FSH对体外培养仔猪睾丸支持细胞skp2表达的影响

本研究旨在确定促卵泡素是否可通过cAMP、Ca2+内流和细胞外调节的蛋白激酶(ERK1/2)调节培养条件下未成熟仔猪睾丸支持细胞中S期激酶相关蛋白2(skp2)的表达.以培养的仔猪睾丸支持细胞为实验材料,通过添加各种信号通路的抑制剂,运用Western blot检测skp2、p27kip1蛋白的表达,运用实时荧光定量PCR检测skp2 mRNA的表达.结果发现,促卵泡素(50 ng·mL-1)以时间依赖的方式促进了skp2蛋白和mRNA的表达(P＜0.05),这一作用在30 min时达到高峰.FSH(50 ng·mL-1)和Forsko1in(10 μmol·L-1)均促进了skp2蛋白和mRNA的表达(P＜0.05),但降低了p27kip1蛋白的水平,而Rp-cAMP、Verapamil和U0126都抑制了FSH的作用,使skp2蛋白和mRNA的表达有所下降,但提高了p27kip1蛋白的表达,但3种抑制剂单独作用时对skp2蛋白、mRNA以及p27kip1蛋白的表达没有显著影响(P＞0.05).这表明FSH可能主要通过影响cAMP的产生和Ca2+内流,并激活ERK1/2通路调节skp2蛋白的表达,而skp2蛋白的水平与p27kip1蛋白成负相关.     

鹅细小病毒感染雏鹅血液的蛋白/酶活性及同工酶变异性研究

为了解鹅细小病毒(goose parvovirus,GPV)侵染的病理学致病机理,探究蛋白/酶的分子变异特征,本研究对GPV感染雏鹅血液中的蛋白质、保护酶、蛋白酶活性及其同工酶结构和功能等进行了生化—分子生物学分析.结果显示,GPV感染雏鹅的血液中(血浆和血细胞)蛋白酶活性和蛋白质含量、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)及酯酶(Est)活性分别是对照组的1.46和1.63、1.51和1.49、1.50和1.14、1.36和1.73、1.30和1.53倍.GPV感染雏鹅的血浆中,SOD同工酶增加了2条谱带(134和239);Est同工酶增加2条快区主带,减少了2条慢区谱带;酶蛋白减少1条慢区谱带(304);蛋白质新增加4条主带(131、86、43、33 ku).而血细胞新出现2条POD同工酶谱带(93和203),分别增加了1条(160)中区SOD同工酶谱带、1个快区Est同工酶谱带、2个慢区酶蛋白谱(223和330)和4个蛋白主带(144、104、58、53 ku).提示GPV感染应激与寄主基因表达的蛋白质、保护酶、蛋白酶及同工酶相互网络协作会引起酶的谱型、活性等生化特征变异,直接或间接调控代谢途径与病理生化性能,增强机体对入侵GPV的防御应激性能.因此,蛋白质、保护酶、蛋白酶及同工酶是GPV感染的应激靶标,可作为雏鹅易感GPV致病机制研究的有效标记.     

转基因植物疫苗研究进展

转基因植物疫苗作为一种口服疫苗,具有十分广阔的应用前景。本文从转基因植物疫苗的优点、转基因植物疫苗的应用前景、转基因植物疫苗的制作流程、转基因植物疫苗的作用机理、已获得的转基因植物疫苗等方面进行了论述。最后对转基因植物疫苗现存的问题进行了分析并提出了相应的解决方案,以便使转基因植物疫苗能更好的服务于畜牧生产。     

FSH和17β-雌二醇联合作用对仔猪睾丸 支持细胞Skp2表达的调节

 【目的】确定FSH和雌激素联合作用是否可通过ERK1/2级联调节培养条件下未成熟仔猪睾丸支持细胞中Skp2的表达。【方法】以培养的仔猪睾丸支持细胞为试验材料,通过添加各种信号通路的抑制剂,应用Western blotting和实时荧光定量PCR检测Skp2蛋白、mRNA的表达。【结果】FSH（50 ng·mL-1）和17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）联合作用时以时间依赖的方式促进了Skp2蛋白和mRNA的表达（P＜0.05）,这一作用在30 min时到达高峰;FSH（50 ng·mL-1）、17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）和forskolin单独作用均促进了Skp2蛋白和mRNA的表达（P＜0.05）,FSH（50 ng·mL-1）和17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）联合作用对Skp2表达的影响与FSH或17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）单独作用无显著差异（P≥0.05）,而环磷酸腺苷抑制剂（Rp-cAMP）、蛋白激酶A（PKA）抑制剂（H-89）、L-Ca2+离子通道抑制剂（verapamil）和ERK1/2抑制剂（U0126）单独作用时对Skp2蛋白和mRNA的表达与空白对照相比无显著影响（P＞0.05）,但都抑制了FSH（50 ng·mL-1）与17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）联合作用对Skp2蛋白和mRNA表达的影响（P＜0.05）。H-89、verapamil单独作用对ERK1/2（细胞外信号调节的蛋白激酶1/2）活性没有影响,但降低了FSH（50 ng·mL-1）和17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）联合作用对ERK1/2活性的影响。【结论】 FSH与17β-雌二醇联合作用激活了cAMP-PKA级联和Ca2+内流,而PKA和Ca2+内流又通过影响ERK1/2的活性进而影响Skp2的表达。     

