SPA的实验室制备及标记技术

ＳＰＡ具有与ＩｇＧＦＣ段非特异性结合的生物学特性，这一特性使其在免疫学研究中有重要的作用，根据应用目的不同，ＳＰＡ制剂分为三类：菌体试剂、ＩｇＧ－ＳＰＡ、可溶性纯化ＳＰＡ。本文将介绍这三种试剂的实验室制备方法及ＳＰＡ的ＦＩＴＣ、ＨＲＰ、１２５Ｉ的标记技术。     

兔出血症的研究

从呼和浩特市郊区分离1株兔出血症病毒,命名NM株,对其进行了病毒理化、生物学特性检测,并研究了应用SPA协同凝集试验诊断兔出血症的方法。结果表明,病毒在兔体连续传6代,均出现典型症状及病理变化,是1株毒力稳定的强毒株,病毒粒子在电镜下呈球形,直径30.3nm,无囊膜,边缘有均匀排列的齿状突起,有实芯(占40.6％)和空芯(占59.4％)2种病毒粒子。还有少量形态不一、大小不等的类似病毒的粒子。用冷酚法提取的病毒核酸,经二苯胺显色及紫外扫描,证明为DNA。病毒的蔗糖浮密度为1.192g/ml,对氯仿、乙醚及胰蛋白酶不敏感,耐酸(pH5、pH3)耐热(50℃、56℃、60min)。病毒对人的各型红细胞有高度凝集性。经氯仿、乙醚、酸(pHs、pH3),热(50℃、56℃ 60min)处理后血凝价不降或稍降,经胰蛋白酶处理后血凝价明显降低(降5个滴度)。37℃放置4h,4℃冰箱放置48h血凝价不降,4℃放置4～13d降低一个滴度,15d降2个滴度。兔体血清HI抗体滴度与保护力呈正相关,1∶40以上可以完全抵抗强毒攻击。用内蒙古生物制药厂生产的兔出血症组织灭活苗免疫兔,可以抵抗强毒的攻击。采用原代乳兔肾细胞、Vero及BHK_(21)传代细胞,培养病毒均未成功。应用SPA协同凝集试验诊断兔出血症,特异性和可靠性均好,可作为本病的1种快速诊断方法。     

应用致敏SPA菌体提高CAV/CPV PCR检出率的研究

为消除粪便等病料中的PCR干扰物质 ,提高犬腺病毒与细小病毒 (CAV CPV)联合PCR检出率。根据免疫吸附的原理 ,应用CAV CPV高免血清致敏含A蛋白的金黄色葡萄球菌 ,制成致敏SPA菌体免疫吸附剂 ;以此免疫吸附提取粪便等病料中的CAV/CPV ,然后直接或经 3 5mol/LMgCl2 将所吸附病毒洗脱后再做PCR。结果 8份经电镜负染或HA/HI试验验证为阳性的粪便样品 ,如此处理后进行PCR检测 ,结果均为阳性 ;而直接取粪便离心后用上清进行PCR检测 ,结果均为阴性。表明该法可有效去除待检样品中的PCR干扰物质 ,提高PCR的检出率。     

四川省一些实验动物养殖场SPF大鼠和小鼠肠内容物中金黄色葡萄球菌的检测

调查四川省一些实验动物养殖场的实验动物中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)携带情况,找出传播途径和进化规律,分析其污染原因,为保障实验动物质量提供技术支撑。按照GB/T 14926.14-2001《实验动物金黄色葡萄球菌检测方法》对2011年-2017年四川省部分实验动物中SA进行检测,对分离的SA菌株进行PCR耐药基因mecA检测,并应用金黄色葡萄球菌A蛋白(Staphylococcus protein A,SPA)和脉冲场电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)进行分子分型。结果显示,2011年-2017年共从7家实验动物养殖场采集并完成370只实验动物中SA的检测,共检出SA 31株,总分离率为12.16%,且均从SPF大鼠中分离所得。31株SA的mecA基因均为阴性。SPA可分成5个型别,其中T2360为优势型别,PFGE型别有10个带型。四川省养殖实验动物中仅SPF大鼠携带SA,不同年份检出SA基因型别基本不同,不同养殖场同一年检出的SA具有相同基因型,说明不同养殖场中的SA可能来自同一污染源,应加强SPF大鼠监控,以确保实验动物的质量。     

SPA/SPG融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达

葡萄球菌A蛋白（SPA）和链球菌G蛋白（SPG）的IgG结合区编码基因融合后，克隆到大肠杆菌表达载体PGEX，SPA／SPG融合蛋白（SPAG）得到高效表达。可溶性SPAG～GST产物可被谷胱甘肽亲和柱一次性纯化。用琼扩和ELISA试验测定了表达产物与不同种属动物血清反应的性能。SPAG—GST与所有SPA、SPG各自反应的动物IgG结合，对小鼠IgG的反应优于SPA或SPG。在所测试的23种动物血清中，融合蛋白与大部分哺乳动物Ig反应。     

基于近红外高光谱成像技术鉴别杂交稻品系

种子的筛选和鉴别是农业育种过程中的关键环节。该文基于近红外高光谱成像技术(874~1 734 nm)结合化学计量学方法以及图像处理技术实现杂交稻种的品系鉴别及可视化预测。采集了3类不同品系共2 700粒杂交水稻的高光谱图像,用SPXY算法,按照2∶1的比例划分建模集和预测集。基于水稻样本的光谱特征,采用主成分分析(PCA)方法初步探究3类样本的可分性。采用连续投影算法(SPA),提取出7个特征波长:985.08、1 106、1 203.55、1 399.04、1 463.19、1 601.81、1 645.82 nm。基于特征波长和全波段光谱,建立了偏最小二乘判别分析(PLS-DA)和支持向量机(SVM)模型。试验结果表明,所建模型判别效果较好,识别正确率均达到了90%以上,其中,SVM模型的判别效果优于PLS-DA模型,基于全谱的判别分析模型结果优于基于特征波长的判别模型。结合SPA-SVM校正模型和图像处理技术,生成样本预测伪彩图,可以直观的鉴别不同品系的水稻种子。结果表明,近红外高光谱成像技术可以实现杂交稻的品系识别及可视化预测,为农业育种过程中种子的快速筛选及鉴定提供了新思路。     

多元联系数集对分析模型在土壤肥力综合评价中的应用

建立了利用多元联系数集对分析方法进行土壤肥力综合评价的新模型,并通过实例研究了评价效果,取得了满意的结果。与属性识别评价法和模糊综合评价法相比,该评价模型严谨,评价结果合理、精细、分辨率高,可为土壤肥力综合评价提供一种简单而适用的评价方法。     

基于集对分析同一度的一种综合评价方法的改进与应用

介绍了一种基于集对分析同一度概念的方案综合评价方法,指出其不足并加以改进．通过其在水稻灌溉制度选择上的应用,说明该方法的简易性和有效性．     

鸡新城疫的SPA协同凝集试验快速诊断技术

过去对鸡新城疫的确诊主要是分离病毒、血凝试验（HA）和血凝抑制试验（HI）,虽然有效、准确,但较为费时。近年来确诊方法日益增多,如免疫荧光试验、中和试验、ELSA试验及RT-PCR方法等,但均受仪器或试剂的限制,在基层难以推广应用。因此,很有必要建立一种适合基层的简便快速检测手段,经探索发现应用SPA协同凝集试验可快速检测人工发病组织中的新城疫病毒,并具有较强的特异性和灵敏性,实用方便,易于在基层推广应用。