斑点叉尾肠败血症(ESC)PCR诊断方法的建立

由爱德华氏细菌引起的肠败血症(ESC,又称爱德华氏病)是影响斑点叉尾养殖最大的疾病。为快速和准确的诊断该疾病,本研究以NCBI公布的爱德华氏细菌eip基因(GeneBank登录号为AF037441)为模板序列,设计种特异性诊断引物,成功建立了用于斑点叉尾肠败血症病原菌的PCR检测方法。研究结果表明,该方法能够直接从发病斑点叉尾脑、肝、脾和肾组织中检测到爱德华氏菌,检测的最低量为21个细菌;同时,该诊断方法与I型荧光假单胞菌、点状产气单胞菌点状亚种、鳗弧菌、温和气单胞菌、肠型点状产气单胞菌、柱状黄杆菌、嗜水气单胞菌、河弧菌、豚鼠气单胞菌及海豚链球菌等常见水产病原菌无交叉反应。临床样品检测证明,本研究所建立的PCR检测方法可以用于斑点叉尾肠败血症的快速诊断。     

斑点叉尾鮰肠败血症病原菌的分离与鉴定

近两年来，一种严重的传染性疾病在广西斑点叉尾鮰养殖业中流行，造成鱼苗100％死亡；咸鱼的损失也高达30％～80％不等。为了确定该病病原，本试验对患病斑点叉尾鮰脑、肝脏、脾脏和肾脏组织进行了细菌的分离、鉴定及致病性试验。结果从南宁和合浦两地分离到NN和HP两株G短杆菌，人工感染试验表明，腹腔注射感染可引起健康斑点叉尾鮰100％死亡，浸泡感染可引起30％-55％死亡，并且感染发病的斑点叉尾鮰症状与自然发病症状相似。两株细菌的形态特征、培养特性和生理生化反应指标均与国外报道的鮰爱德华氏菌参考菌株（JCM1680）相同；两株细菌的16SrRNA基因序列与JCM1680菌株16s rRNA基因序列同源性均为99．3％。以上研究证实，NN和HP两株细菌为致病性鮰爱德华氏菌，其引起的传染性疾病为斑点叉尾鮰肠败血症。本研究首次对国内斑点叉尾鮰肠败血症进行病原菌的分离和鉴定，证实了斑点叉尾鮰肠败血症在广西斑点叉尾鮰养殖业中的流行及造成严重经济损失，对国内该病的控制及斑点叉尾鮰健康养殖具有重要的指导意义。     

洛美沙星治疗斑点叉尾鮰肠道败血症的初步研究

采用试管稀释法对鮰爱德华氏菌进行体外抑菌试验,测定其最小抑菌浓度(MIC);采用腹腔注射,进行急性毒性试验,检测洛美沙星对斑点叉尾鮰的毒性作用;结合体外抑菌试验和急性毒性试验的结果,配制一定浓度的洛美沙星,对人工感染鮰爱德华氏菌的斑点叉尾鮰进行浸泡治疗,检测该药对斑点叉尾鮰肠道败血症的治疗效果。试验结果表明:洛美沙星对体外鮰爱德华氏菌的M IC为7.57×10-5mg/mL,对斑点叉尾鮰未表现出明显的毒性作用,其对由鮰爱德华氏菌引起的肠道败血症的最佳浸泡治疗浓度约为1.14×10-3mg/mL。     

斑点叉尾鮰肠道败血症的病因分析与防治技术

<正>斑点叉尾鮰肠道败血症(Enteric Septicemia of Catfish,ESC)由鮰爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)感染所致,是斑点叉尾鮰的一种高致死率的传染性疾病。该病于1976年由美国奥本大学学者在阿拉巴马州和乔治亚州发现,并于1981年确定其病原为鮰爱德华氏菌。斑点叉尾鮰肠道败血症给斑点叉尾鮰养殖业造成了严重的经济损失,据报道,由于肠道败血症每年给美国斑点叉尾鮰产业带来的损失达一千多万美元。2000年,ESC被OIE列为斑点叉尾鮰两种重要疫病之一。我国自1984年引进斑点叉尾鮰以来,斑点叉尾     

斑点叉尾■的细菌病及其防控方法(一)

正一、斑点叉尾鮰肠道败血症(爱德华氏菌病,Enteric septicaemia of catfish,ESC)该病是由鮰爱德华菌(Edwardsiella ictaluri)引起的细菌性疾病,于1976年在美国阿拉巴马州和佐治亚州的斑点叉尾中被发现。1.病原病原是鮰爱德华菌,属于肠杆菌科,是一种非条件性致病菌。从宿主范围、致病性、血清学特性和质粒构型来看,鮰爱德华菌至少可分为两种类型。但是,从患病斑点叉尾鮰分离到的鮰爱德华菌     

