CTA1-DD蛋白在枯草芽胞杆菌中的分泌表达

有研究证实,霍乱毒素(CT)A1亚基与葡萄球菌G蛋白的D肽偶联构建的融合蛋白CTA1-DD具有良好的佐剂效果。为了获得重组CTA1-DD蛋白在枯草芽胞杆菌中的表达,将CTA1-DD基因连接到表达载体pHT43中,构建重组枯草杆菌表达载体pHT43-CTA1-DD。将重组载体转化到枯草芽胞杆菌WB600中,用IPTG诱导重组菌表达,发酵液离心后取上清液,通过SDS-PAGE和Western blot方法分析蛋白表达情况。发酵上清液经Ni-IDA琼脂糖树脂纯化,与流感病毒HA抗原混合后共同滴鼻免疫小鼠后采集小鼠血清和支气管肺泡灌洗液检测IgG和IgA的抗体水平。结果显示：重组CTA1-DD蛋白在枯草芽胞杆菌中能够分泌表达,在发酵罐中发酵36 h情况下蛋白表达量最高,目的蛋白大小在42 kDa左右,蛋白产量最高能到700μg/mL,Western blot检测目的蛋白正确表达。重组蛋白经过Ni-IDA琼脂亲和层析纯化后与HA抗原混和滴鼻免疫小鼠,ELISA结果显示CTA1-DD蛋白组针对HA抗原能够诱导更高的血清IgG和黏膜IgA抗体水平,说明枯草芽胞杆菌表达的CTA1-DD蛋白具有佐剂活性...     

青海省乌兰县牛羊棘球蚴病调查

屠宰现场采用眼观、手摸、刀切牛羊内脏的方法,共调查牛565头,感染40头,感染率为7.08%,平均感染强度1.68个;调查绵山羊768只,感染177只,感染率23.05%,平均感染强度6.38个。     

包裹有CTA1-DD蛋白的OCS-DS纳米颗粒的制备及佐剂活性

重组CTA1-DD蛋白具有与完整CT分子相当的全身性和黏膜佐剂功能,但在复杂的生理环境中易被酶或酸降解。本研究以同样具有佐剂活性的O-羧甲基壳聚糖(OCS)和硫酸葡聚糖(DS)为载体,通过离子交联形成纳米颗粒,将CTA1-DD蛋白嵌入其中,使其得到稳定保护。包裹有CTA1-DD蛋白的OCS-DS纳米颗粒的粒径为50～150 nm, Zeta电位约-50 mV,质量浓度1.0 mg/ml的CTA1-DD蛋白投入制备的包裹有CTA1-DD蛋白的OCS-DS纳米颗粒载药率25.33%,包封率86.56%。体外模拟释放试验结果显示CTA1-DD蛋白可在7 d内缓慢释放。将CTA1-DD蛋白与PRV灭活抗原混合后,接种至小鼠鼻腔,结果表明,包裹有CTA1-DD蛋白的OCS-DS纳米颗粒能够同时诱导更高的血清IgG抗体和黏膜IgA抗体表达,证明了其作为黏膜佐剂的高效性。     

山东省某地区肉鸡H9亚型禽流感与大肠杆菌混合感染的诊治

对山东某地连片家禽专业养殖户送检的病死鸡进行流行病学调查;通过实验室病理解剖、细菌分离和药敏试验、鸡胚接种、血凝价测定、特异性检测、分子生物学鉴定等诊断手段,确诊临床主要表现呼吸道症状、拉稀、减食、精神萎顿的病死鸡为H9亚型禽流感与大肠杆菌混合感染。后建议对发病养鸡场进行彻底消毒,加强饲养管理;并在以后批次的肉鸡饲养中改变免疫程序,增加7日龄鸡群新城疫、H9亚型禽流感、传染性法氏囊三联灭活疫苗免疫,饲养鸡群没有再发生禽流感与其他疾病的混合感染,取得了良好的防控效果。     

