利用杆状病毒表达系统表达奶牛触珠蛋白及其单克隆抗体的制备

为了建立奶牛早期妊娠诊断检测方法,试验用GenBank公布的奶牛触珠蛋白(haptoglobin)Hp基因序列设计引物,扩增出Hp基因全长片段,将Hp基因亚克隆至Bac-to-Bac昆虫/杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTb的多克隆位点中,转入含昆虫杆状病毒骨架质粒的E.coli DH10Bac感受态细胞中,通过蓝白斑筛选获得穿梭质粒rBacmid-Hp阳性克隆,在脂质体介导下转染昆虫细胞sf_9,获得含Hp基因的重组杆状病毒质粒rBacmid-Hp;用纯化的rBacmid-Hp蛋白免疫Balb/c小鼠,将免疫小鼠的脾细胞和鼠SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA法和有限稀释法筛选杂交瘤细胞;分别用ELISA法、Western-blot检测单克隆抗体腹水效价及特异性。结果表明:在sf_9细胞中成功表达Hp蛋白,该蛋白具有良好的生物学活性;制备了8株单克隆抗体,分别命名为3B_(12)、4F_4、4F_(11)、5D_7、5G_8、7E_5、10C_3和12F_9,腹水效价均在1∶5.12×10~4以上;亚类鉴定显示,除3B_(12)、4F_(11)、10C_3为IgG_(2a)外,其余单克隆抗体均属于IgG_1;筛选出1对配对单克隆抗体,分别为12F_9和4F_(11)。说明Hp蛋白可在Bac-to-Bac昆虫/杆状病毒表达系统中高效表达,并成功筛选出一对配对的高效单克隆抗体。     

哺乳动物防御素生物学研究进展

<正>动物防御素是一类内源性阳离子短肽,广泛分布于包括人类在内的各种哺乳动物体内,具有广谱抗菌活性,又被称为抗菌肽(AMPS)。早在1963年,美国科学家Zeya等人在研究豚鼠白细胞裂解物时就发现该类具有抗菌活性的物质[1]。随后,人们在昆虫、鸟类、鱼类、两栖类、爬行类和哺乳类等动物体内均发现有防御素的存在。到目前为止,已从多种动物和人体内分离出百余种防御素。哺乳动物防御素的抗微生物机理独特,不易产生耐药性,是机体抵抗外来致病性微生物侵袭     

污泥改良沙质土壤合适配比及对白菜生长的影响

沙质土壤涵水性能差,营养基质缺乏,探索城市污泥改良沙质土壤的可行性及合适配比具有重要实际意义。通过室内盆栽试验,研究在沙质土壤中施入不同比例的城市污泥对土壤营养状况及白菜(Brassica chinensis L.)生长的影响,并对改良后土壤中重金属含量作出评价。试验结果表明,当污泥添加量在3%～10%时,可以明显促进白菜的发芽与生长,其中添加量为5%时效果最好,当污泥添加量达到20%时就会产生强烈的抑制作用,白菜的发芽率和长势均比对照组差。城市污泥的添加可促进植株生长基质中氮、磷、钾和有机质养分的提高,大幅度改善土壤营养状况,但对钾含量的提升效果不明显。污泥质量分数在20%以下时,复合基质中重金属含量均未超过GB15618—1995《土壤环境质量标准》中二级标准pH值大于7.5时的限值。由此可见,城市污泥改良沙质土壤具有一定的可行性和前景。     

Ⅰ型鸭疫里氏杆菌油乳剂灭活苗的研制

以Ⅰ型鸭疫里氏杆菌武汉分离株为菌种制成油乳剂灭活疫苗,测得最佳免疫剂量为0.3mL/只;免疫后3d、7d、10d、14d和21d的攻毒保护率分别为80%、90%、90%、100%和100%;平均保护率可达92%,免疫后3d即能在血清中测出特异性抗体,效价逐渐升高,直至免疫后21d。试验表明,该疫苗具有良好的安全性和免疫原性,能有效预防鸭传染性浆膜炎的发生。     

广西农业信息化现状与发展策略

农业信息化是农业现代化的重要标志和关键,对农业产业发展意义重大。本文探讨了农业信息化的内涵、作用及其发展趋势,分析了广西农业信息化现状,提出了进一步发展的若干策略。     

肉鸭霍乱的诊治

禽零乱又称禽出血性败血症,禽巴氏杆菌病,是鸡、鸭、鹅、火鸡的一种急性败血性传染病,临床上分为急性和慢性两种,急性型表现为败血症,发病率和致死率都很高,慢性特征表现为慢性呼吸道炎、水肿、关节炎、发病率和死亡率都很低.     

卵泡刺激素受体基因作为产仔数候选基因的研究

分析了FSHR基因2个位点（FSHRA、FSHRB）的PCR－SSCP、PCR－RFLPs多态性，利用SAS软件分析了多态性与母猪产仔数间连锁关系。找到了1个影响产仔数的新的变异位点FSHRB，该位点多态性显著地影响猪产仔数性状，即基因型BB的产仔数显著地高于AB、AA基因型。结果显示出该位点具有作为常规选育的辅助选择的有效的分子标记潜力。     

siRNA抑制牛子宫内膜上皮细胞Nrf2基因的表达研究

为探讨核因子E2相关因子(nuclear factor E2 related factor,Nrf2)基因沉默及激活后对牛子宫内膜上皮细胞的影响,本试验利用小分子干扰(siRNA)技术及Nrf2的激动剂叔丁基对苯二酚(tBHQ),分别从Nrf2基因的下调和上调表达来研究Nrf2对牛子宫内膜上皮细胞中血红素加氧酶-1(HO-1)和Homebox A10(HOXA10)基因表达的影响。结果显示,经实时荧光定量PCR方法检测,在设计的2条siRNA序列(siRNA-1209和siRNA-1672)中,siRNA-1672在终浓度为75 nmol/L、作用时间24 h时抑制效果较好,抑制效率在80%以上;经Western blotting方法检测,Nrf2蛋白表达水平在转染后96 h极显著下降(P0.01),而HO-1和HOXA10的mRNA表达量分别下降了60%和70%(P0.01),蛋白表达量在96 h后极显著或显著下降(P0.01;P0.05)。此外,经CCK8方法检测,Nrf2基因表达沉默后,牛子宫内膜上皮细胞增殖能力减弱。而在tBHQ激活Nrf2试验中,经Western blotting方法检测,tBHQ终浓度为30μmol/L时Nrf2蛋白表达量最高,极显著高于对照组(P0.01),且HO-1和HOXA10的蛋白表达量与对照组相比也明显上升。结果表明,本试验设计的siRNA-1672能特异性地抑制牛子宫内膜上皮细胞Nrf2的表达,而抑制Nrf2的表达会导致牛子宫内膜上皮细胞增殖能力下降,且Nrf2对牛子宫内膜上皮细胞HO-1和HOXA10基因表达存在调控作用。     

微生态制剂在畜禽生产中的应用研究进展

综述了微生态制剂的概念、主要生理功能及其在提高畜禽生产性能、改善产品品质、防治疾病、增强免疫机能、改善繁殖机能、缓解应激反应、净化养殖环境方面的应用效果，并分析了存在的主要问题与今后的发展方向。