卷丹侧生器官边界域基因LlLBD18的克隆和功能分析

以卷丹(Lilium lancifolium)为试材,克隆了1个LBD转录因子基因,命名为LlLBD18(GenBank序列号ON455210)。其开放阅读框为684 bp,编码227个氨基酸,含有1个典型的LOB结构域。进化树分析发现LlLBD18与姜(Zingiber officinale)ZoLBD18的亲缘关系最近。亚细胞定位结果显示LlLBD18定位于细胞质和细胞核。荧光定量PCR分析表明,LlLBD18在卷丹初生珠芽中表达量最高,其次是根中,在叶片中最低。在珠芽形成过程中,LlLBD18的整体表达情况为先上升后下降再上升,且在珠芽原基启动前期(离体诱导4 d)最高。功能研究发现,在卷丹中过表达LlLBD18可以促进珠芽形成,而沉默LlLBD18后的珠芽形成受到显著抑制,表明LlLBD18在卷丹珠芽形成中起正向调节作用。     

卷丹LlAGO1基因的克隆及表达分析

以卷丹（Lilium lancifolium）叶腋组织为研究材料,利用RT-PCR和RACE技术克隆得到AGO1基因的cDNA全长,命名为LlAGO1。其全长4 014 bp,开放阅读框长3 687 bp,编码1 228个氨基酸残基,其编码蛋白分子量为135.36 kD,理论等电点（pI）为9.57。氨基酸序列分析表明LlAGO1含有PAZ和Piwi两个AGO1典型的结构域;信号肽预测结果表明LlAGO1蛋白不存在信号肽,为非分泌蛋白;亚细胞定位预测其主要定位于细胞核;与相关同源蛋白高度相似,且与芦笋AGO1a蛋白（XP_020260210.1）亲缘关系最近。qRT-PCR分析结果表明：LlAGO1在卷丹叶腋、鳞片、根、叶等不同组织均有表达,其中在叶腋中的表达量最高,叶片和根中的表达较弱;腋生珠芽形成过程中,LlAGO1仅在可形成珠芽的上部叶腋表达,且在珠芽形成时表达量最高,而在不形成珠芽的下部叶腋几乎不表达,推测LlAGO1可能与卷丹珠芽的形成相关。     

百合基本营养成分和活性物质研究进展

百合是重要的食用、药用和观赏多用途植物,其营养成分丰富,并含有多种活性物质。本文综述了国内外百合基本营养成分及多糖、甾体皂苷、生物碱、酚类化合物、黄酮类化合物等活性物质的研究进展,提出食用和药用百合研发中存在的问题,并展望了未来的研究方向。     

百合部分种及品种系统进化关系的EST-SSR 标记分析

 从新开发的百合EST-SSR标记引物中筛选了19对多态性较高的引物,对百合22个原生种和74个品种进行了标记分析,依据各样品间的Jaccard’s遗传距离,用MEGA 5.05构建系统树,并用主坐标分析对试验样品进行类群划分。系统树显示：原产中国的原生种首先分化为两个类群：类群Ⅰ包括卷丹（Lilium lancifolium）、渥丹（L. concolor）、毛百合（L. dauricum）、川百合（L. davidii）、大花卷丹（L. leichtlinii var. maximowiczii）、大花百合（L. concolor var. megalanthum）、淡黄花百合（L. sulphureum）、山丹（L. pumilum）、百合（L. brownii var. viridulum）、兰州百合（L. davidi var. unicdor）等,其中一些为亚洲百合杂种系的起源亲本及麝香百合杂种系的亲本,推测由这些种杂交衍生出亚洲百合杂种系、麝香百合杂种系及LA系;类群Ⅱ包括宜昌百合（L. leucanthum）、湖北百合（L. henryi）、岷江百合（L. regale）等喇叭百合杂种系及东方百合杂种系的亲本,分别衍生出喇叭百合杂种系、东方百合杂种系及OT系,与已有文献记载基本相符。用NTSYS-pc 2.11a作主坐标分析,结果将供试材料分为亚洲百合杂种系、东方百合杂种系、OT系、LA系、原生种等类群,与已知分类关系基本相符。     

百合肌动蛋白基因lilyActin 的克隆与表达分析

 为了在百合功能基因表达研究中选择一个理想内参基因,依据岷江百合cDNA 文库所获得的百合肌动蛋白（Actin）基因的EST 序列,采用RACE 技术进行该基因cDNA 全长克隆,并利用实时荧光定量PCR 分析其在不同组织中的表达模式,获得百合肌动蛋白基因cDNA 全长序列（GenBank 登录号：JX826390）,命名为lilyActin。该基因cDNA 全长1 367 bp,其中,5′非编码区91 bp,3′非编码区233 bp,开放读码框1 134 bp,编码377 个氨基酸。序列比对发现,该基因与其它15 种植物肌动蛋白核苷酸序列的相似性均在80%以上,氨基酸序列的相似性达98%。进化分析显示,百合肌动蛋白与郁金香肌动蛋白的亲缘关系最近。实时荧光定量PCR 结果显示,该基因在百合的花蕾、叶片和鳞片组织中恒定表达,表明相对于其他物种的内参基因,lilyActin 更适宜作为百合属植物的内参基因。     

