脱氧雪腐镰刀菌烯醇对仔猪海马神经细胞凋亡及线粒体膜电位的影响

[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对仔猪海马神经细胞的凋亡及其信号通路的影响。[方法]体外培养仔猪海马神经细胞至对数生长期,以不同质量浓度的DON(0、125、250、500、1 000和2 000 ng·mL~(-1))进行处理,采用倒置显微镜和透射电镜观察细胞的形态学变化及线粒体结构,CCK-8试剂盒检测细胞的存活率,流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化,ELISA试剂盒检测caspase-3酶活性,荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Bcl-2和Bax mRNA的表达水平。[结果]DON可显著抑制仔猪海马神经细胞存活率并诱导细胞发生明显的形态学变化,且具有剂量和时间效应;DON可降低线粒体膜电位,增强caspase-3酶活力,并通过上调Bax mRNA和下调Bcl-2 mRNA的表达,增加Bax/Bcl-2值。[结论]DON可通过引起线粒体功能障碍,激活caspases-3并调节Bcl-2家族基因,从而诱导仔猪海马神经细胞凋亡。     

DON暴露对雏鸡神经递质及钙调蛋白含量的影响

【目的】通过DON暴露体内试验,根据雏鸡脑组织中神经递质含量及钙调蛋白(CAM)含量的变化,研究DON对雏鸡的神经毒性作用。【方法】选取120只健康1日龄海兰蛋鸡(公)预饲1周后,按单因素试验设计随机均分为DON低、中、高剂量组和对照组,对照组和试验组饲喂相同的全价日粮。DON低剂量组、中剂量组和高剂量组分别按采食量中含DON 0.27,1.68和12.21mg/kg的剂量灌胃,对照组灌服等量的生理盐水。试验从第8天开始,每隔7d染毒1次,共染毒5次。试验期为36d。试验结束时,每组随机屠宰20只鸡,迅速取出脑组织,检测神经递质含量和CAM含量的变化。【结果】经高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FD)检测,雏鸡脑组织中未发现5-羟色胺吲哚乙酸(5-HIAA);与对照组相比,DON高剂量组雏鸡脑组织中去甲肾上腺素(NE)和5-羟色胺(5-HT)含量显著升高(P0.05),而多巴胺(DA)含量显著降低(P0.05)。与对照组相比,DON中、高剂量组雏鸡神经细胞内游离钙([Ca2+]i)浓度和脑组织中CAM含量显著降低(P0.05),不同DON剂量组CAM mRNA基因相对表达量均显著降低(P0.05)。【结论】DON暴露可引起雏鸡神经钙稳态变化,并影响部分神经递质的分泌,对雏鸡具有一定的神经毒性作用。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对PC12细胞自噬的影响

【目的】研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对PC12细胞自噬的影响。【方法】以不同质量浓度(0(CK),125,250,500,1 000和2 000ng/mL)的DON处理PC12细胞24h后,采用倒置显微镜、透射电镜、免疫荧光、荧光定量PCR、Western-blot等技术,研究DON对PC12细胞形态和超微结构、LC3聚点率及自噬相关基因classⅢPI3 K、Beclin-1、P62 mRNA和蛋白LC3Ⅱ、P62、classⅢPI3K表达的影响。【结果】不同质量浓度的DON均可诱导PC12细胞自噬,各试验组细胞自噬水平均高于对照组(CK),并随着DON质量浓度的增大而先增加后下降,在DON质量浓度为1 000ng/mL时达到峰值。与对照组相比,各试验组classⅢPI3 K mRNA和Beclin-1mRNA表达水平均极显著增高(P0.01),P62mRNA表达水平随着DON质量浓度的增加总体呈下降趋势,差异达显著(P0.05)或极显著(P0.01)水平。Western-blot结果显示,LC3Ⅱ蛋白表达量在DON质量浓度为1 000ng/mL时最高,与对照组相比,250~2 000ng/mL DON处理组的LC3Ⅱ蛋白表达量显著(P0.05)或极显著(P0.01)增加;500~2 000ng/mL DON处理组classⅢPI3K蛋白表达量较对照组显著(P0.05)或极显著(P0.01)增加,其中以1 000ng/mL DON处理组表达量最高;与对照组相比,不同质量浓度DON处理组P62蛋白表达量均极显著降低(P0.01),其中以1 000ng/mL DON处理组最低。【结论】DON能够诱导PC12细胞发生自噬,自噬相关基因classⅢPI3 K、Beclin-1、P62及蛋白LC3Ⅱ、P62、classⅢPI3K等参与了DON诱导PC12细胞自噬的调控。