动物产品生物源性污染及其快速检测技术研究进展

在兽医领域,有许多致病菌可引起严重的人畜共患病,其中一些还是当今世界引起食物中毒的重要病原体,因而在公共卫生领域具有重要意义。伴随着我国国民经济的发展,动物产品的消费量在增加,随之而来的因动物产品所引起的食物中毒病例也不断增加,严重地威胁着人们的身体健康。因此,建立一套快速、准确、简便的检测动物产品中致病菌的方法已成为我国卫生部门的当务之急。1动物产品中生物源性污染的危害性我们把与食品污染有关的微生物称之为食源性病原体。常见的食源性病原体主要有:沙门氏菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、肉毒梭菌、大肠杆菌…     

猪呼吸道疾病综合征

猪呼吸道疾病综合征是一种多因素引起的呼吸道疾病的总称,它是由病毒、细菌、环境应激和猪体免疫力低下相互作用造成的。当前该病发生的特点:1.由于猪种、饲料的进步,应激状态增强了猪的易感性;2.混合感染增多;3.免疫缺陷疾病增加;4.疫苗的作用有限;5.细菌抗药性增强;6.寄生虫病危害增强。病原原发性感染疾病包括由猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪流感病毒、猪呼吸道冠状病毒所致的病毒性疾病和细菌性疾病,如猪气喘病、传染性胸膜肺炎和传染性萎缩性鼻炎。继发感染疾病包括猪肺疫、猪链球菌病、猪副伤寒、副猪嗜血杆菌病等。防…     

鸡毒霉形体S6株的致弱研究

鸡毒霉形体（ＭＧ）中毒株Ｓ６在固体平板上的３次克隆后，在无细胞培养上基上传１００代以上进行致弱培养，用ＭＧＳ６Ｆ１０８株培养物在雏物和ＳＰＦ鸡胚上作６次回归感染，证明ＭＧＳ６Ｆ１０８不返强，通过气管环培养，纤毛运动损伤试验及对鸡点眼，滴鼻，工胸气囊注射不同代培养物（Ｆ１０８，Ｆ１４３，Ｆ１２１，Ｆ１５０，Ｆ１５３）检查气囊病变和病原体再分离，结果证明Ｆ１０８以上代次的菌株低毒，安全，且有较强的免疫     

猪肺炎支原体竞争定量 PCR检测方法的建立及初步应用

[目的]本试验旨在探索一种对猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae）培养物中的支原体进行快速检测的竞争定量 PCR方法。[方法]设计一对Mhp特异性引物,检测Mhp培养物;又根据支原体种属保守基因序列设计一对引物,通过酶切缺失法构建竞争模板,其携带与目的片段相同的引物结合区。[结果]以一系列稀释的竞争模板的对数值为横坐标（X轴）,竞争模板和目标模板扩增产物的光密度比值的校正值的对数值为纵坐标（Y轴）绘制标准曲线,根据 Y=0所对应的竞争模板的量推算求得支原体的拷贝数。以变色单位的对数值为 X轴,支原体的拷贝数为 Y轴,绘制出标准曲线,两者之间高度相关。[结论]成功建立了一种快速测定 Mhp培养物中支原体量的竞争PCR方法。     

混合感染背景下的猪气喘病控制

混合感染背景下的猪气喘病较难控制,介绍了猪气喘病的发病特点,常用药物的敏感度评价、疫苗效果评价和猪场猪气喘病的检查检测方法,结合作者实际经验强调了饲养管理要点,指出了种猪场净化猪气喘病的方法步骤,为混合感染下控制猪气喘病提供参考。     

猪细菌性呼吸系统疾病的变化与防控

广泛发生的猪呼吸系统疾病综合征（PRDC）是多种细菌为主的病原混合感染形成的高死亡率疾病。高温季节尤其严重,给养殖场造成很大经济损失。猪肺炎支原体、猪副嗜血杆菌、链球菌、猪巴氏杆菌、沙门氏菌等是主要的原发性元凶,蓝耳病病毒、圆环病毒、流感病毒、霉菌毒素作用也不可忽视,细菌性呼吸道病控制重点在环境控制、猪场管理和容易控制的细菌病优先控制。     