斑点叉尾鮰肠型败血症及防治

斑点叉尾■肠型败血症 (Enteric Septicemia of Catfish，简称 ESC)又叫■爱德华氏菌病，是由■爱德华氏菌 (E.ictaluri)引起的一种严重危害斑点叉尾■的传染病。在美国该病每年造成数百万美元的经济损失，是斑点叉尾■的最重要疾病。我国自 1987年开始推广养殖斑点叉尾■以来，该病就时有发生，而近年来随着养殖规模的不断扩大，该病的发生也越来越严重，造成的损失也随之增大。因而必须对该病有一个清楚的了解，以便采取有效的防治措施，减少损失。 　　一、病原 　　■爱德华氏菌是斑点叉尾■肠型败血症的病原菌。该菌为革兰氏阴性短…     

三联免疫苗对斑点叉尾鮰细菌性疾病的预防研究

为预防斑点叉尾鮰细菌性疾病的发生,采用人工免疫接种嗜水气单胞菌、点状产气单胞菌亚种、苏伯利产气单胞菌.三个菌株在试验前全都进行复壮、恢复毒性处理,再分别将复壮的培养活菌在健康试验鱼体注射,确认该菌能引起注射鱼发生病后,将受试验鱼带菌血样在肉汤琼脂平面上划线,接种后置温箱培养.挑选生长良好的菌株,培养后,再注射受试验鱼体迅速确认为强毒性致病菌株.用三联疫苗对斑点叉尾鮰注射免疫,再经养殖后采血测试,得到不同株菌抗原的凝集反应效价.     

鱼类爱德华氏菌病的诊断与防控（中）

3常见鱼类爱德华氏菌病及症状由爱德华氏菌感染引起的鱼类疾病统称为鱼类的爱德华氏菌病（Edwardsiellasis）,由Etarda引起的鱼类爱德华氏菌病主要是鲶鱼气肿性腐败病（emphysematous putrefactive disease of catfish,EPDC）,又称迟钝爱德华菌病;由E.ictaluri引起的则主要是斑点叉尾鮰肠型败血症（Enteric septicemia of Channel catfish,ESC）和黄颡鱼红头病 （Red-Head disease of Yellow catfish）。     

5种消毒剂对鮰爱德华菌抑菌效果研究

鮰爱德华菌为变形菌门、γ-变形菌纲、肠杆菌目、肠杆菌科、爱德华菌属,曾被称为爱德华氏菌"GA7752"群,有研究也将其称为鮰爱德华氏菌或鮰爱德华菌,是多种鱼致病的主要病原菌,1976年,在美国斑点叉尾鮰中首次发现,可引起斑点叉尾鮰肠道败血症和黄颡鱼"红头病"等。鮰爱德华菌病从鱼苗到成鱼均可大面积暴发,流行水温24~28℃,主要感染鮰科鱼类。为更好地防治该病,笔者开展了消毒剂对鮰爱德华菌的杀菌实验,筛选出较好杀菌效果的消毒剂,以期为鮰爱德华菌的疾病防治提供参考。     

鮰爱德华氏菌灭活疫苗免疫斑点叉尾鮰后外周血免疫指标的变化

在水温(25±1)℃下,给平均体质量(80±5)g的斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus腹腔注射福尔马林灭活的鮰爱德华氏菌(Formalin-killed Edwardsiella ictaluri,FKE)后,第2、4、6、8、14、21,和28d测定外周血液免疫指标,并在免疫后第28天进行攻毒试验。结果显示:注射鮰爱德华氏菌灭活菌苗后,斑点叉尾鮰外周血红细胞和白细胞数量显著升高,白细胞分类组成变化显著,吞噬细胞的吞噬活性与凝集抗体效价显著上升。第4d免疫组红细胞和白细胞达峰值2.52×106/μL和4.67×105/μL,极显著高于对照组(P<0.01);单核细胞、中性粒细胞、吞噬细胞分类百分比和吞噬指数均在第4d达到峰值,分别为22.3%、5.67%、39.3%和4.33,极显著高于对照组(P<0.01);淋巴细胞分类百分比、凝集抗体效价在第21d达到峰值,分别为54.33%和1:341.33,极显著高于对照组(P<0.01)。攻毒试验结果表明:免疫组相对免疫保护率为64.3%。福尔马林灭活的鮰爱德华氏菌免疫后,斑点叉尾鮰获得较强的抗鮰爱德华氏菌感染保护能力,为进一步研究斑点叉尾鮰肠道败血症的免疫奠定基础。     