GEM技术浓缩纯化O型口蹄疫病毒灭活抗原方法的建立

[目的]验证利用革兰氏阳性增强基质颗粒(GEM)浓缩纯化口蹄疫病毒(FMDV)抗原的可行性。[方法]将含有3个自溶素基序的锚钩蛋白基因(PA)与针对O型口蹄疫病毒特异性纳米抗体基因(VHH)串联克隆入原核表达载体p ET-32a(+)中,构建原核表达载体p ET-VPA,将其转化大肠杆菌宿主菌BL21(DE3),表达获得融合重组蛋白VPA。先将GEM颗粒与重组蛋白VPA在37℃孵育30 min,离心,取沉淀用适量的FMDV抗原液重悬,再经一步低速离心,获得沉淀即为浓缩纯化的口蹄疫病毒抗原。利用SDS-PAGE、Western-blot、蛋白含量测定及146S测定等方法对浓缩纯化方法的可行性进行鉴定,并通过动物免疫试验初步验证浓缩纯化后抗原的免疫原性。[结果]VPA融合蛋白能够在大肠杆菌中部分可溶性表达。作为接头蛋白,VPA既能与GEM颗粒结合,又能与FMDV抗原结合。SDS-PAGE与Western-blot结果表明:FMDV通过GEM法得到有效纯化;146S测定结果表明FMDV的回收效率达到99%;总蛋白含量测定结果显示口蹄疫抗原杂蛋白去除率达到90%;动物免疫试验结果显示GEM技术纯化后的FMDV具有良好的免疫原性。[结论]利用GEM技术浓缩纯化口蹄疫病毒抗原是可行的。     

近年我国部分地区猪源大肠杆菌耐药性分析

随着我国畜牧业的飞速发展,畜牧业已经成为我国经济的支柱产业,其中养猪业所占比例较大,但目前猪的传染病发生的数量和频率较高,尤其是细菌性疾病对养猪业造成的危害日益明显,由于耐药菌株不断出现而导致抗生素治疗无效给养猪业带来严重的经济损失。如何防治细菌病,成为当今困扰养猪业的一大难题。其中猪大肠杆菌病就是危害养猪业的一种严重的细菌性传染病。猪大肠杆病是由致病性大肠杆病引起的一类传染性疾病的总称。     

假型病毒制备与应用进展

<正>假型病毒(Pseudotyped virus)是利用现代生物技术人工合成的一种病毒,它与真病毒相比不仅囊膜上具有其他病毒的糖蛋白,而且核酸分子上编码囊膜蛋白的基因被删除,所以这种病毒只能进行"一个细胞周期"的侵染,在慢病毒表达高度发展基础上[1],确保了假型病毒的     

猪趋化因子CXCL12及其受体CXCR4真核表达载体的构建

采用RT-PCR的方法从猪脾脏组织中扩增猪CXCL12、CXCR4基因的cDNA,对编码区核苷酸序列分析后,将扩增产物经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后再克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5HisA,构建了pcDNA3.1-CXCL12和pcDNA3.1 -CXCR4重组质粒,经酶切及测序鉴定后,进行核苷酸同源性分析.结果表明RT-PCR分别获得获得长度为386bp、1019bp的阳性产物,酶切鉴定及序列分析后,证实真核表达质粒pcDNA3.1-CXCL12和pcDNA3.1-CXCR4构建成功,为进一步研究猪CXCL12、CXCR4基因的功能奠定基础.     

青海草地生态畜牧业专业合作社建设与发展探讨

文章结合青海省草地畜牧业实际,以天峻县草地生态畜牧业专业合作社发展状况为例,对草地生态畜牧业专业合作社、专业合作社内在动力、合作社模式建设思路和对策进行了论述。     

青海省格尔木市草地生态畜牧业建设调查报告

文章结合青海省格尔木市草地畜牧业实际,以乌图美仁乡柴开牧业村生态畜牧业建设试点为例,对全市草地生态畜牧业专业合作社、合作社模式建设思路和对策进行了论述。