用链球菌疫苗免疫罗非鱼前后其差异表达基因的鉴定与分析

采用抑制性差减杂交技术（SSH）成功构建了罗非鱼O reochrom is nilotica被链球菌Streptococcus iniae疫苗免疫前后正、反两个淋巴细胞cDNA差减文库,富集了免疫过程中表达谱发生变化的淋巴细胞基因,并对文库进行了斑点杂交筛选、测序和ESTs初步分析。结果表明：文库富集了高丰度的差异表达基因,阳性率较高。正向文库中筛选得到21个免疫期间表达丰度上调的基因,其中1个基因与罗非鱼已知基因具有相似性,10个基因与其他鱼类已知基因相似,1个基因与其他物种已知基因具有相似性,9个为未知新基因;负向文库中筛选得到24个免疫期间表达丰度下调的基因,其中3个与罗非鱼已知基因具有相似性,15个与其他鱼类已知基因相似,6个为未知新基因。进一步功能注解发现,正向文库功能基因包括免疫信号传导相关蛋白、防御相关蛋白、肿瘤免疫相关蛋白和淋巴细胞相关蛋白,这些基因免疫后表达丰度升高,提高了机体免疫抵抗力。负向文库功能基因包括细胞免疫相关蛋白、感染相关蛋白和肿瘤发生相关蛋白,这些基因免疫后表达丰度降低,可以降低机体感染和发病几率。     

五彩汤圆工艺条件的优化

以糯米粉为主要原料,采用北方"滚元宵"的方法制作汤圆。通过单因素试验研究影响汤圆品质的因素,采用正交试验确定汤圆制作的最佳工艺条件。结果表明,最佳工艺条件为馅料用量5.5 g,糯米用量6 g,汁水用量4 m L,在此条件下,汤圆的色泽鲜艳、外形圆整、厚薄均匀、无裂口,具有该品种的滋味与气味,无异味。     

大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位在毕赤酵母中的表达及鉴定

为了在毕赤酵母中高效表达大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)及研制具有粘膜免疫佐剂活性的无毒重组LTB,采用PCR方法从产毒型大肠杆菌H44815菌株扩增获得LTB完整编码区DNA,将其克隆到酵母表达载体pPIC9K的分泌信号肽基因下游,构建真核表达载体pPIC9K-LTB;重组质粒经核苷酸测序确认并线性化后电转化毕赤酵母菌株KM71,PCR筛选转化子,并以小量诱导表达筛选高效表达工程菌株,最后Western blotting分析甲醇诱导上清中的LTB及采用亲和层析和HiTrap Desalting预装柱脱盐纯化蛋白。结果表明,PCR克隆获得的LTB编码DNA序列与GenBank登录DNA序列完全一致,定向插入pPIC9K载体,可获得表达LTB的酵母分泌表达载体pPIC9K-LTB;电转化后的重组酵母菌KM71诱导表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析,发现甲醇诱导的培养基上清中含LTB,且具有较好的免疫原性。     

野生黄刺玫的组织培养和快繁技术研究

以野生黄刺玫为外植体,探讨了不同生长调节物质对外植体分化、增殖和生根的影响,并对栽培基质与移栽技术进行研究.结果表明,利于黄刺玫分化的诱导培养基为MS+6-BA1.5 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1;以MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1作增殖培养基效果最好,增殖率为5.5;利于生根的培养基1/2MS+IBA 0.2 mg·L-1;移栽基质为蛭石+珍珠岩+沙(1:1:1)效果最好,成活率97,且苗生长健壮.     

