银杏GbERF1转录因子基因的克隆及亚细胞定位分析

ERF是植物中一类重要的转录因子,广泛参与植物对生物和非生物胁迫的响应。以3年生银杏苗为试材,采用RT-PCR与RACE-PCR方法,研究了银杏ERF基因序列,以期深入了解银杏药用成分合成代谢的分子机理。结果表明:GbERF1含有长度为1 314bp的完整开放阅读框,编码437个氨基酸。蛋白序列分析显示,GbERF1蛋白含有2段ERF家族的特殊位点。GbERF1蛋白序列与北美云杉(ADE75663.1)序列的相似性为97%。系统进化树分析,GbERF1与北美云杉、狭叶羽扇豆的序列可划归为同一分支。实时荧光定量PCR结果显示,GbERF1主要在银杏根和叶中表达,逆境胁迫处理后显示,该基因在乙烯、紫外诱导处理下,表达量大幅度提升,随后下降,但仍高于对照组,干旱诱导处理下表达量先升高后降低,矮壮素(CCC)诱导下表达量变化不太明显。烟草叶片下表皮细胞亚细胞定位结果表明GbERF1定位于细胞核。     

板栗IFRs启动子分离及表达载体构建

以湖北省罗田板栗品种乌壳栗为试材,采用染色体步移的方法获得了板栗IFR启动子序列,研究了板栗黄酮代谢途径中关键基因IFR的启动子顺式作用原件及可能对雄花黄酮类物质合成的影响,并构建pCAMBIA1304融合载体。以期揭示板栗雄花黄酮代谢合成途径,IFRs启动子上游所包含的顺式元件对环境和栽培措施的响应及对板栗雄花发育的影响。结果表明:长度为1 688bp的板栗IFRs启动子序列包含多种类型的顺式作用元件,包括光响应元件GT-1motif、ASF-1motif等;与赤霉素,脱落酸、乙烯等相关的激素响应元件,如WRKY motif(赤霉素信号途径转录因子)、GCC-box(乙烯应答元件)以及Dc3(脱落酸响应元件)等;逆境胁迫相关的功能元件,如与抗损伤相关的ERF3、抗病相关的TGTCA-box等。以此推测,CmIFR基因的表达可能会受到以上光、激素、各种生物或者非生物胁迫等因素的影响。为了后期进一步研究启动子的功能,按照启动子功能区域,设计了CmIFR启动子不同长度的6个功能片段,并将这些片段替换pCAMBIA1304中的35S启动子,成功构建了由CmIFRPs启动子不同区域驱动的gus基因的植物表达载体pCAMBIA1304+CmIFRPs。     

银杏锰型超氧化物歧化酶GbMnSOD基因的克隆与表达

利用RACE技术首次从银杏中克隆到锰型超氧化物歧化酶基因(GbMnSOD ) 的cDNA全长。GbMnSOD的cDNA全长965 bp (GenBank accession number: EF633506) 。生物信息学分析GbMnSOD cDNA序列含有一个681 bp最大读码框, 编码一个226氨基酸多肽链, 通过软件预测分子量为2515 kD, 等电点为8197。三维结构预测结果显示, GbMnSOD 含有12个α螺旋和3 个β折叠构成一个篮子状的活性中心。GbMnSOD氨基酸序列与其它植物MnSOD具有很高的相似性。进化树分析结果表明GbMnSOD和其他物种的MnSOD源自于相同的祖先。Southern杂交显示, GbMnSOD属于一个小的多基因家族。Northern 杂交表明GbMnSOD在银杏的根、茎、叶和果中都有表达, 在叶中的表达量最高, GbMnSOD 的转录受到ABA、IAA、蔗糖、甘露醇、NaCl 和低温的诱导。     

外源 ALA 对 NaCl 胁迫下小白菜植株生长与光合效应的影响

为小白菜抗逆栽培提供参考,采用盆栽试验比较了上海青小白菜在 NaCl 胁迫下喷施外源ALA 对其植株生长及光合效应的影响。结果表明：在100 mmol/L NaCl 胁迫下,喷施100 mg/L 外源 ALA的小白菜地上部和地下部干重分别比 NaCl 胁迫处理高4．00％和15．9％,初始荧光值下降11．5％,最大光化学效率、叶片潜在活性、光合速率、蒸腾速率、气孔导度和叶绿素（a＋ b）含量分别高6．6％、36．3％、21．7％、15．0％、19．3％和14．4％。外源 ALA 可缓解 NaCl 胁迫对小白菜光合效率的影响。     

