猪干扰素-γ哺乳动物细胞重组表达质粒作为疫苗佐剂在小鼠体内的组织分布及环境安全性研究

重组表达质粒作为免疫佐剂从实验室走向临床必须解决其对机体和生物环境释放的安全性问题。本研究以pcDNA3．1／IFN-γ重组表达质粒作为免疫佐剂进行试验,探讨了其在小鼠体内组织的分布和生物安全性。将pcDNA3．1／IFN-γ重组表达质粒经肌肉途径免疫小鼠,免疫后不同时间迫杀,并取各种组织抽提基因组DNA：一是利用PCR技术检测其在组织内的分布及与细胞基因组发生整合的可能性;二是以PCR技术检测免疫动物现场环境样品,监测pcDNA3．1／IFN-γ重组表达质粒中的猪IFN-γ基因、CMV启动子基因和抗性基因是否转移和扩散到环境细菌中。结果表明,免疫24h后在小鼠的各组织中仅注射部位肌肉存在重组表达质粒,免疫5d后仅有1只小鼠注射部位肌肉和血液中存在重组表达质粒,免疫15d后所有动物的各组织中无重组表达质粒存在;同时未发现pcDNA3．1／IFN-γ重组表达质粒整合到宿主细胞基因组和转化到环境其他细菌中。因此,认为pcDNA3．1／IFN-γ重组表达质粒对动物和环境是安全的。     

猪TOLL样受体2基因在CHO-K1细胞中的表达

将含猪TLR2(猪Toll样受体2,pTLR2)基因的真核表达载体PcDNA3.1/CT-GFP-pTLR2,采用脂质体法转染到CHO-K1细胞,用G418持续筛选获得了阳性细胞克隆.阳性细胞克隆系经PCR和RT-PCR检测表明:pTLR2基因得到稳定整合并能成功地转录.荧光显微镜观察,转染细胞可见绿色荧光,表明获得了表达pTLR2的克隆细胞系.     

牦牛IFN-β基因在毕赤酵母中的分泌表达

用真核表达引物从pGEM-yakIFN-β重组质粒中扩增出牦牛IFN-β基因,将目的基因和真核表达载体pPIC9K连接转入E.coli的JM109中,得到pPIC9K-yakIFN-β重组表达质粒.通过电击法将经SalⅠ线性化的pPIC9K-yakIFN-β质粒转化到巴斯德毕赤酵母GS115感受态细胞中,采用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,利用甲醇诱导表达,分泌表达产物用MTT法检测其生物学活性.经SDS-PAGE电泳分析表明:表达出约22ku大小分泌于胞外的牦牛IFN-β蛋白分子量,比理论值稍大;MTT结果表明:纯化的重组yak-IFN-β蛋白具有促进淋巴细胞增殖的活性.     

烟草DNA的提取与SRAP反应体系优化

以8个烤烟栽培品种为试验材料,对烟草基因组DNA的提取方法进行比较,并对建立烟草SRAP-PCR 反应体系的影响因子设置梯度试验.结果显示:改进的CTAB法能较好地满足烟草基因组DNA的提取,在20 μL SRAP-PCR的反应体系中,DNA模板40 ng、Mg2+1.5 mmol/L、dNTP 0.25 mmol/L、引物0.2 μmol/L、Taq聚合酶1.5 U,8个烤烟品种的扩增多态性高,带型清晰,差异明显.     

基追肥比例对烤烟生长及产质量影响的研究

在控制总施氮量及N,P,K比例的前提下,研究不同追肥量及追肥次数对稻田烤烟干物质积累及烟叶品质的影响.结果表明:处理间干物质积累量差异主要出现于烤烟生长的中后期.移栽后45～60 d为全株干物质积累高峰,此期根和叶干物质积累速度都随追肥比例升高而升高.移栽后60～75 d茎的干物质积累速度快于根和叶,各处理茎干物质积累速度在不同生育期内均表现出高追肥比例处理高于低追肥比例处理.各处理烤后烟叶烟碱、总糖含量有随追肥比例上升而增加的趋势.评吸结果以C处理最好,随着追肥比例增加烟叶的香气量、劲头、刺激性都有所增加.C处理生物学性状和经济性状都优于其它处理,且化学成分协调.故在该年度气候条件下,C处理是最适宜大理稻田烤烟生产的施肥方式.     

