巨型艾美耳球虫早熟株选育及其相关生物学特性研究

为了选育巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)早熟株并观测其生物学特性,运用Jeffers创立的球虫早熟株选育方法,对实验室保存的E.maxima进行了早熟株选育,并比较了所获得的早熟株与母株在卵囊大小、繁殖能力、致病性、免疫保护力等生物学特性上的差异。经过17代早熟株选育,E.maxima的潜在期由母株的142 h缩短至107 h,缩短了35 h。早熟株卵囊的长、宽及大小均比母株小,且差异显著(P0.05);卵囊形状指数比母株的稍大,但差异不显著(P0.05)。早熟株的卵囊繁殖能力较母株的低,排卵囊高峰出现在接种后d6,较母株提前1 d。在同等剂量之下,早熟株的致病性低于母株,但免疫保护力和免疫原性与母株相当。早熟株的选育成功,为球虫早熟株弱毒疫苗的研制以及早熟株相关基因的筛选提供了重要材料。     

陕西省杨凌区柔嫩艾美耳球虫早熟株选育及致病性研究

采用球虫早熟系虫株选育的方法,反复收集感染后最先排出的卵囊,选育出杨凌地区鸡柔嫩艾美耳球虫早熟株并对早熟株的潜伏期、致病性及繁殖能力进行了研究。结果表明,经18代选育的鸡柔嫩艾美耳球虫杨凌早熟株的潜伏期比母株缩短了24h;早熟株卵囊的形态与母株相似,但没有母株卵囊的大;早熟株的繁殖能力低于母株,每羽鸡所排卵囊总量与剂量呈正相关,而每个卵囊的繁殖能力与剂量呈负相关;早熟株的致病性低于母株。     

陕西省杨凌区柔嫩艾美耳球虫早熟株选育及致病性研究

采用球虫早熟系虫株选育的方法,反复收集感染后最先排出的卵囊,选育出杨凌地区鸡柔嫩艾美耳球虫早熟株并对早熟株的潜伏期、致病性及繁殖能力进行了研究。结果表明,经18代选育的鸡柔嫩艾美耳球虫杨凌早熟株的潜伏期比母株缩短了24h;早熟株卵囊的形态与母株相似,但没有母株卵囊的大;早熟株的繁殖能力低于母株,每羽鸡所排卵囊总量与剂量呈正相关,而每个卵囊的繁殖能力与剂量呈负相关;早熟株的致病性低于母株。     

紫外线诱导巨型艾美耳球虫的早熟株选育

本试验分离获得了1株巨型艾美耳球虫，通过紫外线诱导和非紫外线诱导两种方法对该虫株进行早熟选育，获得了2个巨型艾美耳球虫早熟减毒株。通过对2个早熟株的潜隐期、繁殖力、致病力以及免疫原性进行对比研究，证明紫外线诱导下的早熟选育可明显缩短选育所需代数，且与传统方法选育的早熟株在繁殖力、免疫原性与免疫保护力等方面基本相同。紫外线诱导下，经7代早熟选育，潜隐期由母株的142h缩短到116h，而非紫外线诱导的选育需要20代才能达到同样的选育结果。两早熟株卵囊的繁殖能力与母株相比有所下降，但仍保留了母株原有的免疫原性。     

和缓艾美耳球虫早熟系选育及其生物学特性研究

按照Jeffers建立的艾美耳属球虫早熟系选育方法，对和缓艾美耳球虫涿州株(Eimeria mitis Zhuozhou strain，EmiZ)进行了早熟选育。经石歧杂肉仔鸡15次传代之后，EmiZ潜在期由96h缩短至77h，缩短了19h。选育出的和缓艾美耳球虫涿州株早熟系(Eimeria mitis Zhuozhou strain precocious line，EmiZP)在致病性与繁殖力上均较母株弱，但保留了母株的免疫原性。经EmiZP免疫的石歧杂肉仔鸡，可抵抗母株EmiZ的攻虫。对选育的早熟系EmiZP进行放松选择传代10代，其潜在期、排卵囊高峰、卵囊产量和致病性均保持了早熟系的特征，说明所选育的EmiZP已在遗传上保持了稳定。     

