Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒三种定量检测方法的比较与评价

为了解决Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus genotypeⅡ,GCRV-Ⅱ)含量和滴度测定方法的选择问题,本研究利用荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)、免疫过氧化物酶单层细胞试验(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)和间接免疫荧光试验(indirect fluorescent assay,IFA)三种方法来对GCRV-Ⅱ进行检测和含量测定,从特异性、敏感性、可靠性和检测结果的相关性来比较这三种方法对于GCRV-Ⅱ定量检测的差异。结果显示:qPCR、IPMA和IFA三种方法检测GCRV-Ⅱ的最低限分别为8.6、86和86拷贝/μL,qPCR的检测灵敏度比IPMA和IFA高一个数量级;特异性分析表明,qPCR、IPMA和IFA三种方法均只能检测出GCRV-Ⅱ型分离株,而其它病毒和未感染病毒的阴性对照细胞均为检测阴性,表明这三种方法均具有较高的特异性;3种方法分别检测60份已知临床样品,qPCR、IPMA和IFA的诊断敏感性和特异性分别为96.7%(29/30)和100%(30/30)、100%(30/30)和93.3%(28/30)及100%(30/30)和100%(30/30);三种方法对于GCRV-Ⅱ的定量检测结果中病毒拷贝数和病毒滴度之间具有较好的相关性,其拟合曲线分别为:Y(IPMA,TCID_(50)/mL)=23.629X-536 174(qPCR,拷贝/mL)(R~2=0.996)、Y(IFA,TCID_(50)/mL)=20.318X-575 062(qPCR,拷贝/mL)(R~2=0.995)和Y(IPMA,TCID_(50)/mL)=1.161X-1 176(IFA,TCID_(50)/mL)(R~2=0.999)。结果表明,GCRV-Ⅱ病毒滴度的测定,除了用IPMA和IFA外,也可以采用qPCR方法通过测定病毒的核酸拷贝数来测算其病毒滴度。     

关于推进吴忠市苹果产业化发展的思考

正吴忠市地处内陆,得黄河水自流灌溉,整个灌区粮丰林茂,素有塞上明珠鱼、米之乡之美誉。独特的气候条件,丰富的光热资源,适合发展苹果生产,被国内著名果汁加工企业誉为全国最佳高酸苹果原料生产基地。近年来,在吴忠市委、市政府的高度重视和支持下,加快了苹果产业基地建设步伐,初步形成了"政府引     

SPF大白猪和长白猪CIITA基因剪接突变体的鉴定分析及在不同组织中的表达模式

为了鉴定分析SPF大白猪和长白猪CIITA剪接突变体，研究其在猪不同组织中的表达模式。本研究以5周龄的8头SPF大白猪和7头SPF长白猪为研究对象，设计特异性引物对CIITA基因进行扩增、克隆和测序，对获得的序列分析其剪接突变体特征，利用在线软件对不同剪接突变体进行生物信息学分析，同时利用荧光定量PCR方法检测CIITA基因剪接突变体在2头SPF长白猪8种组织中的表达模式。结果显示，在SPF大白猪和长白猪CIITA基因CDS区存在3种不同的剪接突变体（CIITA-A、CIITA-B和CIITA-C），其CDS长分别为939、984和1 698 bp。CIITA-A和CIITA-B突变体由于Exon 11部分核苷酸缺失（40和199 bp）使终止密码子提前，从而致使编码CIITA蛋白的结构域受到了剪接的影响，缺失了末端富含亮氨酸的4个重复结构域，蛋白结构发生了明显的改变。进化树结果表明，针对CIITA，猪与绵羊和牛具有较近的亲缘关系，在不同猪品种中具有较高的保守性。同时，CIITA不同剪接突变体在猪8种组织中均有表达，且表达量趋于一致，均在脾或肺中表达量较高，其次是肾、脊髓、甲状腺、肝、胸腺，在心脏中表达最低。本研究从SPF大白猪和长白猪上共获得了3个CIITA剪接突变体，其中两个蛋白结构缺失了4个富含亮氨酸的重复结构域，且不同剪接突变体在猪不同组织中均有表达，表达量稍有差异，为后续CIITA基因在机体内的免疫调控功能研究奠定了理论基础。     

