显微操作针的制作

显微操作技术如今已广泛应用于胚胎生物工程,如体细胞核移植、显微受精、胚胎性别鉴定和胚胎分割等。完成这些工作,首先必须有符合要求的显微操作针,由国外购买成品针用于显微操作人员培训其成本太高。本实验室主要从事牛、羊的体细胞克隆工作,所以由国外购买了拉针仪、煅针仪和磨针仪。经过一年的学习摸索,显微操作针的制作已很熟练,而国内做显微操作针的相关资料还很少,现将实验中摸索出来的一些方法和技巧总结出来与同行共享。1做针用材料实验室购买的是NIKON和LEICA公司的显微操作系统,因此使用的是与其相匹配的外径为1mm,壁厚0.1mm…     

β-环糊精胆固醇包合物对牛冷冻精子品质的影响

为了研究添加胆固醇与β-环糊精的包合物(CLC)对荷斯坦牛冷冻精子品质(AR)的影响,试验分不同剂量CLC组和对照组,分别测定牛冻精的精子活率、精子顶体反应(AR)并进行比较。结果:添加1.5 mg CLC冷冻后活率最高[(60.4±7.38)%,P<0.05];孵育时间对冷冻后精子活率影响显著(P<0.05),添加1.5 mg CLC孵育15 min精子活率显著高于对照组(P<0.05);精子在BO液孵育15,30,45和60 min的酸性磷酸酶(ACP)吸光度值,1.5 mg CLC组与对照组比较差异都极显著(P<0.01)。试验证实,CLC可提高牛冷冻精子的活率,可用于牛精子的冷冻保存。     

不同级别绵羊卵母细胞在春季体外培养条件下的成熟率比较

为了对在春季屠宰场所采绵羊卵母细胞的分布及不同分布的成熟率有明确的认识．2003年3月至4月共进行15次试验，收集卵母细胞1485枚。按卵母细胞外层所含卵丘细胞及完整程度分戍A、B、C、D、E5个级别。A级：卵丘细胞层完整且紧密，一般为4层以上；B级：卵丘细胞层完整，一般为1～3层；C级：有卵丘细胞包被，但不完全；D级：裸卵，但细胞质均匀，细胞形态完好；E级：退化裸卵，胞质不均匀，细胞形态消失。选择A，B，C，D级卵母细胞单独进行体外成熟培养，培养液为TCM-199 5％FCS 5μg/mL LH 5μg／mL FSH 1μg／mL β-estradiol 2％penstrep，培养奈件为5％CO2,38．5℃,饱和湿度。结果显示：A，B，C,D级的分布分别为19．8％、28．1％、19．6％和32．4％．成熟率分别为81．3％、65．3％、61．5％和17．0％。总体成熟率为52．1％,卵丘一卵母细胞复合体(COCs)的成熟率为68．9％。     

电融合条件对盘羊、北山羊异种核移植胚胎发育的影响

本试验通过对异种核移植后电融合的参数进行比较,发现盘羊的皮肤纤维细胞可以和绵羊的卵母细胞融合,北山羊的皮肤纤维细胞可以和山羊的卵母细胞融合;对盘羊细胞电融合强度为1.4 kV/cm、20 μs/次的融合率要较1.3 kV/cm、20μs/次高,并且降低融合后重构胚死亡率,显著提高重构胚的分裂率;对北山羊的细胞电融合强度为1.5 kV/cm、20 μs/次的融合率要较1.4 kV/cm、30 μs/次和1.6 kV/cm、20 μs/次高;融合后的重构胚胎能够正常分裂,并在子宫中着床发育.     

SX-MOFLO流式细胞仪分离牛精子的特征及生产效率分析

以X精子和Y精子的DNA含量差别为基础的流式细胞仪分离精子技术是目前最有效的哺乳动物性别控制方法之一。本文从精子分离的生产工艺和生产实践出发,阐明精子分离的一些具体特征和分离工艺的效率,进而探讨提出了该技术的应用瓶颈及发展方向。     