GPV感染扰动雏鹅系统互作网络的研究

为了解GPV(Goose parvovirus)侵染的病理学致病机理,探究GPV感染扰动雏鹅动态代谢网络平衡系统,对GPV感染雏鹅血液中的蛋白质、代谢酶活性及其同工酶结构和功能等进行生化分析。结果显示,GPV感染雏鹅的血液中,蛋白酶、Est、POD、SOD、ALP、ADH、Amy、CAT、GPT、LDH活性分别提高约41%/63%,30%/53%,50%/14%,36%/73%,156%/142%,1005%/22%,36%/26%,13%/51%,60%/244%,289%/139%;Ig G、IgM含量分别降低约50%,40%;蛋白质含量增长约50%,GPV感染雏鹅的血浆Est、SOD、ADH、Amy同工酶分别新增2,2,1,3条酶谱带,Est同工酶消减2条慢区谱带;血细胞Est、POD、SOD、Amy同工酶分别新增1,2,1,2条酶谱带;血液中CAT、LDH、GPT、ALP同工酶分别出现7,1,3,3条酶带变异,血细胞CAT、ADH同工酶分别缺少快区和慢、快区酶带,ALP同工酶在血浆与血细胞方面分别缺少慢区和快区酶带。同时显示重链59 kDa蛋白带是CK组IgM/G的共同特征,感染组Ig G还缺失258,36 kDa蛋白带;血浆与血细胞分别新增加131,86,43,33 kDa和144,104,58,53 kDa蛋白。血浆消减1条慢区酶蛋白,血细胞增加2条慢区酶蛋白。提示GPV感染应激与寄主蛋白质、蛋白酶及同工酶基因表达的协同作用,通过独特的扰动宿主动态平衡代谢网络直接或间接调控细胞易感性能。     

鹅细小病毒的基因表达及致病分子机制研究进展

鹅细小病毒(GPV)的基因表达及与宿主易感基因相互作用的研究是解析GPV侵染选择特性和感染致病的分子基础,能为认识某些基因变异与疾病症候间的相互作用关系,阐明病毒基因型和宿主遗传易感性的病理学机制提供新的途径.本文探讨GPV与宿主易感基因在感染、免疫紊乱和遗传易感性方面的病因,分析易感性、易感基因的表达调控与基因多态性,提出GPV对宿主的致病性表现为GPV-宿主-环境间的相互作用,是受到易感基因表达调控及环境影响的分子网络应激特性,为进一步深入研究GPV的感染和致病机制提供参考.     

17beta-雌二醇通过beta受体和cAMP-ERK1/2级联调节仔猪睾丸支持细胞cyclinA2 mRNA的表达

 【目的】确定雌激素是否通过雌激素受体以及在cAMP-细胞外调节的蛋白激酶（ERK1/2）调节培养条件下,未成熟仔猪睾丸支持细胞中cyclinA2 mRNA的表达。【方法】以培养的仔猪睾丸支持细胞为试验材料,通过添加雌激素受体抑制剂以及各种信号通路的抑制剂,应用实时荧光定量PCR检测cyclinA2 mRNA的相对表达量。【结果】17beta-雌二醇（10-9 mol•L-1）以时间依赖的方式促进了cyclinA2 mRNA的表达（P＜0.05）,这一作用在30 min时到达到高峰。雌激素非特异性受体抑制剂ICI182780、雌激素受体beta抑制剂（ERbetaAnt）和雌激素受体alpha抑制剂（ERalphaAnt）单独作用对cyclinA2 mRNA的表达与空白对照相比没有显著影响（P＞0.05）,但ICI 182780与 ERbetaAnt,而不是ERalphaAnt抑制了17beta-雌二醇诱导的cyclinA2 mRNA的表达（P＜0.05）。17beta-雌二醇（10-9mol•L-1）和 forskolin均促进了cyclinA2 mRNA的表达（P＜0.05）,而Rp-cAMP、H-89和U0126都抑制了17beta-雌二醇（10-9mol•L-1）的活性（P＜0.05）,但3种抑制剂单独作用时对cyclinA2 mRNA的表达与空白相比没有显著影响（P＞0.05）。【结论】 17beta-雌二醇主要通过ERbeta受体、影响cAMP的产生和ERK1/2激活,进而调节cyclinA2 mRNA的表达。     