斑点叉尾鮰鲁氏耶尔森氏菌病的发生与诊治

2008年3～4月，四川简阳三岔湖网箱养殖的斑点叉尾鮰暴发了一种急性传染性疾病，在发病10天左右时间就造成了大批斑点又尾鮰死亡，死亡率高达85％，造成严重的经济损失。本研究中心对该地区网箱养殖发病的斑点叉尾鮰进行了现场调查采样，经实验室检测确认为鲁氏耶尔森氏菌感染，本文就此病诊疗情况介绍如下，以期对今后斑点叉尾鮰鲁氏耶尔森氏菌病的防治提供参考。     

斑点叉尾鮰“传染性套肠症”的诊治

斑点叉尾鮰“传染性套肠症”是近年来在我国发生的一种斑点叉尾鮰的新型细菌性传染病，危害很大，已经连续几年造成了大批的斑点叉尾鮰发病死亡，严重地威胁着斑点叉尾鮰养殖业的健康发展。目前初步认为该病是由嗜麦芽寡养单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）引起的斑点叉尾鮰的急性致死性传染病，以发生严重的肠炎、肠套叠和脱肛为特征，在短时间内即可引起大批的斑点叉尾鮰死亡，我们称此病为“斑点又尾鮰传染性套肠症（Infectious intussusception of channel catfish IICC）”。由于该病具发病突然，来势凶猛，传染快，呈流行性，死亡快，发病率和死亡率均高等特点，故初期又称其为“斑点叉尾鮰急性流行性传染病”。该病的致病病原和病理变化特征都是在水生动物疾病中罕见的，在此之前，国内外都还未见该菌感染斑点叉尾鮰致病的报道。     

采用酶免疫技术检验鱼的细菌病原体

美国得克萨斯州学院的科学家认为酶免疫技术可发展用来检验鱼的细菌病原体。他们采用斑点叉尾鲴为实验材料，以酶免疫技术检测了鱼体的耶尔森氏菌的轻度不正常传染病，并且由此技术鉴别了来自运动型产气单胞菌的败血症的急性细菌。研究发现酶免疫技术检验和鉴别斑点叉尾鲴的耶尔森氏菌和嗜水气单胞菌病原体在培养程序方面与萤光免疫技术相似。     

斑点叉尾鮰肠套叠症和肠型败血症的诊断及防治

斑点叉尾鮰肠套叠症是一种高发病和高致死的传染性疾病,为了对斑点叉尾鮰肠套叠症与危害大、死亡率高的斑点叉尾鮰肠道败血症进行鉴别诊断,以达到生产上有效区分并防治这两种细菌性疾病的目的,从病原学、流行病学、主要症状、耐药性和病原鉴定等方面进行了比较分析,从而阐明以上两种鲴鱼疾病的诊断方法和防治措施.     

斑点叉尾鮰致病性类志贺邻单胞菌的分离鉴定及药物敏感性

为探究某斑点叉尾鮰养殖场鱼类发病死亡原因,从患病的斑点叉尾鮰(Ietalurus Punetaus)鱼体分离得到一种病原菌,通过形态学观察以及16S rRNA基因序列测定与系统发育树构建分析,确定该菌为类志贺邻单胞菌(Plesiomonas shigelloides)。用Kirby-Bauer纸片扩散法检测病原菌的敏感性,进行药敏试验。类志贺邻单胞菌为革兰氏阴性菌,且对呋喃唑酮、头孢拉定、头孢曲松、头孢唑林及头孢呋辛5种药物产生高度敏感,对氧氟沙星、头孢氨苄、哌拉西林等11种药物中度敏感。通过回归感染试验进行验证,注射类志贺邻单胞菌菌株后,斑点叉尾鮰感染后出现的症状与自然发病个体的症状基本相同。从患病鱼体分离出的即为类志贺邻单胞菌,也正是该致病菌导致斑点叉尾鮰死亡,可利用头孢类高度敏感药物防治。     

斑点叉尾鮰肠道败血症的实用防治方案

鲶爱德华氏菌感染斑点叉尾鮰引起的肠道败血症（enteric septicaemia of catfish ESC）是斑点又尾鲴养殖中主要的危害之，该病流行快，流行面积广，造成经济损失大，因此，在世界卫生组织《水生动物疾病诊断手册》第三版（2000）中将ESC列为重要的鱼病。     

