体细胞核移植技术生产猪植酸酶转基因胚胎的研究

为获得具有植酸酶腮腺特异性表达的猪转基因克隆胚胎,本研究使用植酸酶腮腺特异性表达的DNA质粒(包含腮腺分泌蛋白(parotid secretary protein,PSP)启动子与终止子序列、Neo筛选基因、绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因和高比活的植酸酶appA基因),采用脂质体转染和基因素418(G418)药物抗性筛选的方法获取稳转细胞系,并利用体细胞核移植技术获得植酸酶转基因胚胎。结果表明,本研究构建的DNA质粒可用于细胞筛选,且质粒越小,细胞的转染效率越高,14.89 kb的YM6552仅获得了7.1%的转染率,EGFP质粒则获得了43.4%的转染效率。在单克隆形成上,较小的pYN3600也获得了更高的单克隆形成数(25个),其中表达EGFP的单克隆有14个,植酸酶PCR阳性集落有11个,高于YM6552的单克隆数(19、8和6)。转基因细胞构建重构胚胎后,所有的胚胎均能表达绿色荧光蛋白,虽其体外发育能力有所下降,但差异不显著(P>0.05)。综上所述,本研究所采用的植酸酶质粒、细胞筛选方法和核移植技术可生产植酸酶重构胚。     

H19和IGF2R基因在体细胞克隆猪各组织中的甲基化状态

为了探求新生克隆猪可能的死亡原因以及是否存在不完全的DNA甲基化重编程,本试验运用亚硫酸氢盐测序法分别检测了H19基因和IGF2R基因差异甲基化区（DMR）在新生死亡克隆猪和同期正常猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中的甲基化状态。结果发现,H19基因DMR在克隆猪肺脏中表现为超甲基化,极显著高于正常猪（95．20％VS46．80％P〈0．01）,且10个测序克隆中存在2处连续的全甲基化CpG位点（4-9位、12-S17位）,而在其他组织中甲基化差异不显著（P〉0．05）;IGF2R基因DMR在肝脏中处于超甲基化状态,显著高于正常猪（80．00％V839．41％P〈0．05）,而在肺脏中为去甲基化状态,板显著低于正常猪（14．71％VS66．47％P〈0．01）,在其他组织差异不显著（P〉0．05）。结果说明,在死亡克隆猪中,H19基因DMR在肺脏和IGF2R基因在肝脏与肺脏中存在不完全的DNA甲基化重编程,这可能是导致克隆动物死亡的因素之一。     

体细胞克隆小型猪主要性能指标的测定

通过与普通巴马小型猪的生长发育规律、繁殖性能、生理生化指标和屠宰肉质性能等的比较,了解小型克隆猪的主要性能指标,以期为克隆猪安全性评估及其产业化健康发展提供借鉴.结果表明,体细胞克隆巴马小型猪与普通猪的各项性能指标差异不显著.这种相似性在一定程度上说明了体细胞克隆猪的产业健康性和安全性.     

克隆家畜安全性评估及其产业化研究进展

综述了克隆牛、猪和羊的研究现状、克隆动物的生长与繁殖等生物学特性以及克隆动物的再克隆等最新研究进展,为克隆家畜的产业化发展和安全性评估提供参考。     

纳米化红景天多糖对猪精液冷冻效果的影响

在冷冻稀释液中分别添加分数为1％、5％、10％、15％、20％的纳米化红景天多糖（Nonomaterialsrhodiolasa—chalinensispolysaccaride,NRSP）溶液,以添加6mg／L红景天多糖（Rhodiolasachalinensispolysaccaride,RSP）为对照组,不添加RSP为空白组,检测其对猪冷冻精子活力、顶体完整率、质膜完整率等生理结构指标,以及精子抗氧化能力的影响。结果表明,添加体积分数为15％NRSP组的精子活力（0．69）、顶体完整率（51．42％）、质膜完整率（25．95％）均高于其他组,并显著高于空白组（P〈0．05）。此外添加15％NRSP组的解冻后直线运动精子百分比（46．33％）要显著高于其他各组（P〈0．05）;添加6mg／LRSP组丙二醛（MDA）浓度最低（10．83±0．39）／2mol／L,并且显著低于空白组（31．85土1．36）μmol／L,（P〈0．05）,但与15％的NRSP组（11．60±0．42）μmol／L无显著差异（P〉0．05）。添加20％的RNSP组超氧化物歧化酶（SOD）活力最高（343．05-＋-19．64）μ／mgprot,显著高于其他添加组（P〈0．05）。精子活力、顶体完整率、质膜完整率之间存在显著的正相关关系（P〈0．05）,而精子活力和顶体完整性与MDA浓度呈显著负相关（P〈0．05）,与SOD活力呈显著正相关（P〈0．05）,质膜完整率与两者含量相关性不显著（P〉0．05）。     

