脱氧雪腐镰刀菌烯醇对仔猪海马神经细胞凋亡及线粒体膜电位的影响

[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对仔猪海马神经细胞的凋亡及其信号通路的影响。[方法]体外培养仔猪海马神经细胞至对数生长期,以不同质量浓度的DON(0、125、250、500、1 000和2 000 ng·mL~(-1))进行处理,采用倒置显微镜和透射电镜观察细胞的形态学变化及线粒体结构,CCK-8试剂盒检测细胞的存活率,流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化,ELISA试剂盒检测caspase-3酶活性,荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Bcl-2和Bax mRNA的表达水平。[结果]DON可显著抑制仔猪海马神经细胞存活率并诱导细胞发生明显的形态学变化,且具有剂量和时间效应;DON可降低线粒体膜电位,增强caspase-3酶活力,并通过上调Bax mRNA和下调Bcl-2 mRNA的表达,增加Bax/Bcl-2值。[结论]DON可通过引起线粒体功能障碍,激活caspases-3并调节Bcl-2家族基因,从而诱导仔猪海马神经细胞凋亡。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇暴露对仔猪海马神经细胞神经递质、脂质过氧化及钙稳态的影响

本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)暴露对体外培养的仔猪海马神经细胞中神经递质、脂质过氧化及钙稳态的影响,探讨DON的神经毒性作用。以不同质量浓度的DON(0、125、250、500、1 000和2 000 ng/m L)处理仔猪海马神经细胞24 h后,检测细胞中5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、乙酰胆碱(ACH)、γ-氨基丁酸(GABA)、去甲肾上腺素(NE)含量,总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量,钙离子(Ca2+)、钙调蛋白(Ca M)含量以及Ca M m RNA相对表达量。结果表明:与对照组相比,1)当DON浓度为1 000 ng/m L时,5-HT、DA、ACH含量显著升高(P0.05),GABA含量极显著升高(P0.01),而NE含量显著降低(P0.05);当DON浓度为2 000 ng/m L时,5-HT、DA、ACH含量极显著升高(P0.01)。2)当DON浓度为250 ng/m L时,SOD活性和T-AOC极显著降低(P0.01);当DON浓度为1 000 ng/m L时,GSH-Px活性显著降低(P0.05),NO含量极显著降低(P0.01),而MDA含量极显著升高(P0.01);当DON浓度为2 000 ng/m L时,CAT活性显著降低(P0.05),GSH-Px活性极显著降低(P0.01)。3)当DON浓度为125 ng/m L时,Ca M含量极显著升高(P0.01);当DON浓度为250 ng/m L及以上时,Ca2+含量和Ca M m RNA相对表达量极显著升高(P0.01)。综上,DON暴露可改变仔猪海马神经细胞神经递质的分泌及脂质过氧化,并影响钙稳态,对仔猪海马神经细胞具有一定的神经毒性作用。     

南京市天然气利用工程管道的风险评价

W. Kent Muhlbauer的指数评分法是一种比较成熟的管道风险评价方法,但该方法还存在不完善之处.通过对此方法加以改进,并将改进后的方法用于南京市城市天然气利用工程高压输气管道的风险评价中,实际应用结果表明,此改进方法的评价结果与相关文献的结果相一致,其表达更明确更直观.     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)暴露对断奶仔猪血清及小肠黏膜免疫功能的影响

旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)暴露对断奶仔猪血清及肠道黏膜免疫功能的影响。选择30头21日龄临床检查健康的"杜×长×大"三元杂交断奶仔猪,体质量(6.87±0.41)kg,随机分为3组,对照组饲喂基础日粮,低剂量组和高剂量组分别饲喂含1,2 mg/kg的DON日粮,试验期为60 d。试验结束时,所有仔猪经前腔静脉采血,分离血清,用于检测免疫因子含量;同时每组随机选择5头仔猪进行屠宰,收集免疫器官及各段小肠,用于检测免疫器官指数及小肠组织中免疫球蛋白的表达水平。结果显示:与对照组相比,DON处理组仔猪血清中分泌型免疫球蛋白A(sIgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、补体3(C3)及补体4(C4)含量均显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01);试验组仔猪脾脏指数较对照组显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01);小肠各段肠黏膜中免疫球蛋白表达水平均随DON含量的增加而显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01)。结果表明,在本试验条件下,DON可降低断奶仔猪的体液免疫及肠道黏膜免疫水平,改变仔猪的免疫功能。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇暴露对断奶仔猪延髓脂质过氧化反应、神经递质及钙稳态的影响

旨在通过脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)体内暴露试验,检测仔猪延髓组织的脂质过氧化反应、神经递质分泌及钙稳态的变化,研究DON对仔猪的神经毒性作用。选取30头21日龄"杜×长×大"三元杂交断奶仔猪,随机分为对照组、DON低剂量组和DON高剂量组,每组10头仔猪。对照组饲喂基础饲料,DON低剂量组和高剂量组分别饲喂含1、2 mg·kg^-1DON的饲料,试验期为60 d。试验结束时,每组随机选择5头仔猪屠宰,采集延髓组织,检测氧化与过氧化水平、神经递质含量和Ca²⁺浓度、钙调蛋白(CaM)与钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(CaMKⅡ)mRNA相对表达量及CaM、CaMKⅡ、p-CaMKⅡ的蛋白表达水平。结果显示:与对照组相比,DON高、低剂量组脂质过氧化指标超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性极显著降低(P<0.01),而一氧化氮(NO)浓度极显著升高(P<0.01);DON高、低剂量组神经递质5-羟色胺(5-HT)浓度极显著升高(P<0.01),而乙酰胆碱(ACH)浓度极显著降低(P<0.01),高剂量组多巴胺(DA)和γ-氨基丁酸(GABA)浓度显著下降(P<0.05);DON高、低剂量组钙稳态指标Ca²⁺浓度均极显著升高(P<0.01),低剂量组CaM mRNA表达量显著降低(P<0.05),高、低剂量组CaMKⅡmRNA表达量均极显著降低(P<0.01);DON高剂量组CaM蛋白表达水平极显著降低(P<0.01),而p-CaMKⅡ蛋白表达水平极显著升高(P<0.01)。试验结果表明,DON暴露能够改变仔猪延髓组织脂质过氧化反应及神经递质的分泌,并导致钙稳态紊乱,对断奶仔猪具有一定的神经毒性作用。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇暴露对仔猪海马神经细胞神经递质、脂质过氧化及钙稳态的影响北大核心CSCD

