结核分支杆菌Rv2031c慢病毒载体的构建及其对RAW264.7细胞凋亡的影响

研究结核分支杆菌Rv2031c基因对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞凋亡的影响。根据GenBank数据库中结核分支杆菌Rv2031c的序列设计引物,以结核分支杆菌国际标准株H37Rv株灭活的菌液上清液为模版,扩增Rv2031c基因;克隆至慢病毒表达载体plex-EGFP中,经酶切和测序鉴定后,获得plex-Rv2031c-EGFP重组慢病毒载体;将重组慢病毒质粒分别与辅助质粒共转染至293T细胞中,转染48h后收集慢病毒,并侵染RAW264.7细胞;侵染48h时收集细胞,用流式细胞术检测各试验组巨噬细胞的凋亡率;提取细胞总RNA并反转录成cDNA,PCR检测Rv2031c基因在细胞中的表达情况;同时,使用细胞裂解液提取细胞总蛋白,Western blot检测Rv2031c蛋白表达水平。结果表明,成功构建了Rv2031c的慢病毒表达载体plex-Rv2031c-EGFP;构建了过表达Rv2031c的慢病毒Rv2031c-lv;感染Rv2031c-lv的RAW264.7细胞的凋亡率为41.8%,而对照组EGFP-lv感染的RAW264.7细胞其凋亡率为30.0%;PCR结果表明Rv2031c在Rv2031c-lv侵染的RAW264.7细胞中高表达;Western blot结果显示Rv2031c蛋白在Rv2031c-lv侵染的RAW264.7细胞中高表达。该研究成功构建了结核分支杆菌Rv2031c的慢病毒表达载体并验证了其对RAW264.7细胞凋亡的影响,为结核分支杆菌在机体内潜伏期感染的药物研究奠定了基础。     

两种油脂对小鼠皮肤创伤修复作用研究

本研究旨在观察阿勒泰大尾羊尾脂油脂对损伤皮肤是否具有修复作用，并与牛油脂、市售商品做比较。研究选择40 只体重在31 ± 1 g 之间的昆明小鼠，雌雄各半，通过构建小鼠皮肤损伤模型，将小鼠分为4 组（羊尾油组、牛油组、市售商品组和空白组）进行试验观察。小鼠皮肤伤口愈合良好，雌鼠的创面愈合能力强于雄鼠，雌鼠伤口愈合速度：羊尾油组＞牛油组＞市售商品组＞空白对照组。雄鼠伤口愈合速度：羊尾油组＞市售商品组＞牛油组＞空白对照组。皮肤组织病理学结果显示，涂抹羊尾脂、牛油脂、市售商品与空白对照处皮肤相比，创伤修复组织中脂肪细胞、胶原纤维以及其他细胞的数量、排列分布均有差异。羊尾油和牛油均有修复皮肤创伤的作用，且羊尾油修复作用更强，羊尾油可通过促进胶原纤维的生成加速皮肤修复。     

miR-193a在MDBK细胞中诱导细胞凋亡的研究

本试验旨在研究miR-193a在致细胞病变型牛病毒性腹泻病毒(cp BVDV)感染MDBK细胞过程中诱导细胞凋亡的分子机制。试验利用TargetScan和Microcosm Targets等生物信息学在线软件预测凋亡相关的miR-193a靶基因Bax,并利用双荧光素酶报告基因系统验证miR-193a的靶基因;用过表达miR-193a的慢病毒pre-miR-193a-lv和抑制miR-193a表达的慢病毒pre-miR-193a-inhibitor-lv分别侵染MDBK细胞,48 h后收集细胞,然后用实时荧光定量PCR、Western blotting和流式细胞仪检测凋亡通路中Bax的表达水平及MDBK细胞凋亡率。结果预测并验证了miR-193a的靶基因为Bax;双荧光素酶报告基因分析结果显示miR-193a能直接结合到Bax 3'UTR区域中的miRNA反应位点,并极显著下调Bax的表达水平(P<0.01);流式细胞仪检测凋亡率结果显示,感染pre-miR-193a-lv慢病毒的MDBK细胞凋亡率极显著升高(P<0.01)。结果表明miR-193a能直接靶向凋亡通路中Bax基因,从而促进凋亡的发生。     

内质网应激对黑色素瘤细胞凋亡影响的研究进展

黑色素瘤是一种恶性的皮肤肿瘤,具有发病率高、易转移、预后差等特点,对人类及动物造成极大的影响。内质网应激介导的黑色素瘤细胞凋亡可能成为治疗黑色素瘤新的靶点,但具体机制还不明确。主要探讨了其研究机制,为黑色素瘤今后的研究方向提供理论依据。     

