广西猪细胞巨化病毒感染的初步调查

猪细胞巨化病毒病又称猪包涵体鼻炎,是由猪细胞巨化病毒（PCMV）引起的仔猪的一种常见传染病。在易感猪群中可引起胚胎和仔猪死亡,表现生长发育不良、仔猪鼻炎、肺炎及增重差等临床症状。PCMV主要是一种“机会性感染”病毒,多呈隐性感染,潜伏感染状态的猪在长途运输、寒冷、分娩等应激因素作用下,病毒可被激活并重新排毒。常规条件下饲养的大多数猪群均存在PCMV感染,PCMV抗体阳性率较高,但大多数为亚临床型,临床发病则很少见。     

广西部分地区猪群PEDV N基因克隆及序列分析

【目的】了解广西区猪流行性腹泻病毒(PEDV)的感染及病毒的遗传变异特点,为更好防控猪流行性腹泻提供科学依据。【方法】应用RT-PCR方法从2012-2016年广西地区25个猪场收集的PEDV病料中扩增出86株PEDV的N基因,并进行序列比对及遗传进化分析。【结果】86株PEDV的N基因核苷酸同源性为94.2%~100.0%,与参考毒株核苷酸同源性为94.1%~100.0%。N基因遗传进化分析显示广西的PEDV可分为2个群,Cluster2由韩国株DR13、日本株83P-5、中国株CH/S以及本研究的GP35-8、LC37-22、LC107-5、LC107-19和LC107-16毒株组成,其他81株毒株属于Cluster 3,包括中国株DX、LJB-03、Hu N、JS-2004-2;Cluster 1和Cluster 4则由其它参考毒株组成。【结论】PEDV是引起广西规模化猪场新生仔猪腹泻的主要病原,广西地区的PEDV流行毒株可分为2个群且其N基因仍然保守。     

A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的原核表达、纯化及鉴定

[目的]通过原核表达及纯化获得A型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1,为建立A型FMDV的ELISA诊断方法及开发安全、高效、广谱的新型基因工程疫苗提供技术支持.[方法]以含A型FMDV VP1基因的重组质粒pMD18-T-A-VP1为模板,通过特异性引物扩增A型FMDV的VP1基因,构建表达质粒pET-32a-VP1和pGEX-6p-1-VP1,然后转入感受态细胞E.coli BL21 (DE3)中诱导表达融合蛋白.[结果]诱导表达获得的VP1融合蛋白主要以包涵体形式存在,分别经His· Bind和GST· Bind柱层析纯化,SDS-PAGE分析结果表明融合蛋白纯度较高;Western blotting检测分析发现,VP1融合蛋白能与豚鼠抗A型FMDV阳性血清发生特异性结合,但不与豚鼠抗O型和Asia1型FMDV阳性血清反应.[结论]经原核表达及纯化获得的A型FMDV VP1融合蛋白具有良好的特异性和抗原性,可用于易感动物的免疫及血清抗体筛查.     

O型口蹄疫病毒VP1基因及其多表位基因的原核表达与纯化鉴定

[目的]通过原核表达并纯化获得O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因及其多表位基因的重组蛋白,为建立O型FMDV抗体ELISA检测试剂盒及制备动物高免血清提供技术支持.[方法]以O型FMDV VP1全基因重组质粒pMD18-T-T-VP1及串联的ⅥP1多表位基因重组质粒pMD 18-T-O-VP1为模板,通过特异性引物扩增并回收目的基因,构建重组质粒pET-32a-VP1和pGEX-6p-1-VP1,然后转入大肠杆菌BL211 (DE3)中诱导表达,并以SDS-PAGE和Western blotting对融合蛋白进行分析鉴定.[结果]O型FMDV的VP1基因及其多表位基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到正确表达,表达的两种融合蛋白主要以包涵体形式存在,纯度较高,且均能与猪抗O型FMDV阳性血清发生特异性结合,具有良好的反应原性.[结论]表达获得的融合蛋白具有良好的反应原性,可作为包被抗原应用于O型FMDV抗体检测试剂盒研发.     

猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR诊断方法的建立与应用

为建立一种快速简便的检测猪传染性胃肠炎的RT-PCR方法,根据GenBank中已发表的猪传染性胃肠炎病毒N蛋白基因的核苷酸序列设计1对引物,并以合成的cDNA为模板,初步建立了猪传染性胃肠炎病毒的RT-PCR检测方法,进而对对照病毒及采集的病料组织进行了敏感性、特异性和重复性检测。结果表明,该研究建立的RT-PCR方法敏感性高,最低核酸检测值为0.5ng/μL,扩增产物特异性好,重复性稳定,可应用于猪传染性胃肠炎病毒的实验室诊断和流行病学调查。     

广西畜禽屠宰管理现状与策略

为了解广西地区畜禽屠宰行业发展现状,继而为出台相关管理条例提供信息支持,专题组深入南宁、柳州、北海等主要市、县(市、区),开展《广西壮族自治区畜禽屠宰管理条例》前期立法专题调研。通过调研发现,畜禽屠宰监管工作缺乏相应的法规支撑,牛羊规模养殖专业化程度相对较低,畜禽屠宰制度不健全,基层监管力量薄弱及屠宰管理权责不明等问题。这提示应积极出台地方性配套法规,建立规模化养殖和健全畜禽屠宰制度,明确屠宰管理工作职责,提高基层监管效能等,切实规范行业生产秩序,进一步推动广西屠宰行业健康有序发展。     

猪流行性腹泻病毒一步法RT-PCR检测方法的建立与初步应用

为建立一种快速检测猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)病原的方法,根据GenBenk上的猪流行性腹泻病毒N基因序列,设计合成一对引物,建立了检测PEDV的一步法RT-PCR方法,并对其特异性、灵敏性及重复性进行了研究。结果表明:建立的一步法RT-PCR方法具有较好的特异性、灵敏性及重复性,最低可检测出约1pg PEDV的RNA。该方法为PEDV的病原检测及其分子流行病学调查提供了有效的诊断方法,可用于猪流行性腹泻的早期确诊和病毒鉴定。     

彭泽县湖西乡1991年棉花大面积高产丰收的技术经验

江西省彭泽县湖西乡是个老棉区,也是一个典型的丘陵棉区。棉地土层浅薄,水肥条件较差,全乡507 ha棉花,历年皮棉单产多在1000 kg/ha左右徘徊。近数年来,我们根据丘陵棉地的生态特点推广了棉花争早防衰模式栽培技术。1991年,皮棉单产达1524 kg/ha,较80年代翻了一番,比大丰收的1987年增长     

O型口蹄疫病毒VP1蛋白竞争ELISA诊断方法的初步建立

利用表达的重组融合蛋白pGEX-6P-1-VP1作为抗原,用PET-32a-VP1蛋白免疫家兔获得的阳性血清作为FMDV阳性血清的竞争抗体,建立了检测FMDV抗体的竞争ELISA,并进行了条件优化,利用统计学方法计算竞争ELISA的阳性临界值。结果显示,重组蛋白抗原的最适包被质量浓度为1μg·mL~(-1),待检血清、酶标抗体和高免血清的最佳稀释度分别为1∶40、1∶2000和1∶500;与液相阻断ELISA试剂盒相比较,该方法的敏感性为91.3%,特异性为95.1%,符合率为96.7%。结果表明,该方法敏感性好、特异性强、重复性好,可用于O型FMDV血清抗体水平的检测。     

猪IL-2、IL-12p40和IFN-γ SYBR Green I real-time PCR检测方法的建立

针对猪Th1型细胞因子IL-2、IL-12p40、IFN-γ以及管家基因β-actin的基因序列分别设计一对特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测IL-2、IL-12p40、IFN-γ及β-actin的SYBR Green I real-time PCR方法。该方法线性关系好,标准曲线的相关系数均达到0.997以上;敏感性高,初始模板的检出下限均达到100拷贝/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性好,组内与组间的变异系数均小于3.5%。应用所建立的方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染仔猪外周血单个核细胞中IL-2、IL-12p40和IFN-γ mRNA的表达水平进行了检测。结果表明,所建立的real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好。