大型艾美耳球虫生物学特性研究

为了掌握大型艾美耳球虫原始株的生物学特性,通过对大型艾美耳球虫原始株的潜隐期、致病性、免疫原性及药敏特性等方面进行研究。结果表明,大型艾美耳球虫原始株的潜隐期为168h,孢子化所需时间为37h~42h;在致病性试验中,不同接种剂量的显露期和排卵高峰一致,但卵囊产量不同,其中接种剂量为5×10~3个卵囊组的产卵囊量最多,与对照组相比,各感染组均出现不同程度的临床症状和病理变化。在免疫原性试验中,低剂量免疫(100个卵囊)可以对30 000个卵囊的攻虫量产生完全的保护力。在药敏试验中,根据临床表现、卵囊排出量、饲料转化率判断,大型艾美耳球虫对3种抗球虫药的药效最好是莫能菌素,药效最低的是氯苯胍。大型艾美耳球虫原始株致病性较强,免疫原性良好,对莫能菌素敏感,即莫能菌素对其有良好的防治效果,可作为防治家兔感染大型艾美耳球虫的首选药之一。     

鸡艾美耳球虫18SrDNA序列与系统进化分析

为了确定鸡艾美耳球虫（Eimeria）不同种以及来自不同地区同种不同株之间的亲缘关系,研究其分类地位,对实验室保藏的柔嫩艾美耳球虫（Etenella）、毒害艾美耳球虫（Eneeatrix）、巨型艾美耳球虫（Emaxima）、堆形艾美耳球虫（Eaaervulina）等4种15株鸡球虫孢子化卵囊的18SrDNA基因进行克隆、测序,并与从GenBank下载的鸡球虫18SrDNA序列一起,使用软件DNAstar 5．0 MegAlign进行系统发育分析。结果显示,4种艾美耳球虫种间同源性在94．6％～99．4％之间,7株柔嫩艾美耳球虫的株间同源性在99．0％-99．9％之间,5株巨型艾美耳球虫的株间同源性在96．9％～99．8％之间。用该4种鸡球虫的18SrDNA序列与GenBank下载的另外4种鸡球虫18SrDNA序列构建系统发育树,显示这8种鸡艾美耳球虫形成2个分支,即堆形艾美耳球虫（EASH）、巨型艾美耳球虫（EMSH）、变位艾美耳球虫（Emivati）、和缓艾美耳球虫（Emitis）、布氏艾美耳球虫（Ebrunetti）、早熟艾美耳球虫（Epraecox）构成1个分支,柔嫩艾美耳球虫（ENSH）、毒害艾美耳球虫（ETAS）构成另1分支。巨型艾美耳球虫、柔嫩艾美耳球虫各株的系统发育树均根据地域关系产生2个分支。柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫的亲缘关系较近,不同地理区域的同种不同株的亲缘关系相对较远,种间和种内的鉴定结果与普通生物学结果一致。本研究提示18SrDNA基因可用于鸡球虫不同种／株的分类鉴定,为艾美耳球虫分子遗传学鉴定提供了理论基础。     

表达M2e-EYFP融合蛋白的转基因柔嫩艾美耳球虫生物学特性分析

本文从卵囊形态大小、潜在期、最短孢子化时间、致病性与免疫原性等生物学特性方面对表达M2e-EYFP融合蛋白的转基因柔嫩艾美耳球虫及其受体野生型柔嫩艾美耳球虫进行了比较分析.结果显示,转基因球虫的上述生物学特性与柔嫩艾美耳球虫种相符,且与其受体野生型球虫具有较高相似性,但也存在部分差异,主要表现在卵囊大小、最小潜在期、繁殖力、致死率和免疫后抑制卵囊产量上.分析原因,作者认为是单孢子囊筛选所致.     

鸡柔嫩艾美球虫DNA疫苗pcDNA4．0（C）-pEtK2-IL-2对其他球虫的交叉保护力

将柔嫩艾美球虫DNA疫苗pcDNA4．0（c）-pEtK2-IL-2以50μg分别对14日龄和21日龄雏鸡进行胸部肌肉注射免疫，28日龄对各未免疫组与免疫组鸡分别口服接种柔嫩艾美球虫、巨型艾美球虫、堆形艾美球虫和毒害艾美球虫孢子化卵囊，36日龄剖杀，分析比较免疫保护效果。结果显示，柔嫩艾美球虫攻毒免疫试验组与柔嫩艾美球虫攻毒未免疫对照组比较，增重、盲肠病变记分、OPG值差异显著（P〈0．05），免疫保护效果明显，抗球虫指数（ACI）达186．50；而巨型艾美球虫、堆形艾美球虫和毒害艾关球虫攻毒免疫试验组的ACI分别为147．85、142．71和153．82，增重、盲肠病变记分、OPG值和ACI与相应的攻毒未免疫对照组比较，均有不同程度改善，免疫保护效果不明显。表明，该DNA疫苗对柔嫩艾美球虫的攻击具有完全免疫保护作用，而对巨型艾美球虫、堆形艾关球虫、毒害艾美球虫的攻击具有部分交叉保护力。     