应变式压力传感器的设计及其在农机测试中与微机处理技术的结合

本文重点介绍了经省计量部门检定核准的YMYI—16型应变式压力传感器的结构与原理,设计与计算,装配与标定,及其在农机(深松机、软管纹盘式喷灌机、三角铧子)零部件测试中与微机处理技术结合、应用情况。     

猪CD8β基因的克隆、表达及其结构与功能分析

本研究应用RT-PCR技术,从猪胸腺细胞总RNA中扩增、克隆了猪CD8β基因,序列分析表明CD8β含621 bp的开放阅读框,编码207个氨基酸,与NCBI/GeneBank已发表的参考基因的核苷酸及推导氨基酸序列的同源性分别为97.8%和96.8%,与人、小鼠和鸡CD8B蛋白的氨基酸同源性分别为75.7%、67.9%和33.3%.根据大肠杆菌密码子偏嗜性改造目的基因,构建了pET28a/PCD8 β原核表达系统,并经诱导获得高效表达的分子量为24 ku的重组蛋白(rPCD8 β),表达量占菌体蛋白总量的30%.利用生物信息学和分子生物学软件对猪CD8 β基因编码的蛋白进行结构预测,表明猪CD8 β成熟蛋白为跨膜蛋白,其中172aa在胞外区,22aa在跨膜区,10aa在胞内区;蛋白骨架内含有较多的柔性区域,而且分布不均匀.能形成结构松散的球状蛋白;猪CD8 β分子V区三维结构与鼠的具有非常相似的空间结构,与人的差别较大,这为猪CD8B蛋白结构与功能的进一步研究奠定了基础.     

不同育苗方式对烤烟生长发育及产质量的影响

研究4种不同育苗方式对烤烟生长发育及产质量的影响,结果表明:不同育苗方式对烟苗素质的影响较大,而对移栽后烟株叶片生长速率及大田主要农艺性状的影响较小。先漂浮后湿润育苗(剪叶)处理烟苗素质较高;一段式漂浮育苗处理可以显著提高上等烟比例,从而提高烟叶的产值和均价。     

云南单料烤烟主流烟气成分因子分析

 对云南单料烤烟主流烟气成分进行了因子分析。结果表明：总粒相物（TPM）,烟气烟碱、焦油和CO平均值分别为19.63,169,15.69,13.82mg/g。TPM与烟气烟碱、焦油、CO,焦油与CO呈极显著正相关（P<0.01）。③单料烤烟主流烟气成分指标可概括为2个公因子。因子1由TPM、焦油和CO构成;因子2由烟气烟碱构成。依据因子得分,单料烤烟主流烟气成分烟区之间差异达极显著水平（P<0.01）,单料烟主流烟气危害性大小按生态区依次为昆明市、曲靖市、玉溪市、红河州和大理州。     

施氮量对烟株接种黑胫病前、后体内生理物质及黑胫病发生的影响

以红花大金元烤烟品种为材料,采用盆栽接种法研究了供氮水平（分别为N 71、142、213和284 mg /kg）对烟株感染黑胫病前、后体内多酚氧化酶(PPO)、过氧化氢酶(CAT)活性和总酚、类黄酮、可溶性糖、游离氨基酸、总氮等生理物质含量及黑胫病发病情况的影响。结果表明: 1）烟株接种后5和15d时体内多酚氧化酶(PPO)和过氧化氢酶(CAT)的活性以及总酚、类黄酮、可溶性糖、游离氨基酸、总氮等生理物质含量均有高于同期未接种烟株的趋势,且不同供氮水平下趋势一致。2）接种当天及接种后5、15d,接种和未接种烟株体内总氮和游离氨基酸的含量均以高氮处理大于低氮处理,而CAT活性和总酚、类黄酮、可溶性糖含量则相反;高氮和低氮处理间差异显著;而PPO活性则以施N 142和213 mg/kg 处理显著高于施N 71和284 mg/kg处理。3）高施氮量下,烟株接种黑胫病后的发病率和病情指数呈现出较高的现象。上述表明,氮营养不仅影响着烟株初期（即接种病原前）的抗性,而且影响着诱发抗性（即接种病原后诱发的抗性）的强弱;这在一定程度上导致了不同施氮量烟株黑胫病病害发生的差异。说明调控施氮量可以有助于增强烟株抗性,减少黑胫病的发生。