电融合条件对新疆盘羊(Ovis ammon)和转基因(GFP)萨能奶山羊核移植胚胎发育的影响

以新疆野生盘羊（Ovis ammon）和萨能奶山羊转基因（GFP）成纤维细胞为核供体细胞，分别以绵羊卵母细胞和普通山羊卵母细胞为受体细胞进行了核移植，对不同种类核移植重构卵进行电融合处理，发现盘羊重构卵电融合参数为1．4kV／cm、20μs／次、间隔1s时的重构卵融合率最高；对于转基因（GFP）萨能奶山羊重构卵的处理，电融合前先放入融合液中于38．5℃下平衡5min，融合时电融合参数为1．5kV／cm、20μs／次、间隔1s时的融合率最高。实验中发现将融合后的两种重构胚胎先置入IVM培养液中于38．5℃下平衡4h，可降低重构胚胎的死亡率，提高发育质量和卵裂率。     

荷斯坦青年牛初次配种妊娠月龄对头胎和二胎产奶量和繁殖性能的影响

旨在研究母牛初次配种妊娠月龄（age at first pregnancy,AFP）对其泌乳性能和主要繁殖性能的影响。本研究以我国北方地区2个规模化奶牛场13 927头荷斯坦母牛（A牧场8 091头,B牧场5 836头）的生产数据为基础,统计了母牛AFP、头胎和二胎的产奶量、产后首次发情时间、首次配种时间和首次受孕时间,然后将母牛根据AFP的早晚（12~19月龄）分为8组,对各试验组母牛的头胎和二胎产奶量和主要繁殖性能的数据进行比较分析。结果表明：1）2个规模化奶牛场荷斯坦青年牛AFP以13和14月龄为主（总占比70.1%）;2）AFP可显著影响荷斯坦青年牛头胎和二胎的305 d产奶量（P<0.05）,其中AFP为14月龄时A牧场头胎和二胎305 d产奶量均最高,分别为15 102和15 534 kg;3）AFP可显著影响荷斯坦青年牛头胎和二胎产后首次发情时间和受孕时间（P<0.05）,AFP为14月龄时头胎产后首次发情和受孕情况最优;4）对于产后首配时间,除A牧场头胎AFP为16月龄时产后首次配种时间显著高于AFP为17月龄时（P<0.05）外,其余各组间均无显著性差异（P ≥ 0.05）,并且各组间配种时间相差≤ 5 d;5）通过对A牧场在场牛（2 703头）与淘汰牛（660头）的AFP记录数据分析发现,在场牛的AFP为14.52月龄,显著高于淘汰牛的AFP（P<0.05）。因此,在北方地区现有的生产管理水平下,14月龄可能是荷斯坦青年牛最适宜的初次配种妊娠月龄,这对我国规模化奶牛场选择荷斯坦青年牛适宜的初次配种月龄具有一定参考价值。     

莎能奶山羊皮肤成纤维细胞几种冷冻保存方法的研究

以莎能奶山羊皮肤组织为材料进行细胞培养,通过分离纯化建立了莎能奶山羊皮肤成纤维细胞系.纯化培养的成纤维细胞在冷冻保护剂和血清成分相同的条件下选用5种具有不同预冷平衡方式和预冷时间的方法进行冷冻保存,5个月后通过对成纤维细胞复苏后的活力对比分析,方法3(70%细胞悬液 20%胎牛血清 10%DMSO;先在4 C预冷平衡0.5 h,接着液氮罐口气态氮悬挂4 h,然后沉入液氮)冻存细胞解冻后胎盘蓝染色细胞活力分析,活细胞率为84.8%,培养48 h后细胞贴壁率为85.4%,明显高于其他几种方法.     

荷斯坦牛性控冷冻精液处理时间对冻后活力的影响

本文通过对XY种畜(天津)有限公司的荷斯坦牛性控精液两年的生产数据进行了统计分析,结果表明性控精液生产中原精处理时间的长短对精液冻后活力有明显的影响。     

β-环糊精胆固醇包合物对牛性控精子品质的影响

本试验探讨了添加β-环糊精胆固醇包合物（cholesterol-loaded cyclodextrin，CLC）对牛精子品质的影响。试验以CLC处理与对照组进行比较，测定性控牛冻精的纯度、活率、畸形率和顶体反应（AR）率。结果表明：添加CLC不影响牛精子的分离纯度（P〉0．05）；CLC性控牛冻精活率极显著高于对照组（P〈0．01）；405nm分光光度仪测定ACP吸光度值，因获能液不同而有所不同，随着孵育时间的延长，对照组和CLC组的ACP吸光度值均显示增加，孵育45min后CLC组开始极显著降低（P〈0．01）。结果证实，CLC可提高牛精子膜的稳定性，可用于性控牛精子的冷冻保存。