有机磷农药三唑磷人工抗原合成及鉴定

[目的]合成并鉴定有机磷农药三唑磷人工抗原。[方法]采用活泼酯法将三唑磷半抗原（TZPM-Hap）与牛血清蛋白（BSA）和卵血清蛋白（OVA）偶联,制备出免疫抗原（TZPM-A-BSA）和包被抗原（TZPM-A-OVA）,并通过紫外扫描和动物免疫试验对其进行了鉴定。[结果]紫外扫描和动物免疫试验结果表明人工抗原合成成功。[结论]为制备单抗及开发快速、简便的三唑磷ELISA试剂盒奠定了基础。     

植物乳杆菌发酵培养基的优化

[目的]在成功筛选出1株有强产酸能力的植物乳杆菌的基础上,优化其发酵培养基,以提高其生物量。[方法]使用单因素试验和正交试验法对培养基的成分进行优化。[结果]优化后的发酵培养基为:蔗糖30.00 g/L,酵母浸膏50.00 g/L,无水乙酸钠5.00 g/L,磷酸氢二钾2.00 g/L,柠檬酸氢二铵2.00 g/L,硫酸镁0.58 g/L,硫酸锰0.25 g/L,吐温-80 1 m L/L,碳酸钙2.00 g/L。经优化后植物乳杆菌发酵液的OD值从5.701增长到15.021,活菌数达7.1×109cfu/m L。[结论]优化后的植物乳杆菌发酵培养基降低了生产成本,为后续工业化生产的研究提供了参考。     

产抗菌肽芽孢杆菌的制剂制备及其对仔猪生产性能的影响

本试验以产抗菌肽的枯草芽孢杆菌GL08为出发菌株,通过单因素和正交试验确定最佳的喷雾干燥工艺参数。并将制备的抗菌肽制剂作为饲料添加剂,验证其对仔猪生产性能的影响。优化后的喷雾干燥工艺为出风温度75℃,进风温度135℃,保护剂辅美粉浓度20%。在此工艺条件下,抗菌肽得率为91.6%,含水量为3.94%,符合抗菌肽制剂质量要求。此工艺生产成本低,效率高,适合工业大规模生产。制得的抗菌肽制剂作为饲料添加剂使仔猪的料肉比提高25%,残次率降低63%,成活率提高8.3%,无腹泻发生,提高了仔猪的生产性能和健康水平。     

猪去乙酰化酶SIRT3的克隆及表达

本试验旨在原核表达猪去乙酰化酶SIRT3,并初步鉴定重组蛋白的抗原性和特异性。采用RT-PCR扩增包含SIRT3的完整编码序列;通过Ω-PCR,将SIRT3完整编码序列克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,转入大肠杆菌Rosetta（DE3）中进行诱导表达和亲和层析纯化;经免疫印迹分析初步评价SIRT3的抗原性和特异性。重组原核表达质粒pET28a-SIRT3经双酶切及测序鉴定证明构建正确,表达的重组蛋白相对分子质量约39 ku,能被相关抗体识别。结果表明,本试验成功在大肠杆菌中表达猪去乙酰化酶SIRT3,为对其进行进一步研究奠定了基础。     

微囊化蜡样芽孢杆菌的喷雾干燥工艺优化

[目的]提高蜡样芽孢杆菌在压力喷雾干燥过程中的存活率,优化喷雾干燥工艺。[方法]以微囊化的蜡样芽孢杆菌为材料,考察进风温度、进料流量、料液比、喷枪孔径等对喷雾细胞存活数的影响。[结果]当进风温度为140℃,进料流量为1.5 t/h,料液比为1∶5,喷枪孔径为2.5 mm时,蜡样芽孢杆菌的存活率最高,达81%。[结论]该研究确定了蜡样芽孢杆菌的最佳喷雾干燥工艺条件。     

植物乳杆菌LPL10的体外益生特性研究

[目的]在筛选到一株食品源植物乳杆菌LPL10的基础上,通过对其耐酸性、耐胆盐、抑菌能力和产酸能力进行研究,确定其益生特性。[方法]采用平板活菌计数法测定LPL10的耐酸、耐胆盐性能,通过抑菌圈法评价菌株的抑菌能力,高效液相色谱法测定LPL10发酵产有机酸能力。[结果]植物乳杆菌LPL10具有良好的低酸耐受能力,在pH 3.5条件下培养24 h活菌数为1.2×108 cfu/mL,存活率为148%;LPL10受0.1%胆盐抑制影响较小,培养24 h后活菌数为3.60×108 cfu/mL,存活率为356%;植物乳杆菌LPL10对指示菌金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌和绿脓杆菌均有良好的抑制作用;LPL10发酵上清液中产的主要有机酸为乳酸和乙酸,相对含量分别为20.33、25.26 mg/L。[结论]体外益生特性研究表明,植物乳杆菌LPL10可以作为潜在的益生性菌株。     

乳酸乳球工程菌表达L-苯丙氨酸解氨酶的工艺优化

[目的]提高乳酸乳球工程菌表达L-苯丙氨酸解氨酶的水平.[方法]对培养基种类、接种量、培养温度、诱导剂浓度、磷酸甘油二钠浓度等因素进行了优化.[结果]使用DifcoTM M17 Broth培养基培养乳酸乳球菌时,L-苯丙氨酸解氨酶表达活性最高;磷酸甘油二钠对L-苯丙氨酸解氨酶表达活性有较大影响,可提高活性93.8％.通过正交试验,得到PAL最佳表达条件为接种量2.0％,培养温度30℃,磷酸甘油二钠浓度2.0％,诱导剂浓度10.0 μg/L. PAL表达酶活可达3.05 IU/ml.[结论]在发酵扩大培养中优化了L-苯丙氨酸解氨酶在乳酸乳球菌中的表达条件,为今后生产及应用提供参考.     

产抗菌肽芽孢杆菌的发酵工艺研究

[目的]通过对产抗菌肽芽孢杆菌GL08的发酵培养基进行优化,以提高抗菌肽的产量.[方法]以GL08为出发菌株,在初始发酵培养基的基础上,首先用单因子试验确定最适合的碳氮源,进而通过正交试验确定最优的碳氮源配比.最后在500 L中试水平上对优化后的培养基进行了验证和生长特性研究.[结果]优化后的发酵培养基为葡萄糖30 g/L,蔗糖20 g/L,国产酵母膏30 g/L,黄豆饼粉10g/L.在此培养基中,500 L中试水平杀菌效价为15 311 IU/ml,提高约90％,同时又降低了生产成本,提高了抗菌肽的稳定性.[结论]优化后的发酵工艺为抗菌肽工业化生产提供了行之有效的解决方案.