转基因猪在养猪业循环经济发展中的应用

伴随规模化养猪的发展,养猪生产给环境带来的污染问题也日益严重。从循环经济的原理出发．阐述了转基因猪在养猪业循环经济中的应用。随着转基因技术的发展成熟,将生产转基因猪技术与传统的养猪业循环经济模式相结合,将成为当前和将来养猪业污染综合治理的崭新方法。     

RG108对猪胎儿成纤维细胞甲基化水平及克隆胚胎发育的影响

本研究使用RG108处理猪胎儿成纤维细胞(Porcine fetal fibroblast,PFF),研究其对细胞甲基化水平和核移植效率的影响。使用0.05、0.5、5和50μmol·L-1RG108分别处理细胞24、48和72 h后,用高效液相色谱和亚硫酸氢盐测序(Bisulfite sequencing PCR,BSP)法分析细胞整体甲基化水平和印迹基因H19和IGF2R的DMR区甲基化率,并检测RG108处理对细胞生长、凋亡、染色体变化及随后的核移植效率的影响。整体甲基化水平结果通过两因素方差分析,发现RG108处理浓度与处理时间无交互作用,处理浓度间细胞甲基化水平差异不显著,但处理时间却能显著的影响甲基化水平,且50μmol·L-1RG108处理细胞72 h后整体甲基化水平显著低于对照组。BSP分析结果表明,5和50μmol·L-1处理PFF 72 h后H19的DMR区域甲基化率显著降低。RG108对细胞生长有一定的抑制作用,且0.5、5和50μmol·L-1组经处理72 h后凋亡比例显著提高,但对细胞的染色体数目没有显著影响。PFF经5和50μmol·L-1RG108处理72 h后能显著提高卵裂率和囊胚细胞数,且5μmol·L-1组囊胚率也显著提高。结果表明,RG108降低细胞整体甲基化水平呈时间依赖性,且同时降低H19的DMR区域甲基化率。PFF经5μmol·L-1浓度处理72 h组能显著提高核移植胚胎效率。     

猪转基因克隆技术的研究与应用

综述了国内外利用转基因克隆技术生产转基因猪的技术途径、研究状况以及发展趋势.     

植物甾醇对克氏原螯虾生长消化、肠肝形态及抗氧化和免疫水平的影响

本研究旨在探究饲料中添加植物甾醇对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)生长、消化、抗氧化、免疫及肠肝形态的影响。制备 5 组等氮等脂饲料, 分别为在基础饲料中添加 0% (CON)、0.10% (P1)、0.19% (P2)、0.38% (P3) 和 0.76% (P4)的植物甾醇, 对体均重为(9.37±0.02) g 的克氏原螯虾进行 6 周的养殖实验。结果显示, P1 和 P2 组的增重率、特定生长率显著高于 CON 组(P＜0.05), 且 P2 组实验虾的生长性能最佳。P3 组实验虾肠道蛋白酶活性显著高于 CON 组, 脂肪酶活性显著低于 CON 组(P＜0.05)。P1 组肝胰腺中酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性最高, P2 组血淋巴中酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性最高, 但与 CON 差异均不显著(P＞0.05)。随着植物甾醇添加水平提高, 肝胰腺和血淋巴总超氧化物歧化酶活性与过氧化氢酶活性呈上升趋势, 丙二醛含量呈下降趋势。相较 CON 组, P1 组肠道结构更加健康完整, 植物甾醇水平达到 0.19%及以上时, 克氏原螯虾的肝胰腺与肠道组织形态出现受损状态。 随着植物甾醇水平提高, 肝胰腺的 NF-κB 相对表达水平升高。P1 组 Hsp70 相对表达水平显著高于其他组(P＜0.05)。 研究表明, 本实验条件下添加 0.10%~0.19%植物甾醇可以促进克氏原螯虾的生长消化, 改善肠肝组织形态, 提高克氏原螯虾抗氧化和免疫能力。