荧光素酶标记狂犬病病毒的反向遗传学

通过分子生物学技术克隆萤火虫荧光素酶(Luciferase)基因完整开放阅框后将其定向亚克隆入狂犬病病毒HEP-Flury株全长基因组中的假基因区域,经PCR、双酶切及测序证实构建了嵌有荧光素酶基因的狂犬病病毒全长cDNA感染性克隆。之后,利用反向遗传操作技术进行病毒拯救,抗核蛋白单抗直接免疫荧光染色结果显示,成功拯救了携荧光素酶基因的重组狂犬病病毒rHEP-luc株,RT-PCR证实插入的荧光素酶基因能够稳定遗传;荧光素酶活性分析显示,荧光素酶基因成功表达并具有良好生物学功能;这为应用活体成像技术研究荧光素酶标记狂犬病病毒在小鼠体内侵染移行规律奠定了基础。     

狂犬病病毒反向遗传学研究进展

反向遗传学(Reverse genetics)是由基因结构认识基因功能的科学,与之相关的研究技术称为反向遗传学技术(Reverse genetic manipulation).RNA病毒的反向遗传学是采用病毒的遗传物质,在培养细胞或易感宿主中重新拯救出活病毒或类似病毒物质.能够拯救病毒的遗传物质称为感染性克隆,一般是在细菌质粒中含有整个病毒基因组的cDNA拷贝,使得cDNA本身或从cDNA体外转录所得的RNA具有感染性.自1978年第1例RNA病毒Qβ噬菌体的成功拯救以来,各类RNA病毒的分子生物学研究取得了长足的进展,这主要归功于各种RNA病毒反向遗传系统的建立和发展.     

狂犬病毒糖蛋白单、双拷贝基因重组腺病毒的构建

将携带狂犬病毒糖蛋白单、双拷贝基因的穿梭栽体pShuttle-G和pShuttle-dG分别经PmeⅠ线性化后电转化含E1和E3区缺失的人5型腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态菌株BJ5183-AD-1进行细菌内同源重组,经抗性筛选,PcR、PacⅠ酶切及测序鉴定.构建了狂犬病毒糖蛋白单、双拷贝基因重组腺病毒质粒pAdHu5-G和pAdHu5-dG,线性化后分别转染Ad-293细胞进行病毒包装.结果显示,在第4天发生细胞病变效应,且荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白的表达;western-blot证实2株重组腺病毒表达的糖蛋白能被特异性单抗识别;遗传稳定性分析显示,病毒传至10代时单G和双G基因均稳定遗传,没有发生缺失和突变.为比较分析2株重组腺病毒糖蛋白的表达时效及免疫效果奠定了基础.     

现代化养猪场三维建模与视景仿真系统的研究

为构建现代化养猪场三维模型和可视化软件系统,本研究利用三维视图设计方法获得猪舍建筑及设施的模型参数,根据参数生成育肥猪舍、妊娠猪舍、产房、母猪舍和空气过滤型公猪舍等三维模型;采用三维可视化、视景仿真、数字动画技术,实现包括养殖区域、环保设施和文化公园等场景的现代化猪场虚拟现实创意图,从而可在互联网平台上再现养猪场环境与设施装备场景,并为猪场生产管理和监测预警物联网系统的设计与实现提供技术支持。     

鲤白细胞介素-8基因组DNA的克隆及序列分析

在白细胞介素-8(IL-8)cDNA全长序列的两侧--非翻译区设计一对引物,以提取的鲤脾脏基因组DNA为模板进行PCR扩增,并将扩增产物回收、纯化,连接到pMD18-T载体上,再转化到DH5α大肠杆菌感受态细胞中,并对插入片段进行测序,获得了鲤IL-8基因组DNA的全长序列.结果表明:鲤IL-8DNA全长为943 bp,由4个外显子和3个内含子组成,与已知其它物种的排列非常相近,说明在进化过程中其拼接位点非常保守,符合GT-AG规则;对系统发生的分析证明,鲤与斑马鱼的亲缘关系较近,与哺乳动物亲缘关系较远;将鲤的IL-8基因组结构与人、猪、狗、虹鳟的基因组结构进行比较,发现IL-8基因在由鱼类到哺乳动物的分子进化过程中较为保守,外显子基本保持稳定,而内含子的变化较大.     

鲤鱼白细胞介素-8全长cDNA的克隆、鉴定及其差异表达分析

用DD-RTPCR的方法获得差异显示片段A26,经地高辛标记作为探针对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库核酸杂交筛选,从0.8×104个重组噬菌体中,经过2轮筛选获得阳性克隆。序列分析表明该克隆含有1个大小为294bp编码98个氨基酸的完整开放阅读框,氨基酸序列含有Chemokine-CXC功能结构域,前体中含有22个氨基酸组成的引导肽,氨基酸序列比对显示成熟白细胞介素-8(IL-8)多肽中第12、13和14构成CXC基序,但之前无ELR基序。系统发生分析其与荷兰鲤鱼亲缘关系最近,氨基酸序列的同源性达89%。分离培养鲤鱼外周血白细胞,在不同条件下经LPS、PHA和ConA刺激后,提取总RNA,根据鲤鱼IL-8全长cDNA序列和β-ac-tin序列设计引物,利用半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法对鲤鱼外周血白细胞IL-8进行差异表达分析,结果显示,经有丝分裂原刺激后前期(4h)白细胞中IL-8的表达量明显增大,但随着时间推移(12、24h)并不一直比同期正常白细胞表达量大,表达量趋势成峰形图。     

非洲猪瘟疫情下屠宰企业转型升级与肉类消费结构的转变

2019年,我国养猪业一直深受非洲猪瘟疫情影响,农业农村部等政府部门为切实防范非洲猪瘟疫情扩散风险,保障生猪产品质量安全和市场供应,而进一步强化生猪屠宰环节监管,通过加快推进生猪屠宰标准化创建,压缩落后产能,坚决关闭不符合条件的生猪屠宰厂(场),促进被淘汰屠宰企业转型升级。另外,伴随非洲猪瘟疫情的持续影响,生猪产能下降,市场猪肉供应紧张和居民对猪肉消费心理的改变,也加速了肉类市场消费结构转变。     

规模化猪场疫病传入的外部风险因素指标体系的初探

据实际调查,运用层次分析法,将疫病传入的各外界风险因素指标划分为目标层、准则层和分准则层三个层次。采用EXCEL软件进行数据统计,依次编辑各层次结构模型,构建各层次的判断矩阵和一致性检验。结果表明：猪场的管理措施、生物安全、场址是疫病传入的主要风险因素。据此确立了I级指标和II级指标,从而构建疫病传入的风险因素指标体系。     

旋毛虫属分类的研究进展

近年来,随着遗传学、生物学和生物化学的发展,已将旋毛虫属分为8个种和3个分类地位尚未定的基因型。文章就不同种和基因型的旋毛虫,分别具有的不同宿主、环境选择因素和世界性分布区域做一综述。     

动物养殖安全风险评估

针对我国动物源性产品质量安全问题,概述动物及其产品风险评估的重要作用.采用Visual Studio.NET 2008,面向对象程序设计思想的编程语言C#和.NET Framework3.5编程环境,研发了动物及其产品风险预警系统.该系统利用计算机对不同的动物的养殖环境、疫病发生及动物产品在实际生产中的数据进行风险评估.通过3个实例的演示,将风险评估应用于畜牧生产实际.结果表明,该系统简单易操作,覆盖面较广,数据采集较简易.利用风险评估模型在养殖等相关环节可控制动物及其产品的风险,减少经济损失,保障公众健康.