布氏艾美耳球虫保定株早熟系的免疫原性研究

经过20代的选育，选育出了布氏艾美耳球虫保定株早熟系虫株，该早熟系虫株与亲本株均对常见的抗球虫药物-克球素、地克珠利、磺胺喹噁啉和尼卡巴嗪高度敏感，敏感性与保定亲本株一致；分别接种200个该早熟系虫株和亲本株孢子化卵囊，21d 后鸡群均能抵抗1.0×10^5个布氏艾美耳球虫强毒株孢子化卵囊的攻击，说明早熟株仍然保持良好的免疫原性。     

Characterisation and histopathological observations of a selected Brazilian precocious line of Eimeria acervulina

Precocious lines of Eimeria acervulina "Cu" and "I" strains were obtained after 25 passages of oocysts in chickens that showed a shortening of the prepatent period for first oocyst output from 96 h to 81 and 82 h, respectively. Both precocious lines were evaluated for pathogenicity using as criteria weight gain, lesion score and total oocyst production. Infection of the "Cu" precocious line in chickens showed a high weight gain, low lesion score and low oocyst production, when compared to parent strain infected chickens. However, the results did not show a significant difference in relation to the criteria used above for the E. acervulina "I" precocious line when compared to its parent strain. This suggests a low degree of attenuation for the "I" strain but good attenuation for the precocious "Cu" line. The histopathological observations of chickens infected with the E. acervulina "Cu" parent strain and precocious line, comparing life cycle and intestinal lesions, showed: (1) parasite stages only in the border cells of infected chicken intestinal villi, for the precocious line; (2) parasite stages in the border cells of the intestinal villi and submucosa cells near the Lieberkühn glands of the intestine; and (3) high degree of inflammatory cells around the parasites in chickens infected with the parent strain. The "Cu" strain was also characterized for sensitivity against eight anticoccidial drugs. Sensitivity was observed for four anticoccidial drugs and partial resistance for four other drugs, although the strain had never had previous contact with anticoccidial drugs, suggesting the presence of a natural resistance factor. This Brazilian E. acervulina "Cu" precocious line showed attenuation for pathogenicity in chickens, suggesting that it could be a suitable strain for use as a live vaccine in Brazil.     

柔嫩艾美耳球虫早熟株免疫剂量研究

为了确定柔嫩艾美耳球虫（Eimenatenella）早熟株合适的免疫剂量,本文设立7个早熟株免疫攻虫组、1个不免疫攻虫组和1个不免疫不攻虫组,免疫组的免疫剂量为孢子化卵囊100、200、400、600、800、1000和2000个／羽,经嗉囊感染,7日龄首次免疫,14日龄以同等剂量进行第二次免疫,21日龄以8×10^4个／羽的同源母株进行攻虫,28日龄结束试验,以存活率、增重、肠道病变记分、血便数量、卵囊减少率为观测指标。对免疫保护效果较好的3个免疫剂量进行重复试验,同时设置商品化球虫疫苗对照组,免疫方法、试验周期、试验指标同第一批试验。结果显示：攻虫后,不免疫攻虫组出现5％死亡,而各免疫组来出现死亡;各免疫组卵囊减少率在61．57％～69．52％;200～2000免疫组的增重与不免疫不攻虫组差异不具备显著统计学意义（P〉0．05）;600～2000免疫组的肠道病变记分和血便数量均明显少于不免疫攻虫组（P〈0．05）。用600、800和1000进行重复试验,三个免疫组攻虫期间均来出现死亡,而不免疫组和疫苗对照组均出现5％死亡;三个免疫组的增重均明显高于不免疫攻虫组和疫苗对照组（P〈0．05）;早熟株免疫组的肠道病变记分和血便数量明显低于不免疫攻虫组（P〈0．05）,而疫苗对照组与不免疫攻虫组的相当（P〉0．05）;卵囊减少率在66.30％-78．75％,高于疫苗对照组的51．82％。结果表明,该柔嫩艾美耳球虫早熟株保持了良好的免疫原性,不同免疫剂量均能诱发鸡产生免疫保护力,其中600、800和1000个／羽的免疫效果均优于疫苗对照组,可考虑以600个／羽作为该早熟株在疫苗制备中的推荐免疫剂量。     

Isolation and selection of ionophore-tolerant Eimeria precocious lines: E. tenella, E. maxima and E. acervulina

