堆形艾美耳球虫早熟株选育及相关生物学特性研究

为了选育堆形艾美耳球虫（Eimeria acervulina）早熟株及观测其生物学特性,运用Jeffers创立的艾美耳属球虫早熟株选育方法,对实验室保存的堆形艾美耳球虫进行连续传代早熟选育,并对获得的早熟株与母株孢子化卵囊大小、繁殖能力、致病性以及免疫保护力等指标进行了测定,比较堆形艾美耳球虫早熟株与母株之间的基本生物学特性差异。经过18代早熟选育后,堆形艾美耳球虫的潜在期由母株的99h缩短至84h。与母株相比,早熟株的孢子化卵囊大小明显减小（P〈0．05）,卵囊繁殖能力降低了17％～42%。致病性试验中,早熟株感染组的平均增重均高于母株,而病变记分相当。免疫保护试验中,早熟株与母株的免疫保护力相当,其卵囊抑制率略低于母株,差异不明显（P〉0．05）。结果表明,本研究成功选育出堆形艾关耳球虫早熟株,对母株攻击具有保护力,为鸡球虫疫苗的研制奠定了基础。     

柔嫩艾美耳球虫含HD结构域蛋白特性和功能初步研究

鸡球虫病是由艾美耳球虫引起的一种危害严重的肠道寄生虫病,每年都会给世界各地的养禽业带来巨大的经济损失。目前,该病主要依靠抗球虫药物进行防治,但由于药物的长期及不合理使用导致鸡球虫几乎对所有使用过的抗球虫药均产生耐药性。为研究球虫耐药性产生的分子机制,本实验室前期对柔嫩艾美耳球虫地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株以及敏感株进行了转录组测序并获得了敏感株与耐药株的差异表达基因,发现柔嫩艾美耳球虫含HD域蛋白（EtHDCP）在耐药株中上调表达。本研究以柔嫩艾美耳球虫敏感株孢子化卵囊cDNA第一链为模板,成功克隆出EtHDCP基因,构建了原核表达重组质粒pGEX-4T-EtHDCP,并成功诱导表达了重组蛋白rEtHDCP。利用qRT-PCR和Western blot对柔嫩艾美耳球虫敏感株不同发育阶段的转录和翻译水平进行分析,结果显示,EtHDCP在第二代裂殖子的转录和翻译水平高于其他三个阶段（未孢子化卵囊、孢子化卵囊和子孢子）。同时利用Western blot分析了EtHDCP在柔嫩艾美耳球虫敏感株、地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株中的翻译水平,结果显示,EtHDCP在耐药株中的蛋白翻译水平显著高于敏感株。间接免疫荧光定位结果显示,该蛋白主要定位在子孢子和裂殖子的表面以及裂殖子的胞质内。入侵抑制试验表明,抗rEtHDCP多克隆抗体可有效抑制子孢子对宿主细胞的入侵。这些结果说明该蛋白可能参与了虫体在宿主细胞内的生长发育、耐药性的产生以及子孢子入侵宿主细胞的过程。     

巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫早熟株对8种抗球虫药的敏感试验

为检测巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫早熟株对常用抗球虫药的敏感性,选用地克珠利、氯苯胍、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星、盐霉素和拉沙洛西等8种抗球虫药进行鸡体试验,通过抗球虫活性百分比（percent of optimum anticoccidial aetivity,POAA）、病变记分减少率（reduction of lesion scores,RLS）、相对卵囊产量（relative oocyst production,ROP）和抗球虫指数（anticoccidial index,ACI）4项指标进行综合评价。结果表明,巨型艾美耳球虫早熟株对8种药物敏感;柔嫩艾美耳球虫早熟株对盐霉素轻度敏感,对地克珠利、氯苯胍、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星和拉沙洛西敏感。本研究结果可为对球虫早熟株疫苗的开发与应用提供实验依据。     

异体皮肤移植法测定鸡细胞免疫

为了研究隐孢子虫感染对鸡细胞免疫功能的影响，设计了鸡异体皮肤移植试验。受试鸡为ＳＰＦ鸡，饲养于隔离器内。感染组１～３日龄感梁隐抱于虫，并于感染后４ｄ粪便检查隐孢子虫卵囊，证明感染成功。２０日龄时进行皮肤移植试验。手术切口在鸡腿内侧，盼关节下方。移植皮片不缝合，采用创可贴包扎固定。同体移植皮片９６％（２５／２６）被接受，异体移植皮片，对照组１００％（１３／１３）被排斥，而感染组５８．３％（７／１２）被排斥，从而建立了异体皮肤移植测定鸡细胞免疫的方法。     

柔嫩艾美耳球虫泛素蛋白功能初步研究

泛素是真核生物中普遍存在的一种小分子蛋白,广泛参与细胞内蛋白质的平衡代谢过程,对维持细胞内环境的稳态具有重要作用.为研究泛素在柔嫩艾美耳球虫中的功能,本研究利用PCR方法克隆了柔嫩艾美耳球虫泛素(EtUb)基因,将其亚克隆至原核表达载体pET28a(+),转入大肠杆菌BL21,诱导表达制备rEtUb蛋白,用纯化的重组蛋...     

抗球佳、克球灵防治鸡柔嫩艾美耳球虫笼饲试验

鸡球虫病是一种对养禽业危害极为严重的全球性寄生虫病,每年都给养禽业造成巨大的经济损失.为了防治此病,广大科研工作者在过去的几十年间做了大量的研究工作,取得了巨大的成绩.目前球虫病主要依靠药物预防和免疫预防,在免疫预防还未能取得突破性效果的今天,药物仍是防治鸡球虫病的可靠方法.然而,由于药物产生耐药性或其他原因造成药物低效,至今球虫病仍然经常发生.在研制新药远远跟不上实际需要的情况下,如何合理使用现有抗球虫药,延长药物使用周期,是目前需要探索的问题,通过两种或两种以上药物联合使用仍是目前值得探索的一个方法.基于上述目的,我们进行了本次试验.     

柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)马杜拉霉素抗药株和敏感株孢子化卵囊的蛋白质差异分析

利用双向电泳技术,对本实验室诱导保存的柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素抗药株与敏感株的蛋白质表达图谱进行差异比较和分析,发现两者之间差异有4个蛋白质斑点,利用MALDI-TOF-TOF质谱技术对3个差异明显的蛋白质斑点进行分析鉴定,获得3个明确的肽质量指纹图谱,通过在NCBInr数据库中检索分析,确定了其中1种蛋白质为球虫子孢子表面抗原TA4.另外2种蛋白质与疟原虫的Pfj1和线粒体转运蛋白受体Tom40具有很高的同源性,上述蛋白的鉴定将对球虫的抗药性产生机理和柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素抗药株的分之标志物提供了研究方向.     

球虫抗药性检测方法评述

抗药性是药物预防鸡球虫病的主要障碍,鸡球虫抗药性的检测方法主要包括笼饲试验法(鸡体测定法)、鸡胚试验法、细胞培养法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法、同工酶测定法、PCR测定法等,本文对上述各种检测方法及其判定标准进行了综述.     

几种溶液对球虫卵囊漂浮效果的比较

在球虫实验室工作中,球虫卵囊的纯化是一项基础性工作,就会影响卵囊计数的准确性,从而影响各种人工感染试验结果的可靠性和科学性.而在实际工作中,饱和食盐水、砂糖溶液和硫酸铬是常见的卵囊收集纯化漂浮液,但我们在工作中发现这三种溶液漂浮效果不很理想,为了寻找更好的漂浮液并以三种常用漂浮液作比较,进行了本项测定.