仔猪渗出性皮炎的实验室诊断和综合防治

猪渗出性皮炎是由葡萄球菌属细菌引起的一种急性、超急性的高度接触性传染病,该病的主要特征是全身油脂样渗出性皮炎、破溃、结痂,可导致腹水和死亡。本文针对一例猪渗出性皮炎的病例,对其实验室诊断方法、防治措施进行了探讨。     

猪红斑丹毒丝菌GZ株的分离鉴定及序列分析

2013年11月从广州某猪场发生急性败血症死亡的母猪心脏、肺脏、脾脏分离到1株病原菌,经形态学观察、培养特性、生化特性及16SrRNA、spaA基因测序,确定为猪红斑丹毒丝菌,命名为GZ株。结果表明,该菌株对阿莫西林、利福平、庆大霉素、头孢类抗生素高度敏感,对其他药物广泛耐药,对BALB/c小鼠的致死剂量为1.5×108 cfu/mL。测序结果与NCBI收录的猪红斑丹毒丝菌进行Blast比对分析,16SrRNA基因与不同地区分离自人、蛋鸡、猪、白海雕、野猪、野兔、鼠等动物的同源性为95.9%~99.8%。spaA基因与NCBI收录的分离菌株核苷酸同源性为98.9%~99.9%,氨基酸同源性为99.5%,3处发生突变,其中,第36位缬氨酸突变为亮氨酸,第203位异亮氨酸突变为蛋氨酸,第257位亮氨酸突变为异亮氨酸;与1998年和2006年日本1a型Fujisawa株的核苷酸同源性最高,为99.8%,因此确定分离的GZ株为1a血清型。     

猪渗出性皮炎病原的分离鉴定

从疑似渗出性皮炎的哺乳仔猪体内分离到一株细菌,经革兰染色镜检以及TH-16S细菌生化鉴定系统和葡萄球菌16S rRNA、gap基因通用引物鉴定.结果表明,该菌株为葡萄球菌,gap基因的核苷酸同源性为99%.动物试验发现,试验小鼠出现躁动、被毛竖立、精神沉郁,18 h死亡,说明该菌株对小鼠具有致病力.     

亚临床症状猪群中PRRSV和PCV2的感染情况

[目的]了解亚临床症状猪群中PRRSV和PCV2的感染情况。[方法]选择7个有PRRSV和PCV2感染史且有亚临床症状的猪群,通过ELISA和PCR的相结合方法检测其PRRSV和PCV2的感染情况。[结果]ELISA检测结果表明,所有猪场12周龄仔猪PRRSV和PCV2抗体能观察到血清抗体转化。PCR结果表明约3/7的猪场8周龄仔猪PRRSV呈阳性,12和20周龄仔猪PRRSV呈阴性;8~20周龄有不同比例仔猪PCV2呈阳性。[结论]在亚临床症状猪群中PRRSV的感染主要在8~12周龄,而PCV2在8~20周龄都有感染。     

华南地区猪圆环病毒3型感染的分子流行病学调查与分析

为了解猪圆环病毒3型(porcine circovirus 3,PCV3)在我国华南地区的感染情况,从2016年12月到2017年12月期间,从广东、广西、海南、福建、江西和湖南的177家规模化猪场采集1 078份病料,利用PCR技术检测PCV3的流行情况,并对PCV3阳性病料进行全基因组测序分析。结果显示:样品阳性率为29.04%(313/1 078),猪场阳性率为44.63%(79/177);从病料中测得的10株PCV3毒株全基因组核苷酸序列相似性为98.8%~100%,与国内外其他毒株的同源性在98.2%~100%之间;全基因组遗传进化分析显示PCV3遗传进化可以分为PCV3a和PCV3b,其中毒株CHN/HUNAN、CHN/GD-SH和CHN/GD-ZQ属于以美国毒株US/MO2016为代表的PCV3a分支,其余7个毒株属于PCV3b分支。结果表明:PCV3广泛存在于华南地区的猪群中,其基因组在不断进化,对PCV3的流行与致病机理有待进一步研究。     