斑点叉尾鮰病原中温和气单胞菌的分离鉴定及药敏特性分析

对患出血病斑点叉尾鮰进行病原分离、鉴定及药敏实验,以期为斑点叉尾鮰出血病的防控提供参考。从患病斑点叉尾鮰血水、腹水及重要组织器官中分离纯化病原菌,并进行分离株理化特性测定、gyrB序列分析及回归感染实验,并通过K-B法进行分离菌株药物敏感性分析。结果显示,回归感染实验鱼出现与自然发病类似症状,并经细菌再分离获得相同分离株,表明分离株是引发本次斑点叉尾鮰疾病的病原菌。分离株理化特性与温和气单胞菌基本一致,gyrB基因序列分析分离株与温和气单胞菌同源性达100%,故分离株鉴定为温和气单胞菌。分离株对多西环素及头孢噻肟高度敏感,对氟苯尼考、阿奇霉素及左氧氟沙星中度敏感。分离菌株是斑点叉尾鮰病原菌,紧急时可选用多西环素等药物进行防控。     

斑点叉尾鮰嗜水气单胞菌病的发生与诊治

本文就一例斑点叉尾鮰败血症、套肠病例进行诊治情况介绍,以期对今后斑点叉尾鮰嗜水气单胞菌病的防治提供借鉴。     

罗非鱼海豚链球菌PCR检测方法的建立

近年来，海豚链球病已给我国及世界罗非鱼养殖带来了巨大的经济损失。为建立特异、敏感、快速的罗非鱼海豚链球菌PCR诊断方法，根据NCBI数据库已公布的海豚链球菌基因序列，设计合成种特异性引物CM1／CM2，进行海豚链球菌特异基因片段的PCR扩增试验、反应条件的优化及不同检测材料的比较。同时测试了方法的特异性和敏感性，对不同养殖鱼场的10份临床样品进行了检测。试验结果表明，引物CM1／CM2可以扩增到与预计大小相符的870bp海豚链球菌特异性基因片段；PCR反应与鮰爱德华氏细菌、Ⅰ型荧光假单胞菌、点状产气单胞菌点状亚种、鳗弧菌、温和气单胞菌、肠型点状产气单胞菌、柱状黄杆菌、嗜水气单胞菌和河弧菌水产常见病原菌均无交叉反应；能够检测的最低细菌数为20～30个海豚链球菌；同时，该PCR可以直接从病鱼的脑、肝脏、肾脏及脾脏组织扩增出特异性目的片段；临床菌株检测结果与基于菌株16srRNA基因序列系统进化分析结果一致。由于病鱼内脏组织总DNA、菌落及菌液可直接用于该PCR扩增，最大限度缩短了整个检测时间及降低了检测成本。方法的建立为致病性海豚链球菌检测提供了一种简便、快速的途径，具有较好的应用前景。     

应用PCR-DGGE和Q-PCR分析不同体重斑点叉尾 皮肤、鳃和胃肠道菌群结构

采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)和荧光定量-聚合酶链式反应(Q-PCR)技术分析高体重(high weight,HW)和低体重(low weight,LW)斑点叉尾(鮰)(Ietalurus punetaus)皮肤、鳃和胃肠道菌群多样性,为斑点叉尾(鮰)微生态研究及筛选斑点叉尾(鮰)源益生菌提供理论依据.结果显示,斑点叉尾(鮰)菌群丰富度由低到高依次为鳃、皮肤、前肠、后肠和胃.肠杆菌科(Enterobacteriaceae)和气单胞菌属(Aeromonas)是皮肤的优势菌群;肠杆菌科(Enterobacteriaceae)、气单胞菌属(Aeromonas)和肠球菌属(Enterococeus)是水体、鳃和胃的优势菌群;肠杆菌科(Enterobacteriaceae)、拟杆菌属(Bacteroidetes)、气单胞菌属Aeromonas)和酵母菌属(Saccharomyces)是肠道的优势菌群.HW斑点叉尾(鮰)鳃菌群的香农多样性指数、均匀度和丰富度及前肠菌群的丰富度显著高于LW斑点叉尾(鮰)(P＜0.05).皮肤的黄杆菌属(Flavobacterium),胃的肠杆菌科(Enterobacteriaceae),前肠的拟杆菌属(Bacteroidetes)和双歧杆菌属(Bfidobacterium及后肠的拟杆菌属(Bacteroidetes)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)和酵母菌属(Saccharo-myces)的拷贝数分别是101 97、107.69、106.19、103.83、106.13、103.92和104 26,均显著高于LW斑点叉尾(鮰)(P＜0.05).结果表明,斑点叉尾(鮰)皮肤、鳃、胃肠道均形成独特的菌群结构,LW和HW斑点叉尾(鮰)菌群结构存在明显差异,HW斑点叉尾(鮰)菌群多样性增加.