鹅细小病毒感染雏鹅的免疫球蛋白IgG/IgM变异性研究

为探究Ig G/Ig M蛋白的分子特征、理化特性及病理学相关致病机理,对鹅细小病毒感染雏鹅的免疫球蛋白Ig进行了分级分离、纯化及Ig G/Ig M蛋白质结构和功能等生化-分子生物学分析。以GPVYZ感染雏鹅,采用(NH4)2SO4分级分离鹅血清Ig,将Sephadex G-100凝胶柱在Utro-gel ACA22凝胶柱色谱工作站上串联,分步聚集纯化出鹅血清Ig M/G进行SDS-PAGE和生化分析。结果显示,初级沉淀鹅血清Ig,在非还原条件下,感染组(RD)缺失6个蛋白主带(128,114,69,59,55,48 k Da);而在还原条件下,RD组缺失7个蛋白主带(139,128,119,113,97,94,61k Da),新增加3个蛋白主带(64,65,36 k Da),RD组和对照组(CK)的Ig M和Ig G带分别增加10,7倍和1.5,2倍。表明鹅血清Ig M、Ig G单体的高度可变性造成了在形状构型上的多态性,其亚基条带的变化是机体抗病潜能的重要标志;纯化鹅血清Ig M/G,在非还原条件下,RD组的Ig G缺失150 k Da分子和重链(64 k Da),而在还原条件下,鹅血清Ig G显示重链(60~70 k Da)特征蛋白带,重链62 k Da特异蛋白带仅出现在CK组的Ig M/G中,同时RD的Ig G还缺失91 k Da分子、Ig G(ΔFc)(43 k Da)、轻链(25 k Da)蛋白带。提示GPV感染与鹅血清Ig发生相互作用,Ig G与GPV感染密切相关,62 k Da重链基因可能是GPV的易感基因。试验还表明,RD组的鹅血清Ig含量仅为CK组的37%,Ig G含量较Ig M高2.56倍,RD组Ig M、Ig G比活力显著高于CK组,提示GPV拟制鹅血清Ig M、Ig G基因的表达,促使病毒感染雏鹅。稳定性试验显示,酸碱稳定性:鹅血清Ig GIg M;热稳定性Ig MIg G,RD组的Ig M、Ig G对碱和温度较为敏感。提示随p H值、温度的不同,Ig同时发生许多反应,GPV感染增加了鹅血清Ig的碱和温度敏感性。     

FSH调节仔猪睾丸支持细胞GDNF表达的信号机制

本研究旨在阐明FSH调节睾丸支持细胞GDNF表达的信号机制.以体外培养的仔猪睾丸支持细胞为试验材料,通过加入不同信号通路因子,采用RT-PCR和Western blot等方法研究了FSH对支持细胞GDNF表达的调节.结果:(1)FSH(50 ng· mL-1)处理支持细胞,可迅速激活MEK激酶,随着FSH刺激时间的延长,ERKl/2活性逐渐升高(0～30 min)；(2)dbcAMP(100 μmol·L-1)同样能迅速激活MEK激酶,诱导GDNF蛋白、mRNA的表达；ERK1/2活性随dbcAMP刺激时间的延长逐渐升高(0～30 min)；(3)加入MEK1/2的抑制剂U0126和PKA的抑制剂H89,则显著抑制了FSH对GDNF的激活作用,GDNF蛋白、mRNA和活性明显下降；(4)加入PKA的抑制剂H89(10 μmol·L-1),则明显抑制了FSH诱导的ERK1/2磷酸化的激活作用.结果表明,FSH可通过cAMP-PKA激活ERK级联调节支持细胞GDNF的表达.     

五龙鹅豁眼性状遗传变异的RAPD分析

利用RAPD分子标记技术对五龙鹅的豁眼组和无豁眼组群体进行了种质鉴定和遗传分析,从130个10碱基随机引物中筛选出19个多态性高的引物,分别扩增出192条和168条DNA带,多态位点比率达84.90%和67.26%,平均每个引物扩增多态性带10.1条和8.8条,Shannon多样性指数为0.4610和0.3641,Nei's指数为0.3103和0.2462,豁眼组和无豁眼组群体间的平均遗传距离为0.1979和0.1603,群体内个体间的平均遗传相似度分别为0.8021和0.8397,选择引物扩增的特异性标记,可用来区分五龙鹅的豁眼组和无豁眼组群体.用SPSS软件对群体内个体间遗传相似度的方差分析结果表明,在无豁眼组群体内存在显著差异(P<0.05),而在豁眼组群体内则差异不显著,表明豁眼组的种质较纯.两组五龙鹅之间相似度为0.7901,遗传距离为0.2099,这与形态学分析的结果相一致.