间接ELISA 与中和试验检测O 型FMDV 疫苗免疫猪血清抗体的比较研究

血清中和抗体滴度的高低,体现了血清对病毒感染的中和能力,是评价疫苗免疫效果的重要指标.对国内3个大型猪场共120头猪的血清样品分别进行O型口蹄疫病毒ELISA和病毒中和试验,并分别比较两种方法的符合率和阳性检出率.结果表明,两种方法的阳性符合率和阴性符合率分别为77.3％和72.2％,总符合率为75％,均能有效检测猪血清中的口蹄疫抗体水平,但是采用间接ELISA检测血清抗体,存在一定比例的假阳性或假阴性.病毒中和试验更适合进行口蹄疫血清学的检测.     

实时荧光技术在鸭坦布苏病毒 RT-LAMP检测方法中的应用

由鸭坦布苏病毒(DTMUV)引起的蛋鸭产蛋急剧下降给我国的养鸭业造成了巨大的经济损失.针对DTMUV E基因保守区域设计一套LAMP引物,利用实时荧光技术建立了DTMUV的实时RT-LAMP病原检测方法.该方法检测RNA的最低检测极限可达到7.8 copies,其灵敏度是普通RT-PCR的100倍,且只能特异性扩增DTMUV的RNA,对其他常见鸭源病毒核酸均无特异性扩增.该方法简单快速、特异性强和灵敏度高,判定结果只需要观察扩增曲线,适用于DTMUV早期感染的诊断、分子流行病学调查和疫情监测.     

携带FMDV…DNA疫苗重组减毒沙门氏菌的构建及其安全性和稳定性研究

为探讨携带FMDV DNA疫苗重组沙门氏菌口服免疫可行性,PCR扩增O型FMDV主要抗原基因VP1,并连接到真核表达载体pIRES,将构建的质粒pIRES-VP1体外转染BHK-21细胞,间接免疫荧光检测VP1基因的表达.通过氯化钙转化法将重组质粒pIRES-VP1转入减毒鼠伤寒沙门氏菌2266,构建2266 (pIRES-VP1)重组菌,并以108、109、1010CFU的剂量口服免疫小鼠,2周后以相同剂量加强免疫,以研究重组菌在小鼠体内的稳定性及安全性,并通过将重组菌进行体外传代,研究重组质粒在体外的稳定性.研究结果表明:108、109CFU剂量免疫小鼠成活率为100％,1010CFU剂量口服小鼠出现扎堆现象,且行动迟缓.重组菌体外连传8代以及免疫小鼠后从脾脏和肝脏分离鉴定表明,重组菌2266 (pIRES-VP1)在体内和体外均具有较好的安全性和稳定性.     

肉猪安全卫生监督的几项关键技术应用与示范

商品肉猪安全卫生监督的有效实行是保障动物健康及动物产品质量安全和公共卫生安全所必须的重要措施.随着对肉食品安全重视程度的提高和相关技术的进步,近几年来,猪肉安全卫生监督技术水平有了很大提升.实践证明,通过病原学监测和血清学监测手段的实施,产销联建监督、远程诊疗与流通监控模式的运行,生猪产销联建、动物卫生可追溯系统及屠宰猪肉的二分体激光灼刻检疫标识系统建设与应用,肉猪安全卫生监督工作水平得到有效地提升.根据笔者多年的应用实践,对现代安全卫生监督关键技术应用包括疫病监测、流通监控与可追溯、产销联检、屠宰检疫等技术等进行总结,以期更好地宣传和推广.     

茶多酚对罗非鱼生长性能、抗氧化功能和非特异免疫指标的影响

对罗非鱼分别饲喂添加0、83、166、333、666 mg/kg茶多酚的基础饲料,研究茶多酚对罗非鱼生长性能、抗氧化物酶活以及非特异性免疫指标的影响。结果表明:饲料中添加166 mg/kg茶多酚可显著提高罗非鱼的生长性能,增重率提高16.99%,特定生长率提高7.72%,且没有增加饵料系数;同时可提高罗非鱼的免疫水平,白细胞吞噬指数比对照组提高97%,血清溶菌酶活力提高51.8%,提高肌肉SOD活性。饲料中添加333 mg/kg茶多酚可提高肝脏的CAT活性。但添加茶多酚并没有提高GSH-Px的活性。     

应用抑制性差减杂交技术构建副猪嗜血杆菌基因组差减文库

为构建副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)有毒力菌株SW124(血清4型)和无毒力菌株H465(血清11型)间的差异表达基因文库,采用抑制性差减杂交技术(Suppression subtractive hybridization,SSH)分析SW124和H465菌株细菌基因组的表达差异,并进行两轮差减杂交和两次PCR扩增,将第2次PCR产物与pMD19-T载体相连,转化大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞并进行文库扩增和蓝白斑筛选,RT-PCR鉴定差异表达文库。结果共获得327个阳性克隆,筛选100个克隆制备质粒进行PCR检测,均扩增出100～2 000 bp大小的片段。差异DNA差减文库的构建为进一步筛选、克隆HPS特异的未知新基因、建立分子鉴别新体系奠定了基础。     

微纳泡三氧(O_3)水对猪流行性腹泻病毒的杀灭作用

为了检验微纳泡三氧(O_3)水(气)农业养殖机产生的臭氧水溶液对猪流行性腹泻病毒的杀灭作用,用该机器制备不同浓度的臭氧水,与一定浓度的病毒混合后作用不同时间,测定臭氧水对病毒的杀灭作用。结果显示,不同浓度的微纳泡臭氧水溶液与猪流行性腹泻病毒混合作用5 min,当臭氧浓度为9.0、4.5 mg/m L时,可100%杀灭猪流行性腹泻病毒;当臭氧浓度为4.5 mg/m L时,作用1~5 min,猪流行性腹泻病毒均100%被杀灭。可见,采用微纳泡三氧(O_3)水(气)农业养殖机制备的臭氧水,对猪流行性腹泻病毒有较好的杀灭作用。     

鸭坦布苏病毒江门株的分离鉴定及其E基因系统进化分析

从2011年江门新会区某养鸭场产蛋下降鸭群中分离出1株鸭坦布苏病毒,命名为JM株。经RT-PCR检测、透射电镜形态学观察及动物回归试验,证明该病毒是引起该场蛋鸭群产蛋下降的病原。对该病毒E基因进行序列对比、进化分析后发现,JM株与我国华东地区最早发生的鸭坦布苏病毒亲缘关系最近,核苷酸相似性达99.1%以上,表明该病毒可能来自华东地区。     

我国猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子演化及与疫苗毒株的比较分析

为了解我国大陆地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的分子演化特点,为PRRS防控提供参考,对GenBank中收录的60株PRRSV ORF5基因和NSP2基因进行序列分析.根据ORF5基因和NSP2基因构建的进化树分析表明,我国毒株主要分为4大亚群,其中亚群1为主要分支,以2006年分离的JXA1株为代表的HP-PRRSV毒株,我国HP-PRRSV可能起源于CH1-a和HB-1 (sh)/2002株,其变异是逐渐演变的过程.目前我国流行的毒株中HP-PRRSV占绝对优势,且与高致病性疫苗株(JAX1和HUN4株等)同源性较高.