柠檬色百合实时荧光定量PCR内参基因筛选

为筛选柠檬色百合(Lilium leichtlinii)实时荧光定量PCR稳定的内参基因,以柠檬色百合不同发育时期花被片、根、茎、叶和鳞片为试验材料,测定比较总类胡萝卜素含量;使用RT-PCR和荧光定量PCR检测9个候选内参基因(AP4、Actin、β-TUB、CYP、eIF、GAPDH、RH2、UBC和18S)特异性及表达水平,利用geNorm、NormFinder、Bestkeeper、ΔC_T程序和RefFinder网站综合评估候选内参基因表达稳定性;选用八氢番茄红素酶基因PSY对内参基因稳定性进行验证,最终确定合适且稳定的内参基因。结果表明：1)柠檬色百合花被片发育过程中Actin和AP4为9个候选内参基因中最稳定的内参基因,UBC为最不稳定的内参基因。2)柠檬色百合不同器官间eIF和AP4为候选内参基因中最稳定的内参基因,18S为最不稳定的内参基因。3)在柠檬色百合花被片发育过程和不同器官间,以筛选出最稳定的内参基因为参照计算所得PSY基因表达情况与实际测得总类胡萝卜素含量变化趋势一致;以筛选出最不稳定的内参基因作为参照计算所得PSY基因表达情况与总类胡萝...     

RNAi介导的百合抗CMV和LMoV的载体构建

为获得高效的RNAi(RNA interference)表达载体,培育百合抗病毒新种质,选取感病百合叶片为试验材料,同源序列比对后选取CMV 2b基因271 bp和LMoV cp基因428 bp作为靶基因片段。首先采用RT-PCR方法对感病植株进行病毒检测,确定其带有CMV和LMoV病毒;之后提取感病植株叶片总RNA,反转录得到cDNA,设计带有不同酶切位点的引物,以反转录得到的cDNA为模板,PCR扩增获得目的片段,产物回收纯化后,转化大肠杆菌,重组克隆。将各自的反向片段、正向片段顺次连接到载体pFGC5941上,经多次双酶切、连接、转化后,采用冻融法将构建好的载体转入农杆菌EHA105并进行重组鉴定。酶切结果表明已成功构建了分别抗CMV、LMoV的RNAi植物表达载体pFGC5941-C2和pFGC5941-L2,PCR扩增结果表明表达载体已成功转入农杆菌中。所构建的载体及获得的工程菌与预期的完全一致,获得含载体的农杆菌可以直接应用于百合转基因抗病毒育种工程中。     

百合资源抗棉蚜性鉴定及遗传多样性分析

鉴定百合资源抗棉蚜性和分析其遗传多样性,可为百合抗蚜及进一步抗病毒病育种提供重要亲本资源,提高百合抗蚜育种效率.连续3年,利用人工蚜虫接种和蚜量比值法鉴定60份百合资源(11份野生种、49份品种),荧光SSR标记分析遗传多样性.60份百合资源根据蚜量比值法可分为5级,12份资源为高感材料,6份资源为感虫材料,4份资源为中抗材料,7份资源为抗虫材料,31份资源为高抗材料.6对SSR引物共检测出35个主要等位变异,每个位点平均5.8个;多态性信息含量为0.5663～0.8940,平均0.7472;基因多样性指数变化为0.491～0.848,平均0.647;Shannon多样性指数为1.3759～2.5319,平均1.9231.不同抗蚜级别种质间遗传距离变化为0.1309～0.5403,平均0.3306,遗传一致度变化为0.5826～0.8773,平均0.7267.其中,感虫组和高感组资源遗传距离最小(0.1309),遗传一致度最大(0.8773),亲缘关系较近.UPGMA聚类分析结果表明,高抗百合组和中抗百合组资源聚为一类,高感百合组和感虫百合组资源聚为一类.个体间聚类,5组百合资源在多个组群中均出现.通过试验研究,建立百合种质资源抗棉蚜评价体系,明确部分资源抗蚜差异及遗传关系,筛选得到一批抗蚜种质资源,为百合抗蚜及进一步抗病毒病育种提供参考.     

百合花色表型数量分类研究

以筛选的257份代表性百合种质为试验材料,使用英国皇家园艺学会比色卡(RHSCC)和测色仪对花色表型进行测定,以测定数据为基础采用系统聚类对样本花色进行数量分类与分析,结合分类结果构建百合花色表型检索体系.结果显示:结合RHSCC和CIELab参数值将百合花色分为白、黄、粉、橙、橙红、玫红、红和暗红8大色系.各色系参数...