斑点叉尾鮰暴发海豚链球菌病的研究

2006—2007连续两年广西斑点叉尾鮰网箱养殖暴发一种流行性传染病，该病波及面广，传染性强，死亡率30％～100％。发病症状主要表现为浮头、转圈、狂游及发病后期单边眼睛浑浊、突出及伴有全身大面积弥漫性出血。作者先后从症状较为典型发病班点叉尾鮰分离到CMS003～CMS005、CMS009～CMS012共7株代表性菌株，经人工感染实验表明分离菌株对健康斑点叉尾鮰具有很强的致病力，出现症状与自然发病斑点叉尾鮰症状相同。通过常规形态、生理生化及海豚链球菌（Streptococcus iniae）特异性PCR诊断和16S rRNA基因序列系统发育进化分析方法对分离菌株进行分类鉴定，结果表明分离的7株细菌均为海豚链球菌。研究结果表明，海豚链球菌已成为广西斑点叉尾鮰网箱养殖的高致病性病原菌。     

野生黄木香的离体培养及其再生体系研究

以野生黄木香茎段为外植体,探讨了不同生长调节物质对其不定芽诱导、增殖和生根的影响,并建立了野生黄木香的高效再生体系。结果表明,利于野生黄木香分化的诱导培养基为M S+A gNO33.0 m g/L+6-BA1.5 m g/L+NAA 0.5 m g/L+琼脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L;以M S+A gNO33.0 m g/L+6-BA 1.5 m g/L+NAA0.05 m g/L+琼脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L为增殖培养基时的增殖效果最好,增殖倍数为5.5;黄木香高效的再生体系为1/2 M S+A gNO34.5 m g/L+IBA 0.2 m g/L+质量分数0.2%活性炭+琼脂4.0 g/L+蔗糖20 g/L,其生根率可达95%。     

白木香离体培养及高频率植株的再生

以野生白木香Rosa banksiae var. Normalis茎段为外植体,探讨了不同生长调节物质对外植体分化、增殖和生根的影响,并对栽培基质与移栽技术进行研究.结果表明,利于白木香分化的诱导培养基为MS 2.0 mg·L-16-BA 0.1 mg·L-1NAA;MS 2.0 mg·L-16-BA 0.05 mg·L-1NAA作增殖培养基效果最好,增殖率为5.5;利于生根的培养基为1/2MS 0.2 mg·L-1IBA 0.2 mg·L-1NAA;移栽基质为蛭石 珍珠岩 腐叶土(1:1:1)效果最好,成活率98%,且苗生长健壮.建立了白木香高效再生体系.表4参10     

植物细胞凋亡机理的研究

以2-甲基萘醌诱导胡萝卜愈伤组织细胞的原生质体,通过DNA电泳和蛋白质印迹,证明了胡萝卜愈伤组织细胞原生质体发生凋亡过程中有典型的DNA梯形条带出现;随着诱导时间的延长,细胞色素C不断从线粒体释放到胞浆中;核蛋白PARP也随着诱导时间的延长不断降解,并且受caspase的特异抑制剂DEVD所抑制。该实验结果表明植物细胞凋亡过程中有caspase参加,并受细胞色素C的影响。     

斑点叉尾鮰肠败血症（ESC）PCR

由鮰爱德华氏细菌引起的肠败血症（ESC，又称爱德华氏病）是影响斑点叉尾鮰养殖最大的疾病。为快速和准确的诊断该疾病，本研究以NCBI公布的妇爱德华氏细菌eip基因（GeneBank登录号为AF037441）为模板序列，设计种特异性诊断引物，成功建立了用于斑点又尾鮰肠败血症病原菌的PCR检测方法。研究结果表明。该方法能够直接从发病斑点叉尾鮰脑、肝、脾和肾组织中检测到妇爱德华氏菌，检测的最低量为21个细菌；同时，该诊断方法与Ⅰ型荧光假单胞菌、点状产气单胞菌点状亚种、鳗弧菌、温和气单胞菌、肠型点状产气单胞菌、拄状黄杆菌、嗜水气单胞菌、河孤菌、豚鼠气单胞菌及海豚链球菌等常见水产病原菌无交又反应。临床样品检测证明。本研究所建立的PCR检测方法可以用于斑点叉尾鮰肠败血症的快速诊断。