FSH对体外培养仔猪睾丸支持细胞skp2表达的影响

本研究旨在确定促卵泡素是否可通过cAMP、Ca2+内流和细胞外调节的蛋白激酶(ERK1/2)调节培养条件下未成熟仔猪睾丸支持细胞中S期激酶相关蛋白2(skp2)的表达.以培养的仔猪睾丸支持细胞为实验材料,通过添加各种信号通路的抑制剂,运用Western blot检测skp2、p27kip1蛋白的表达,运用实时荧光定量PCR检测skp2 mRNA的表达.结果发现,促卵泡素(50 ng·mL-1)以时间依赖的方式促进了skp2蛋白和mRNA的表达(P＜0.05),这一作用在30 min时达到高峰.FSH(50 ng·mL-1)和Forsko1in(10 μmol·L-1)均促进了skp2蛋白和mRNA的表达(P＜0.05),但降低了p27kip1蛋白的水平,而Rp-cAMP、Verapamil和U0126都抑制了FSH的作用,使skp2蛋白和mRNA的表达有所下降,但提高了p27kip1蛋白的表达,但3种抑制剂单独作用时对skp2蛋白、mRNA以及p27kip1蛋白的表达没有显著影响(P＞0.05).这表明FSH可能主要通过影响cAMP的产生和Ca2+内流,并激活ERK1/2通路调节skp2蛋白的表达,而skp2蛋白的水平与p27kip1蛋白成负相关.     

FSH和17β-雌二醇联合作用对仔猪睾丸 支持细胞Skp2表达的调节

 【目的】确定FSH和雌激素联合作用是否可通过ERK1/2级联调节培养条件下未成熟仔猪睾丸支持细胞中Skp2的表达。【方法】以培养的仔猪睾丸支持细胞为试验材料,通过添加各种信号通路的抑制剂,应用Western blotting和实时荧光定量PCR检测Skp2蛋白、mRNA的表达。【结果】FSH（50 ng·mL-1）和17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）联合作用时以时间依赖的方式促进了Skp2蛋白和mRNA的表达（P＜0.05）,这一作用在30 min时到达高峰;FSH（50 ng·mL-1）、17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）和forskolin单独作用均促进了Skp2蛋白和mRNA的表达（P＜0.05）,FSH（50 ng·mL-1）和17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）联合作用对Skp2表达的影响与FSH或17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）单独作用无显著差异（P≥0.05）,而环磷酸腺苷抑制剂（Rp-cAMP）、蛋白激酶A（PKA）抑制剂（H-89）、L-Ca2+离子通道抑制剂（verapamil）和ERK1/2抑制剂（U0126）单独作用时对Skp2蛋白和mRNA的表达与空白对照相比无显著影响（P＞0.05）,但都抑制了FSH（50 ng·mL-1）与17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）联合作用对Skp2蛋白和mRNA表达的影响（P＜0.05）。H-89、verapamil单独作用对ERK1/2（细胞外信号调节的蛋白激酶1/2）活性没有影响,但降低了FSH（50 ng·mL-1）和17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）联合作用对ERK1/2活性的影响。【结论】 FSH与17β-雌二醇联合作用激活了cAMP-PKA级联和Ca2+内流,而PKA和Ca2+内流又通过影响ERK1/2的活性进而影响Skp2的表达。     

奶牛子宫内膜炎的防治

奶牛子宫内膜炎是由于子宫内膜的损伤或外界微生物入侵而引起的子宫内膜的炎症，是奶牛较为常见的一种多发病。本文通过对奶牛子宫内膜炎病因及临床症状的分析，提出合理治疗和预防奶牛子宫内膜炎的具体措施。     

17beta-雌二醇通过beta受体和cAMP-ERK1/2级联调节仔猪睾丸支持细胞cyclinA2 mRNA的表达

 【目的】确定雌激素是否通过雌激素受体以及在cAMP-细胞外调节的蛋白激酶（ERK1/2）调节培养条件下,未成熟仔猪睾丸支持细胞中cyclinA2 mRNA的表达。【方法】以培养的仔猪睾丸支持细胞为试验材料,通过添加雌激素受体抑制剂以及各种信号通路的抑制剂,应用实时荧光定量PCR检测cyclinA2 mRNA的相对表达量。【结果】17beta-雌二醇（10-9 mol•L-1）以时间依赖的方式促进了cyclinA2 mRNA的表达（P＜0.05）,这一作用在30 min时到达到高峰。雌激素非特异性受体抑制剂ICI182780、雌激素受体beta抑制剂（ERbetaAnt）和雌激素受体alpha抑制剂（ERalphaAnt）单独作用对cyclinA2 mRNA的表达与空白对照相比没有显著影响（P＞0.05）,但ICI 182780与 ERbetaAnt,而不是ERalphaAnt抑制了17beta-雌二醇诱导的cyclinA2 mRNA的表达（P＜0.05）。17beta-雌二醇（10-9mol•L-1）和 forskolin均促进了cyclinA2 mRNA的表达（P＜0.05）,而Rp-cAMP、H-89和U0126都抑制了17beta-雌二醇（10-9mol•L-1）的活性（P＜0.05）,但3种抑制剂单独作用时对cyclinA2 mRNA的表达与空白相比没有显著影响（P＞0.05）。【结论】 17beta-雌二醇主要通过ERbeta受体、影响cAMP的产生和ERK1/2激活,进而调节cyclinA2 mRNA的表达。