本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)暴露对体外培养的仔猪海马神经细胞中神经递质、脂质过氧化及钙稳态的影响,探讨DON的神经毒性作用。以不同质量浓度的DON(0、125、250、500、1 000和2 000 ng/m L)处理仔猪海马神经细胞24 h后,检测细胞中5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、乙酰胆碱(ACH)、γ-氨基丁酸(GABA)、去甲肾上腺素(NE)含量,总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量,钙离子(Ca2+)、钙调蛋白(Ca M)含量以及Ca M m RNA相对表达量。结果表明:与对照组相比,1)当DON浓度为1 000 ng/m L时,5-HT、DA、ACH含量显著升高(P<0.05),GABA含量极显著升高(P<0.01),而NE含量显著降低(P<0.05);当DON浓度为2 000 ng/m L时,5-HT、DA、ACH含量极显著升高(P<0.01)。2)当DON浓度为250 ng/m L时,SOD活性和T-AOC极显著降低(P<0.01);当DON浓度为1 000 ng/m L时,GSH-Px活性显著降低(P<0.05),NO含量极显著降低(P<0.01),而MDA含量极显著升高(P<0.01);当DON浓度为2 000 ng/m L时,CAT活性显著降低(P<0.05),GSH-Px活性极显著降低(P<0.01)。3)当DON浓度为125 ng/m L时,Ca M含量极显著升高(P<0.01);当DON浓度为250 ng/m L及以上时,Ca2+含量和Ca M m RNA相对表达量极显著升高(P<0.01)。综上,DON暴露可改变仔猪海马神经细胞神经递质的分泌及脂质过氧化,并影响钙稳态,对仔猪海马神经细胞具有一定的神经毒性作用。     

DON暴露对断奶仔猪抗氧化水平、血清生化指标及小肠黏膜形态的影响

旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)暴露对断奶仔猪抗氧化水平、血清生化指标及小肠黏膜形态的影响。选择健康的“杜×长×大”三元杂交断奶仔猪30头,随机分成3组,对照组饲喂基础饲粮,低剂量组和高剂量组分别饲喂1和2 mg·kg^-1的DON饲粮,试验期为60 d。试验结束时,所有仔猪采集血液样本,用于检测抗氧化性能、血清生化指标及肠道通透性。每组选5头仔猪进行剖杀,取小肠组织观察病理变化。结果显示,与对照组相比,DON显著降低了断奶仔猪血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性(P<0.05),提高了一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)水平(P<0.05),并引起碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转移酶(γ-GGT)、肌酐(CREA)、α-淀粉酶(α-AMY)、脂肪酶(LIP)、肌酸激酶(CK)活性显著升高(P<0.05),谷草转氨酶(AST)活性显著降低(P<0.05),血清二胺氧化酶(DAO)及D-乳酸(D-LA)含量随DON剂量的增加而显著升高(P<0.05)。低剂量DON可使小肠黏膜发生部分形态改变,而高剂量DON使小肠组织严重受损。试验结果表明,DON暴露可改变断奶仔猪机体抗氧化反应,引起部分生化指标异常,造成肠道黏膜损伤,增加肠道通透性,对仔猪具有一定的毒性作用。     

自噬对DON诱导仔猪海马神经细胞损伤的影响

[目的]本试验旨在研究自噬对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)诱导仔猪海马神经细胞损伤的影响。[方法]以不同质量浓度DON(0,125,250,500,1 000和2 000 ng·mL~(-1))处理对数生长期仔猪海马神经细胞24 h后,采用倒置显微镜、透射电镜观察DON对仔猪海马神经细胞形态和超微结构的影响;采用p EGFP-LC3质粒瞬时转染细胞,荧光显微镜检测绿色荧光蛋白的分布情况;采用Western blot检测DON对仔猪海马神经细胞自噬标志性蛋白LC3的表达;通过添加自噬激活剂雷帕霉素(RAP)和自噬抑制剂氯喹(CQ)来升高和降低细胞的自噬水平,CCK-8法检测细胞的存活率。[结果]不同质量浓度的DON均可诱导细胞自噬,自噬水平随着DON浓度的增加先上升后下降,在1 000 ng·mL~(-1)时达到峰值。与对照组相比,DON可显著抑制细胞存活率并诱导细胞发生明显的形态学变化,并呈剂量依赖性;随着DON浓度的升高,细胞LC3-Ⅱ含量先上升后下降,1 000 ng·mL~(-1)时,LC3-Ⅱ含量最高,差异显著或极显著(P0.05或P0.01)。与DON处理组相比,自噬水平的上升显著提高细胞活性(P0.05),而自噬水平的下降显著降低细胞活性(P0.05)。[结论]DON可以引起仔猪海马神经细胞自噬水平的上升,激活的自噬对DON导致的细胞损伤具有一定的保护作用。