适合猪流行性腹泻病毒敏感复制的Vero细胞株的克隆及应用

为了有效提高Vero细胞对猪流行性腹泻病毒(PEDV)的易感性,采用有限稀释法将Vero细胞进行克隆,通过荧光定量RT-PCR方法筛选对PEDV敏感的克隆细胞。结果获得了1株对PEDV高度易感的细胞Vero-S,该细胞株接种PEDVGZ株后培养3d,收获的病毒RNA拷贝数为2.1×109copies/μL,明显高于Vero母细胞(3.5×107copies/μL)。将此Vero-S细胞用于PEDV临床样品的分离获得3株PEDV毒株。构建的PEDV敏感复制的Vero-S细胞株比Vero母细胞更适合PEDV的培养。     

我国猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子演化及与疫苗毒株的比较分析

为了解我国大陆地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的分子演化特点,为PRRS防控提供参考,对GenBank中收录的60株PRRSV ORF5基因和NSP2基因进行序列分析.根据ORF5基因和NSP2基因构建的进化树分析表明,我国毒株主要分为4大亚群,其中亚群1为主要分支,以2006年分离的JXA1株为代表的HP-PRRSV毒株,我国HP-PRRSV可能起源于CH1-a和HB-1 (sh)/2002株,其变异是逐渐演变的过程.目前我国流行的毒株中HP-PRRSV占绝对优势,且与高致病性疫苗株(JAX1和HUN4株等)同源性较高.     

猪葡萄球菌脱落毒素多重PCR检测方法的建立与初步应用

根据GenBank已发表的猪葡萄球菌的6种脱落毒素基因序列,设计合成了6对相应的特异性引物,通过特异性、敏感性和重复性试验建立了可行的多重PCR检测方法。用该方法对临床分离到的9株猪葡萄球菌进行检测,均扩增出了与预期大小相符的23SrDNA（662bp）条带;同时,其中6株分别扩增出了EXHA（316bp,2株）、EXHC（525bp,2株）和Shet-A（814bp,2株）基因特异性条带;另外3株均未扩增出任何毒素基因特异性条带,鉴定为无毒力菌株,以上结果与生化鉴定及单一PCR检测测序结果一致。结果表明,本试验所建立的多重PCR方法不仅操作快速方便、节约试验成本,而且具有高度特异性、敏感性和良好的重复性,可用于仔猪渗出性皮炎的诊断和猪葡萄球菌的快速鉴定。     

猪伪狂犬病排毒情况与gE、gB 抗体之间的关系研究

采集猪伪狂犬病野毒阳性场和阴险场各阶段猪群的血清、乳汁、唾液等样品,用ELISA检测血清gE和gB抗体水平,结果显示,阳性场gE总阳性率为56.7%,其中只有哺乳母猪和1周龄仔猪群的gE呈阴性,6~24周龄猪群gE阳性率从52.9%上升至100%,经产和后备母猪群阳性率高达90%~100%;gB总体阳性率为88.8%,母猪群和公猪阳性率达100%,从1周龄仔猪阳性率100%逐渐降至10周龄育肥猪的40%,之后又快速升高到100%。阴性场gE阴性,gB总体阳性率为38.9%,2~12周龄猪群的gB逐渐转阴,14~20周龄猪群阳性率在20%~75%之间,母猪和公猪群gB阳性率达100%。用RT-PCR检测样品中的核酸,阳性场中脐带血的阳性率最高、达到80%,之后是初乳、为33.3%,其他拭子样品带毒率较低、0.55%~6.21%不等,阴性场样品均未扩增出gE基因片段。研究结果说明,阳性场与阴性场相比,PRV带毒、排毒途径多样,以母猪垂直传播为主,PRV排毒不仅与gE抗体存在相关性,还对母源抗体和免疫抗体产生干扰,表现在母源抗体和免疫消退期gE和gB抗体异常升高。     

2010—2013年华南地区猪流行性腹泻病流行情况调查及防控效果

2010年底至今,华南地区暴发了严重的高死亡率猪流行性腹泻病(PED),为了解该地区发病猪场PEDV的感染情况,应用PED胶体金检测试剂盒和RT-PCR检测方法测定了不同地区60家发病猪场的粪便样品.结果显示,60个猪场中,PEDV阳性率为100％,不同规模猪场平均死亡率为76.87％;该病一年四季均可发生,但冬春季节高发;采取免疫组织灭活苗和返饲方法在一定程度上能够有效控制PED的发生和流行.