Eimeria parasites were isolated from Nanhai Guangdong province (southern China) and studied in chickens in wire cages to evaluate their drug resistance against commonly used ionophores: monensin (100 mg/kg of feed), lasolacid (90 mg/kg), salinomycin (60 mg/kg), maduramicin (5 mg/kg) and semduramicin (25 mg/kg). Chinese Yellow Broiler Chickens were infected with 40,000 crude sporulated Eimeria oocysts at 15 days of age and prophylactic medication commenced a day prior to infection. Drug resistance was assessed for each ionophore drug by calculating the anticoccidial index (ACI) and percentage optimum anticoccidial activity (POAA) based on relative weight gain, rate of oocyst production and lesion values. Results revealed that Nanhai Eimeria oocysts comprising of E. tenella, E. maxima and E. acervulina, were resistant to monensin, sensitive to both salinomycin and lasolacid and partially sensitive to maduramicin and semduramicin. By selection for early development of oocysts during passage through chickens, the prepatent time of E. tenella, E. maxima and E. acervulina were reduced by 49, 36 and 22 h, respectively. The precocious lines are less pathogenic than the parent strains from which they were selected and conferred a satisfactory protection for chickens against coccidiosis. These ionophore-tolerant precocious lines could have wider applications in the development of anticoccidial vaccines for sustainable control of coccidiosis.     

鸡球虫早熟株的生物学特性及其在疫苗中的应用

按照Jeffers建立的艾美耳球虫早熟株选育方法选育出的球虫早熟株，其潜在期明显缩短，繁殖力和致病性显著降低，但保持良好的免疫原性.并且，早熟株的弱毒性和早熟性具有遗传稳定性，通过放松选择压力反复传代后无恢复现象。国内外学者根据早熟株的这些生物学特性，并在深入了解鸡球虫病的保护性免疫机制的基础之上研制了抗鸡球虫病的早熟株弱毒活苗。本文综述了球虫早熟株的生物学特性，并介绍了目前国内外研制出的球虫早熟苗在鸡球虫病防治方面的应用。     

Selection for early (precocious) development of Eimeria meleagridis in the turkey

A precocious line of Eimeria meleagridis was developed by repeated propagation of the parasite in young turkeys and collection of the very first oocysts produced following infection. After 20 generations of selection, the prepatent period was reduced by 4-8 hr. Weight gain of poults given this line, from days 0-3 after infection, was significantly greater than that of poults given the parental strain, indicating that selection resulted in a loss of pathogenicity. Poults immunized with the precocious line produced no oocysts following challenge with the parental strain, indicating that immunogenicity was retained following selection. This is the first published report of the selection of a precocious line of Eimeria in the turkey.     

柔嫩艾美耳球虫耐药株与鸡3种球虫的同工酶的研究

对不同离子载体抗生素具有抗药性的柔嫩艾美耳球虫和药物敏感的柔嫩区美耳球虫、布氏匀美耳球虫和堆型艾耳球虫的孢子化卵囊,采用聚安凝胶垂直板电泳,进行了乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、葡萄糖磷酸异构酶（ＧＰＩ）和葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）等同工酶华不同离子载体抗生素具有抗药性的柔嫩艾美耳球虫和药物同工酶酶谱可以反应出球虫种间差异;而柔嫩艾耳球虫抗性虫株的ＬＤＨ酶谱是２条带,敏感虫株是３条带,抗性株比敏感株     

布氏艾美耳球虫生物学特性的研究

对来自我国河南省汤阴县的布氏艾美耳球虫的生物学特性进行了较为详细的研究,包括卵囊大小、最短孢子化时间、最小潜在期、致病性、免疫原性以及内生性生活史,建立了一个完整的实验室虫株。布氏艾美耳球虫汤阴株平均大小为29．2μm×22．5μm,最小潜在期为119h,最短孢子化时间为21h,具有很强的致病性和免疫原性。组织学研究显示,这个种至少有3代裂殖生殖。     

鸡和缓艾美耳球虫早熟虫株选育及其生物学特性研究

按照Jeffers1975年建立的艾美耳属球虫早熟虫株选育方法,对鸡和缓艾美耳球虫巴彦淖尔株（SY-MB株）进行了单卵囊分离、扩增和早熟虫株的选育。经SPF鸡15代传代之后,分离株的潜隐期由96 h缩短至77 h,缩短了19 h。按索勋等1998年建立的方法对选育出的和缓艾美耳球虫巴彦淖尔早熟株（SY-mb77株）进行10代非选择性传代,证明该早熟虫株的潜隐期、卵囊产量、免疫原性和致病性均具备早熟虫株特性,并能有效抵抗强毒虫株的攻击。     

堆型艾美耳球虫生物学特性研究进展

鸡球虫病是一种严重危害养禽业的寄生虫病,其中堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)对鸡致病力较强,在各地养鸡场流行率较高,严重感染时可引起死亡,对鸡的生长发育和饲料转化率有较明显的影响。本文对E.acervulina的流行状况、形态特征、致病性、免疫原性等相关研究进行了综述,为兽医临床有效防治E.acervulina提供理论依据。