红花石蒜的组织培养

选用双鳞片法切割红花石蒜鳞茎为外植体,采用MS基本培养基,以两种植物生长调节剂NAA和6-BA不同浓度配伍,研究了不同消毒时间和不同激素浓度对小植株诱导和不定芽诱导的影响。结果表明:利用0.1%升汞溶液浸泡石蒜鳞茎10~15min消毒效果最好;MS+2mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA是小植株诱导的最佳培养基;MS+NAA 2mg/L+6-BA2mg/L是不定芽诱导的最佳培养基;MS+2mg/L NAA对于小鳞茎的生根效果最好。     

罗田甜柿种质资源ISSR分子标记初步鉴定

分别采集湖北省罗田县、麻城市自然分布的28、8株罗田甜柿(Diospyros kaki Thunb cv.Oriental persimmon)古树优系及小涩柿、无核、宝盖、秋焰甜柿优系为研究材料,利用简单重复序列间扩增分子标记(Inter simple sequence repeat,ISSR)技术对40个甜柿优系进行初步认证及亲缘关系分析。结果表明:1从21条ISSR引物中筛选出了9条能够扩增出清晰、稳定条带的引物,9条引物共扩增出185条谱带,其中多态性条带有185条,多态性条带比率为100%;2应用NTSYS2.10e软件对扩增结果进行非加权组平均法(Unweighted pair-group method with arithmetic means,UPGMA)聚类分析,40个甜柿优系大致被分为两大类,遗传相似系数从0.39到0.92;3罗田甜柿古树基因资源丰富,每个基因型都有其独特的指纹图谱,遗传多样性高。罗田甜柿优系间的亲缘关系与地理来源有一定的相关性,麻城市与罗田县地理位置交界区域的罗田甜柿资源相对集中在A区,其他地理位置采集优系集中在B区。分析结果可为罗田甜柿种质资源开发、基因资源保存、后期品种审定及鉴别提供理论依据。     

施肥对板栗八月红生理及营养成分的影响

设计6种不同施肥处理,探索不同处理对板栗(Castanea mollissima)结果性状、光合指标和主要营养成分的影响.结果表明,不同施肥处理对单位面积果枝数、每母枝果枝数、每果枝蓬数、单位面积蓬数和板栗叶片净光合速率无显著影响,不同施肥对结果性状和光合指标影响不显著的原因可能是萌芽期到花期,即3～5月的持续干旱,肥料未被板栗树充分吸收利用.对6种施肥处理的八月红主要营养成分的LSD检验和模糊分析表明,处理B和F有利于营养物质积累,C、D次之,A、E最差.尽管处理F施肥量比处理B多,但持续干旱少雨导致土壤肥料未被充分吸收,而叶面喷施肥料更能被叶片吸收利用,因此这两种施肥对罗田板栗的营养成分积累差异不显著.     

银杏幼胚培养的多因子正交试验研究

以MS为基本培养基,选用银杏幼胚为试验材料,采用L9(34)正交设计分析比较2,4-D(A因素)、6-BA(B因素)、酸水解酪蛋白(CH,C因素)3个因素及其组合对银杏幼胚愈伤组织诱导率、褐化率及生长量的影响。结果表明:2,4-D 1.0mg/L+6-BA 1.0mg/L+CH 500mg/L组合银杏的幼胚愈伤诱导率最高,为100%,同时该组合处理愈伤组织生长量也最大,增长倍数达8.11倍;而2,4-D 0.5mg/L+6-BA 0.5mg/L组合褐化率最高,为60.3%。经直观分析、方差分析和主因素效应的多重比较后认为,3个因素中,2,4-D对银杏幼胚愈伤诱导率及褐化率的影响最大,极差分别为74.196和63.702;CH对银杏幼胚愈伤生长量影响最大,极差为2.148。银杏愈伤组织诱导及生长的培养基最优组合为MS+2,4-D 1.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+CH 500mg/L。     

豆腐柴的人工繁育技术研究进展

豆腐柴(Premna microphylla Turcz.)是一种具有重要营养价值和药用价值的绿色野生植物,近年来逐渐引起人们的关注,但由于其人工繁殖较困难而未得到充分的开发利用。综述了豆腐柴生物学特性、人工栽培繁育方法的研究现状,并对其未来人工驯化繁殖进行了展望。