聚戊烯基磷酸酯的合成机理与化学特征

从银杏叶中分离制备聚戊烯醇混合物(C75~C110),纯度为87.2%,选择POC l3为磷酰化剂和三乙胺为碱性水解剂,经过磷酰化和水解二步反应,聚戊烯基氯磷酸酯在三乙胺碱性溶液中转化成聚戊烯基磷酸酯,产品得率在65%以上。聚戊烯醇与POC l3的摩尔比为1∶5~10,反应温度低于10℃;室温水解20 h,反应产物经柱层析纯化和HPLC制备聚戊烯基磷酸酯,由IR、1H NMR、13C NMR和高分辨质谱(HRMS)鉴定其化学结构为聚戊烯基单磷酸酯。     

硫酸铜,硝酸银和脱落酸对草地早熟禾胚性愈伤诱导的影响

试验以草地早熟禾4个品种的成熟种子为外植体,研究了CuSO4、AgNO3、脱落酸(ABA)对草地早熟禾胚性愈伤诱导的影响,结果表明,K3诱导培养基中添加CuSO4对草地早熟禾胚性愈伤组织的形成有促进作用,除DP192-10之外的3个品种都发生了明显的形态上的变化,DP-LF-300和2W42-117在添加5μmol/LCuSO4的培养基上诱导出了乳白色、致密的胚性愈伤组织,2W42-117的胚性愈伤率高达40%。在MS基本培养基中添加AgNO3、ABA对草地早熟禾4个品种的胚性愈伤组织的诱导没有作用。     

HPLC研究油橄榄叶中橄榄苦苷的含量变化规律

研究了油橄榄叶中橄榄苦苷含量的变化规律,以及加工和提取条件对提取得率的影响;采用HPLC法测定橄榄苦苷的含量.对油橄榄叶中橄榄苦苷含量研究表明,一年生长期内有两个高峰期,分别是在2月份和5月份,其中2月份最高,两个低谷期则是在11月份和4月份;品种间差别很大,科拉地17.2 %,最低的配多灵仅为1.65 %;20年生较3年生的高.超声波辅助提取法较加热法提取得率高,自然阴干较烘干的提取得率高.     

草原综合顺序分类法的新改进：Ⅰ类的划分指标及其分类检索图

根据全国２３５２个气象站３０年以上的气候资料以及其他资料，对草原的综合顺序分类法第一级分类的热量级，湿润度级指标进行了修正，设计了新的分类检索图，将地带性和非地带性的天然草地，以及人工草地的类，纳入到统一的检索图的中，并可进行计算机检索。     

鸡BLB重组蛋白的原核表达及多抗制备

为分析鸡主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类抗原β亚基BLB蛋白在鸡脾脏中的表达情况,本研究采用RT-PCR技术从鸡脾细胞中扩增了BLB基因的保守区第3外显子的部分序列,大小约为380 bp.将其克隆于表达载体pET-30a(+)中.在大肠杆菌BL21 (DE3)中,经IPTG诱导表达,获得大小约为19ku以包涵体形式存在的His-BLB重组蛋白.切取含有重组蛋白的SDS-PAGE胶免疫实验兔,获得抗血清.以制备的血清通过westemblot在鸡脾脏中检测到MHCⅡ类分子特异性条带,其大小约为28 ku,与BLB天然蛋白的大小相符合.本研究为进一步分析MHC-Ⅱ类分子在鸡体内的蛋白表达水平提供了依据.     

优化现代农业技术培训机制的探究

众所周知,我国是世界上人口最多的国家,虽然国土面积广阔,农业生产数量名列世界前列,但是人均拥有量匮乏,农业发展已成为制约我国进一步发展的主要问题。当前,随着社会科学技术的迅猛发展,我国的农业建设模式已经进入了现代化阶段,以往的农业培训和生产手段已经无法适应现代农业的进步要求。对农业技术实施革新,做好农业技术培训工作,分析研究优化培训机制势在必行。