猪YTHDF2蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

YTH家族蛋白2(YTH domain-containing family protein,YTHDF2)作为一种m~6A修饰的结合蛋白,可对底物mRNA的剪接,翻译,降解等过程进行调控。本研究通过RT-PCR首次获得了猪YTHDF2编码基因序列,全长1 743 bp,编码580个氨基酸,基因进化树分析显示该基因在各物种间保守性较高。将猪YTHDF2编码基因克隆至原核表达载体pET-28a (+)中,重组质粒pET-28a (+)-YTHDF2在大肠杆菌BL-21菌株中进行原核表达,成功获得了大量带His标签的猪YTHDH2重组蛋白,大小约70 kD。以纯化的重组蛋白为抗原免疫新西兰大白兔制备猪YTHDF2多抗血清,ELISA结果表明制备的兔抗猪YTHDF2多抗血清效价为1:204 800,间接免疫荧光(IFA)和Western blot试验均表明该多克隆抗体具有良好的反应性和特异性。猪YTHDF2基因序列的获得及多克隆抗体的制备为进一步研究YTHDF2在猪mRNA m~6A甲基化过程中的生物学功能奠定了基础。     

规模猪场4大疫病的血清学检测及免疫抑制病因分析

选取杭州、绍兴、嘉兴和湖州4个地区的规模猪场为试验猪场,用正向间接血凝试验(IHA)检测猪瘟病毒(CSFV)和口蹄疫病毒(FMDV)抗体合格率;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)抗体阳性率,分析免疫抑制状况。同时,采取临床可疑病料,用RT-PCR技术检测PRRSV、PCV2、CSFV和伪狂犬病毒(PRV)的感染率。结果显示:不同年龄猪群中,PCV2抗体阳性率都在96.0%以上,而CSFV、FMDV抗体合格率及PRRSV抗体阳性率呈现一致的变化趋势,即母猪最高,哺乳仔猪其次,培育猪和肥育猪最低;在病原检测中,PRRSV和PCV2检出率最高,分别为44.3%和60.7%。另外,双重感染和多重感染明显,特别是PRRSV+PCV2+CSFV三重感染,阳性率达7.6%。本试验结果为制定有效的免疫程序等防治措施提供科学依据。     

同源性分析引发的启示——对鼠兔H9N2亚型禽流感毒株分离、基因序列分析及致病性研究的思考

本研究从青海省14个不同的地区捕捉到的138只鼠兔的817份组织样品中分离到一株H9N2亚型流感病毒。通过ＲT—PcR技术扩增H9N2流感病毒基因组的8个基因片段，并将进行序列分析，绘制系统进化树。结果显示，从鼠兔分离的H9N2亚型禽流感病毒属于美洲谱系，与A／Turkev／Wiscnflsill／1／1966（H9N2）进化距离最近。鸡静脉指数（IVPI）及氨基酸序列分析显示病毒具有弱毒株的特征。     

抗重组鸡IL-2单克隆抗体的制备与鉴定

以纯化的重组鸡IL-2蛋白(rchIL-2)为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,对杂交瘤细胞进行筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆,最终获得4株持续且稳定分泌抗鸡IL-2单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为:1A12、4A3、3E7和4E1.4株MAb的抗体类型均为IgG1,轻链为κ;MAb的ELISA效价分别为5.12×105、1.02×106、2.56×105和4.09×106.Western-blot分析表明,所获得的1A12、4A3、3E7和4E1 4株单克隆抗体与rchIL-2均有反应.MAb的制备成功为进一步开展chIL-2的功能研究奠定了基础.     

水稻抗倒性研究进展

综述了近年来国内外关于水稻倒伏的类型、水稻倒伏构成因素以及提高水稻抗倒伏能力的各种措施,展望了水稻抗倒性研究的方向.     

鸭的类似鸡白细胞介素2基因的克隆及遗传进化分析

通过RT—PCR和DNA测序技术，克隆和测定了绍兴麻鸭的一种类似鸡白细胞介素2(IL-2)基因的核苷酸序列，并构建了该基因编码蛋白的三维结构分子模型。结果显示，绍兴麻鸭的类似于鸡IL-2基因的核苷酸长度由748个碱基组成，编码产物为由140个氨基酸残基组成的多肽，编码产物中含有21个氨基酸残基组成的信号肽。绍兴麻鸭的类似于鸡IL-2基因的核苷酸及编码产物，与鸡和火鸡IL-2的一致性分别为71.4％～72．1％和55．0％～57．9％，与哺乳类等动物IL-2的一致性分别为22．1％～28．8％和14．3％～17．1％。对绍兴麻鸭的类似于鸡IL-2基因蛋白编码产物的系统进化树分析表明，其编码产物与鸡和火鸡IL-2具有较远的亲缘关系。绍兴麻鸭的类似于鸡IL-2基因编码产物的三维结构，预测由4个α-螺旋结构和2个β折叠组成。这些研究结果预示。鸭的类似于鸡IL-2基因编码产物，在生物学功能上与哺乳动物和其他禽类具有很大的差异。     

鸡白细胞介素-2研究进展

白细胞介素－2（interleukin-2,IL-2)主要是由激活的T淋巴细胞产生的一类重要的细胞因子，具有激活淋巴因子活化的杀伤细胞（LAK）和自然杀伤细胞，刺激T辅助细胞和自然杀伤细胞产生细胞因子和促进细胞因子的繁殖以及刺激γδT细胞在体外生长等功能，因此它是免疫学研究的热点。近年来鸡IL－2基因克隆成功，使鸡IL－2的研究及应用得到一定的发展，同时也使鸡IL－2作为免疫佐剂和构建新型的基因工程疫苗呈现出一定的应用前景，本文主要对鸡IL－2研究取得的进展作一综述。     

传染性法氏囊病免疫程序研究

本试验选用１日龄ＩＢＤ母源抗体参差不齐的伊莎褐壳蛋雏鸡和ＩＢＤ母源抗体水平基本一致的迪卡蛋雏鸡，用ＩＢＤＶ标准Ｉ型弱毒疫苗Ｄ－７８和油乳剂灭活苗进行免疫程序筛选试验。结果表明：１．雏鸡母源抗体参差不齐情况下，３日龄用ＩＢＤ弱毒苗首免，１７日龄用油乳剂灭活苗二免为优良免疫程序。２．雏鸡母源抗体水平基本一致情况下，１４日龄用ＩＢＤ弱毒首免，２４日龄用油乳剂苗二免为优良免疫程序。     

鸡传染性法氏囊病油乳剂灭活苗研究——Ⅱ.雏鸡接种油乳剂灭活苗后抗体消长规律及免疫细胞形态学

非免来航雏鸡接种IBD油乳剂灭活苗后15天,可达到具有保护力的沉淀抗体效价(GMT6.8～8),抗体高峰持续期为60天,疫苗免疫保护期为180天;免疫细胞的变化规律与抗体变化规律相似,但免疫细胞的变化早于抗体的变化,说明该疫苗具有良好的免疫原性。