慢病毒介导牛pre-miR-29b表达的Balb/c小鼠模型建立研究

为了通过慢病毒感染的方法建立pre-miR-29b表达的Balb/c小鼠模型,从而研究miR-29b在动物模型体内过表达对牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)感染和复制的影响,试验根据miRBase数据库中牛miR-29b前体pre-miR-29b序列设计引物,以MDBK细胞全基因组DNA为模板,PCR扩增pre-miR-29b基因,并克隆至空质粒pLL3.7中;共同转染pLL3.7-pre-miR-29b及慢病毒包装辅助质粒(pRSV-Rev、pCMV-VSVG和pMDLg/pRRE)至HEK-293T细胞中,于48,72小时时收集病毒液,浓缩后接种至HEK-293T细胞中进行慢病毒效价测定。将6只Balb/c小鼠平均分成2组,即空质粒pLL3.7感染组和慢病毒pLL3.7-pre-miR-29b感染组,每只小鼠尾静脉注射5.0×10~7 infection units(IU)/mL病毒液,于注射后96小时时处死小鼠,采集肝脏、脾脏、肾脏等器官,提取总miRNA,并反转录成cDNA,使用TaqMan荧光定量RT-PCR法检测miR-29b在小鼠不同器官中的表达情况。结果表明:试验成功扩增得到牛pre-miR-29b并构建出pLL3.7-pre-miR-29b;成功包装pLL3.7-pre-miR-29b慢病毒,其效价为5.8×10~8 IU/mL;经尾静脉注射慢病毒后,在慢病毒pLL3.7-pre-miR-29b感染的小鼠不同器官中均有较高水平的miR-29b表达。说明试验成功建立了慢病毒介导牛pre-miR-29b表达的Balb/c小鼠模型。     

中草药标本室的建立对中兽医药与方剂学课程的影响

为了更好地开展中兽医药与方剂学课程的教学和科学研究,使学生了解和掌握中草药物和方剂的理论学习,通过制作中草药饮片标本、干制标本、蜡叶标本和浸制标本,不断地建立和完善中草药标本室,也可以通过中草药标本二维码数据库的建立、常见植物标本的种植栽培,以及野外采集中草药实践教学的实施,提高学生对中兽医药与方剂学课程的学习质量,以期为今后临床实践和应用打下良好的理论基础。     

思政教育在高校专业课教学中的融入 ——以《兽医药理学》为例

要坚持把立德树人作为教育的中心环节,还要把思政工作贯穿教育教学全过程,不断强化教师的立德树人意识,在课程讲授中培养学生的人文关怀能力,引导学生树立正确的世界观、人生观和价值观。结合我国药理学发展、国家对药物管制的相关政策及时事热点问题,深层次解析了《兽医药理学》专业知识,以提升学生的民族自豪感并强化其职业操守培养,同时在社会热点整合式药理学教学中融入思政教育,是践行立德树人的有效路径。     

Ghrelin及其受体和酰基化酶在羔羊不同组织的表达差异研究

采用real-time PCR检测生长激素释放肽(Ghrelin)及其受体(GHS-R)和酰基化转移酶(GOAT)在羔羊下丘脑、垂体、瘤胃、皱胃底、皱胃窦、十二指肠、空肠、回肠、心、肝、脾、肾、胰腺、睾丸的mRNA表达水平。结果显示,Ghrelin、GHS-R和GOAT mRNA在羔羊各组织中均有表达,其中Ghrelin mRNA主要表达于皱胃底(P0.01),其次是十二指肠和胰腺(P0.05);GHS-R mRNA主要表达于垂体(P0.01),其次是下丘脑(P0.05);GOAT mRNA在皱胃底和睾丸的表达水平相对较高,均显著高于其他组织(P0.05)。研究结果表明,Ghrelin系统在反刍动物组织中广泛分布,Ghrelin可能与GHS-R和GOAT共同参与协调羔羊生长调控、摄食等功能的调节作用,为进一步研究反刍动物体内Ghrelin的生物学功能奠定了基础。     

细胞信号肽酶复合体亚基1与牛病毒性腹泻病毒复制的相关性分析

旨在探明信号肽酶复合体亚基1(signal peptidase complex subunit 1,SPCS1)影响牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)复制的作用。使用Benchling和CHOPCHOP等平台设计靶向SPCS1基因的sgRNA,克隆至慢病毒载体lentiCRISPR v2,连同包装质粒pSPAX2和pMD2.G转染至人胚肾细胞HEK-293T中,包装慢病毒并感染MDBK细胞,用嘌呤霉素筛选5代后获得敲低SPCS1蛋白后稳定表达的细胞,用Western blot检测SPCS1蛋白表达的情况;使用荧光定量PCR和免疫荧光分析检测BVDV感染SPCS1蛋白敲低细胞不同时间后5'非翻译区(untranslated region,UTR)mRNA的水平和双链RNA(double-stranded,dsRNA)积累,利用倒置显微镜观察BVDV致细胞病变(cytopathic effect,CPE)情况,根据Reed-Muench方法测定病毒滴度变化情况。结果：Western blot检测SPCS1蛋白表达量明显下降,成功构建SPCS1敲低(knockdown,KD)细胞;BVDV感染SPCS1 KD细胞后与对照Scramble相比,BVDV 5' UTR mRNA水平和dsRNA量均显著性降低(P < 0.01),CPE现象推迟并减弱,子代病毒滴度显著性下降(P < 0.01),最高降低95.8%。SPCS1敲低后显著性影响BVDV复制,为BVDV防控新技术的建立提供理论依据。