慢病毒介导牛pre-miR-29b表达的Balb/c小鼠模型建立研究

为了通过慢病毒感染的方法建立pre-miR-29b表达的Balb/c小鼠模型,从而研究miR-29b在动物模型体内过表达对牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)感染和复制的影响,试验根据miRBase数据库中牛miR-29b前体pre-miR-29b序列设计引物,以MDBK细胞全基因组DNA为模板,PCR扩增pre-miR-29b基因,并克隆至空质粒pLL3.7中;共同转染pLL3.7-pre-miR-29b及慢病毒包装辅助质粒(pRSV-Rev、pCMV-VSVG和pMDLg/pRRE)至HEK-293T细胞中,于48,72小时时收集病毒液,浓缩后接种至HEK-293T细胞中进行慢病毒效价测定。将6只Balb/c小鼠平均分成2组,即空质粒pLL3.7感染组和慢病毒pLL3.7-pre-miR-29b感染组,每只小鼠尾静脉注射5.0×10~7 infection units(IU)/mL病毒液,于注射后96小时时处死小鼠,采集肝脏、脾脏、肾脏等器官,提取总miRNA,并反转录成cDNA,使用TaqMan荧光定量RT-PCR法检测miR-29b在小鼠不同器官中的表达情况。结果表明:试验成功扩增得到牛pre-miR-29b并构建出pLL3.7-pre-miR-29b;成功包装pLL3.7-pre-miR-29b慢病毒,其效价为5.8×10~8 IU/mL;经尾静脉注射慢病毒后,在慢病毒pLL3.7-pre-miR-29b感染的小鼠不同器官中均有较高水平的miR-29b表达。说明试验成功建立了慢病毒介导牛pre-miR-29b表达的Balb/c小鼠模型。