哺乳动物成体干细胞的研究进展

干细胞具有自我更新能力,能够产生高度分化的功能细胞。干细胞按照发育阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞。根据干细胞的发育潜能分为三类：全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。胚胎干细胞的发育等级较高,是全能干细胞,而成体干细胞的发育等级较低,是多能或单能干细胞。一般认为成年组织或器官内的干细胞具有组织特异性,只能分化成特定的细胞或组织,然而,研究结果表明,组织特异性干细胞同样具有分化成其他细胞或组织的潜能,这为干细胞的应用开创了更广泛的空间。作者主要综述了干细胞的研究进展及几种成体干细胞的诱导分化。     

显微操作针的制作

显微操作技术如今已广泛应用于胚胎生物工程,如体细胞核移植、显微受精、胚胎性别鉴定和胚胎分割等。完成这些工作,首先必须有符合要求的显微操作针,由国外购买成品针用于显微操作人员培训其成本太高。本实验室主要从事牛、羊的体细胞克隆工作,所以由国外购买了拉针仪、煅针仪和磨针仪。经过一年的学习摸索,显微操作针的制作已很熟练,而国内做显微操作针的相关资料还很少,现将实验中摸索出来的一些方法和技巧总结出来与同行共享。1做针用材料实验室购买的是NIKON和LEICA公司的显微操作系统,因此使用的是与其相匹配的外径为1mm,壁厚0.1mm…     

牛乳铁蛋白基因N-lobe的cDNA克隆及毕赤酵母表达载体的构建

以牛乳腺组织总RAN为模板,经RT-PCR得到牛乳铁蛋白基因的N-lobe片段并将其克隆到pGM-T克隆载体上,最后将其连入表达载体pPICZαA中,构建牛乳铁蛋白基因N-lobe的酵母表达载体。结果表明：克隆片段大小为1028bp,与Gen Bank中登录的序列的相应部位相比,所获牛乳铁蛋白N-lobe cDNA序列的同源性为99.7%;重组表达质粒经酶切和PCR鉴定构建正确,为酵母表达乳铁蛋白基因N-lobe奠定了基础。     

哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究进展

本文概述了卵母细胞孤雌激活的研究历程,并从激活机制、激活方法及影响因素等方面对孤雌激活的研究意义和发展前景进行了综述。     

体细胞核移植生产转基因牛胚胎的研究

为了优化利用体细胞核移植生产转基因牛早期胚胎的体系,以携带绿色荧光蛋白-新霉抗性双标记基因的pMSCV质粒转染的胎牛耳成纤维细胞为供体,以体外成熟的牛卵母细胞为受体构建克隆胚,研究供体细胞的传代次数对转基因胚的影响和重构胚在不同电场条件下（电场强度、直流电脉冲次数）融合效率及其在不同体外培养系统中的发育效果。结果表明：传代5次的细胞做核供体较有利于转基因胚的发育;在电场条件为电场强度1.6 kV/cm、直流脉冲1次的融合率最高;负压单层细胞共培养体系中的转基因囊胚发育率较好,与未转基因体细胞核移植胚的发育相比无显著差异（P〉0.05）。     

非繁殖季节诱导母羊发情优选方案的研究

对非繁殖季节的母羊采用孕酮复合制剂、非繁殖季节CRID和撤栓前一天注射PMSG处理 ,可以显著地提高母羊的排卵率。试验结果表明 ,处理后母羊的排卵率达到 15 8.82 % ,繁殖率为 12 8.5 7%。     

母牛一胎双犊技术的研究

选择9头母牛先行人工授精、7天后再移植冷冻胚胎以生产双犊。试验结果表明,母牛产双犊达44.44%(P<0.01)。提示:采用A(I人工授精)+ET(胚胎移植)是提高母牛双犊率的有效技术措施之一。     

重构胚移植用受体山羊同期发情处理效果比较

本实验分别用两种CIDR PMSG(处理1)和CIDR PMSG LH(处理2)方法对山羊进行同期发情处理。结果发现,两种处理均以撤栓后第1d发情率最高。撤栓后0～24h和24～48h发情率,两种处理(61.4%,13.6%;48%,20%)之间差异不显著;撤栓后48～72h发情率,处理1(4.5%)显著低于处理2(24%)(P<0.05);撤栓后0～72h发情率,两种处理(79.5%,92%)无差异(P>0.05)。手术后卵巢观察可以看出,有大卵泡或排卵的发情羊,处理1为91.2%,处理2为100%,二者无显著差异;排卵的发情羊,处理1(58.8%)显著低于处理2(91.2%)(P<0.05)。     

对牛卵母细胞孤雌激活条件优化的研究

本文探讨了HYA（透明质酸酶）的浓度和作用时间对牛体外成熟卵母细胞脱卵丘的影响,不同强度电脉冲＋乙醇＋6-DMAP对牛体外成熟卵母细胞的孤雌激活作用以及和乙醇＋6-DMAP激活的比较。对电融合脉冲强度和脉冲次数进行了优化。结果表明：卵母细胞成熟培养22h,用0．20％HYA作用10min或0．50％HYA作用5min效果较好。在激活电压1．6kV/cm、20μs／次、间隔1s,脉冲次数为1次的条件下的激活效果较好,在此条件下与乙醇＋6-DMAP激活相比较,孤雌激活胚胎的囊胚率分别为19．6％和26．9％,差异不显著。     

性控冻精在奶牛生产中应用与展望

XY精子流式细胞分选技术是目前最有效的性别控制繁殖手段之一。本文使用冷冻后X精子人工授精,平均情期受胎率达63%,青年母牛的情期受胎率为77.45%;用性控冻精通过超排技术生产体内性控胚胎平均每头次达5.2枚。用PCR技术对生产的体内胚胎进行性别鉴定后,雌性胚胎的比率为92.98%,实际出生牛犊的母犊率在93%左右。由此表明,使用XY种畜(天津)有限公司生产的性控冻精在生产中应用效果良好,在受胎率不受影响的情况下其性控率可达90%以上。