猪肺炎支原体 P65蛋白的单克隆抗体的制备

P65蛋白是猪肺炎支原体的主要免疫优势蛋白,与其他支原体无交叉反应,常作为猪肺炎支原体检测的靶蛋白。本实验应用原核表达的重组 P65蛋白免疫小鼠,用 Mhp全菌蛋白和P65蛋白筛选,制备了1株特异性单克隆抗体3G12。鉴定结果表明,该株单克隆抗体可与 P65蛋白和 Mhp全菌蛋白反应,采用间接 ELISA法测得3G12细胞培养上清与P65蛋白反应抗体的效价为1∶12800,与全菌蛋白反应抗体的效价为1∶3200;3G12腹水与P65蛋白反应的抗体效价为1∶4000000以上,与168全菌蛋白反应的抗体效价为1∶20000以上,细胞经长期体外培养和冻存后复苏能稳定分泌抗体。本研究成功获得到1株针对 P65和Mhp全菌的单克隆抗体,为猪肺炎支原体致病机制和检测方法的进一步研究提供了基础。     

猪支原体肺炎净化研究进展

猪支原体肺炎是由猪肺炎支原体引起的一种严重危害养猪业生产的传染病,该病传播迅速,且一旦侵入就难以清除,控制和净化该病已成为世界养猪生产所面临的挑战。世界各国都采取了各种不同的措施净化此病,也取得了一定的成效。本文列举了美国,欧洲各国及中国猪支原体肺炎净化成功例子及经验,并加以总结归纳,为国内猪支原体肺炎的净化提供参考。     

高渗溶液条件下猪肺炎支原体形态和活性变化的研究

为研究高渗溶液对猪肺炎支原体(Mhp)形态、大小,以及活力的影响。Mhp经终浓度为1.8% NaCl的高渗溶液分别作用1、2、4、6、8 min后,分别进行染色镜检、粒径分析仪测定粒径、CCU测定和PCR鉴定。结果表明：在高渗溶液作用不同时间后,从2 min开始,Mhp皱缩变圆,且直径变小,菌体数量也快速变少至消失;测定的终CCU降低了一个梯度,且时间延长了1天;在作用不同时间后的样品中,PCR均能扩增出Mhp目的条带。经终浓度为1.8% NaCl作用1~6 min,Mhp的形态大小发生了变化,且具有活性,这将为Mhp经肌肉注射进入血液循环研究和猪支原体肺炎活疫苗的新免疫途径研究提供参考数据。     

新型鹅黄病毒JS804毒株的分离与鉴定

2010年4月至11月,江苏等地鸭、鹅发生了一种以产蛋率、采食量显著下降,出现脑炎样神经症状为特征的传染病.对发病鹅进行剖检观察,鸭胚尿囊腔途径接种发病鹅病料分离病原,电镜观察病毒粒子.对健康鹅接种分离病毒进行动物回归试验.在病毒核酸背景未知的情况下,应用非序列依赖性单引物扩增法结合DNA酶处理(DNase-sequence independent single primer amplificmion,DNase-SISPA)对病原基因进行扩增,并在此基础上设计了1对特异性引物对病毒基因进行PCR扩增.剖检结果发现病鹅的脑膜、肺脏、肝脏、心脏、卵巢等多器官出血,脾脏肿大坏死.含毒鸭胚尿囊膜超薄切片电镜观察显示:病毒粒子直径为50～60 nm.动物回归试验成功复制出该病并分离到病毒.应用DNase-SISPA方法发现了3个病毒相关基因片段,经序列比对分析,与黄病毒属(Flavivirus)坦布苏病毒(Tembusu virus)基因序列有很高的同源性,分别为96%、88%、93%.据此设计特异性引物扩增出一段985 bp基因片段,该片段与黄病毒属坦布苏病毒E基因的核苷酸同源性为91%,氨基酸同源性为97%.将分离的鹅黄病毒毒株命名为Goose/Jiangsu/804/2010(简称JS804).研究结果表明:此次鸭、鹅新发疫病的病原为一种新的黄病毒.