2,再生饲用甜高粱收获产量31.28 t/hm~2,累计产量114.93 t/hm~2,较对照组增产112.6%;因此辽甜13号相比青贮玉米,具有产量高,青贮品质好、一次播种多次收获等优点,可以代替青贮玉米,在鄂东地区大面积种植,晋草11号、辽甜1号适合做青饲料,用来鲜食喂养牲畜。     

奶牛环保养殖床场一体化技术试验

随着奶牛养殖规模化程度的提高,粪污处理难的问题日益凸显。根据新形势下环境保护要求,通过对黄冈梅家墩牧业有限责任公司创新应用奶牛床场一体化技术,从奶牛养殖环保性、节约成本、提质增效与产业促进作用等方面与其他现有养殖模式进行了对比分析。结果表明,奶牛床场一体化技术从根本上有效解决了奶牛养殖产生粪污的排放与污染问题。在规模化奶牛养殖中,对节约水电、垫料、节省土地与设备投资、提高奶牛产品质量与安全、提高生产性能和劳动效率、降低奶牛发病率和粪污资源化利用等方面具有较好经济效益与社会效益。     

适宜湖北中部地区种植的青贮玉米品种筛选试验

为选出适合湖北中部地区种植的高产优质青贮玉米品种,采取随机区组设计,对12份材料进行品种比较试验,对其物候期、株高、生物产量和粗蛋白进行研究。结果表明,雅玉8号植株高大、适应性好,果穗饱满,营养含量丰富,干物质产量达16 038.03 kg/hm2,刈割时粗蛋白含量为9.56%,是湖北中部地区种植青贮玉米的首选品种。其次花单1号和华玉5号也相对较好。     

南方地区奶牛场蚊蝇危害及综合防控措施

本文阐述了奶牛场内蚊蝇的危害、蚊蝇的生物学特征及其生活习性,并对南方地区奶牛场蚊蝇综合防控给出了建议,旨在提醒广大奶牛养殖户重视蚊蝇危害,并采取若干蚊蝇防控措施,希望对我国南方地区奶牛场降低蚊蝇危害、提高奶牛养殖水平有一定借鉴意义。     

湖北省黄冈市花生田昆虫群落结构及多样性研究

利用马来氏网收集法,2014年5月-2016年7月开展了黄冈市花生田昆虫系统调查,阐明当地花生田的昆虫群落结构及相关群体指数动态规律。结果表明:黄冈市花生田昆虫58112头,隶属于14目150科,以膜翅目(24.67%)、鞘翅目(17.33%)、双翅目(16.67%)、半翅目21科(14.0%)、鳞翅目(12.0%)为优势类群;群落结构丰富度峰值出现在2014年6月(171)和2015年8月(168);丰盛度峰值出现在2014年10月(22468);多样性指数在1.67~5.32之间,峰值出现在2014年10月(5.32);均匀度指数在0.4~0.8之间;优势集中指数在0.0771~0.6556之间。从科级水平来看,主要花生害虫有叶蝉科、潜蝇科和蚜科;主要天敌有姬蜂科、瓢甲科和金小蜂科。     

siRNA抑制牛子宫内膜上皮细胞Nrf2基因的表达研究

为探讨核因子E2相关因子（nuclear factor E2 related factor，Nrf2）基因沉默及激活后对牛子宫内膜上皮细胞的影响，本试验利用小分子干扰（siRNA）技术及Nrf2的激动剂叔丁基对苯二酚（tBHQ），分别从Nrf2基因的下调和上调表达来研究Nrf2对牛子宫内膜上皮细胞中血红素加氧酶-1（HO-1）和Homebox A10（HOXA10）基因表达的影响。结果显示，经实时荧光定量PCR方法检测，在设计的2条siRNA序列（siRNA-1209和siRNA-1672）中，siRNA-1672在终浓度为75 nmol/L、作用时间24 h时抑制效果较好，抑制效率在80%以上；经Western blotting方法检测，Nrf2蛋白表达水平在转染后96 h极显著下降（P<0.01），而HO-1和HOXA10的mRNA表达量分别下降了60%和70%（P<0.01），蛋白表达量在96 h后极显著或显著下降（P<0.01；P<0.05）。此外，经CCK8方法检测，Nrf2基因表达沉默后，牛子宫内膜上皮细胞增殖能力减弱。而在tBHQ激活Nrf2试验中，经Western blotting方法检测，tBHQ终浓度为30 μmol/L时Nrf2蛋白表达量最高，极显著高于对照组（P<0.01），且HO-1和HOXA10的蛋白表达量与对照组相比也明显上升。结果表明，本试验设计的siRNA-1672能特异性地抑制牛子宫内膜上皮细胞Nrf2的表达，而抑制Nrf2的表达会导致牛子宫内膜上皮细胞增殖能力下降，且Nrf2对牛子宫内膜上皮细胞HO-1和HOXA10基因表达存在调控作用。