抗菌肽CJH缓解脂多糖对仔猪消化性能的影响

试验旨在研究抗菌肽CJH对由脂多糖(LPS)导致的饲料中营养物质消化率及肠道消化酶活性降低的影响。试验将18头28日龄、体重相近的健康屯昌公猪随机分为空白对照组、LPS组和CJH+LPS组,其中LPS组和CJH+LPS组在试验第2和14 d腹腔注射LPS,CJH+LPS组在试验第2、6、10、14 d注射抗菌肽CJH,其他各组均注射等量生理盐水,试验期14 d。结果表明:LPS组与CJH+LPS组和对照组的粪样相比在干物质、粗脂肪和粗蛋白含量差异显著(P0.05)。CJH+LPS组与对照组仔猪胰腺及小肠消化酶活性差异不显著(P0.05),而LPS组相较于其他组均显著降低(P0.05)。结果提示,抗菌肽CJH对由LPS引起的仔猪消化性能降低有明显的改善作用。     

虾青素对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应的影响及机制

【目的】研究虾青素(AST)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症反应的影响及作用机制,为将虾青素应用于炎症治疗奠定理论基础。【方法】采用不同浓度梯度的脂多糖及虾青素对RAW264.7细胞进行不同时间段的处理,通过MTT法确定最佳处理浓度和时间,对细胞进行最佳处理后,用ELISA法、荧光定量PCR技术和Western blot法分别检测细胞炎症因子的分泌量、mRNA相对表达量和蛋白相对表达量。【结果】100μmol/L虾青素和2μg/mL脂多糖处理3 h的RAW264.7细胞活力处于峰值。与对照组相比,脂多糖组RAW264.7细胞中TNF-α、IL-6和Caspase-1的分泌量分别降低了12.83%、9.66%和20.80%(P0.05),脂多糖对于TLR4/MyD88/NF-кB通路相关蛋白表达有促进作用,其中,TLR4和NF-кB p65蛋白相对表达量分别提高了195.40%和226.95%(P0.05);与LPS组相比,AST+LPS组中虾青素对炎性因子的分泌及mRNA表达有抑制作用,TLR4、MyD88和NF-кB p65蛋白相对表达量降低了54.99%、45.70%和28.20%(P0.05)。【结论】虾青素预保护能抑制TLR4/MyD88/NF-кB通路相关蛋白的表达,进而缓解脂多糖刺激RAW264.7细胞产生的炎症反应。     

复合植物精油对脂多糖诱导的断奶仔猪免疫应激的影响

试验旨在研究复合植物精油（OCT）对脂多糖（LPS）诱导的断奶仔猪的免疫应激的影响。试验选取28日龄左右的杜×长×大三元杂交仔猪，随机分成3个处理组：对照组（基础日粮，注射生理盐水），LPS组（基础日粮，注射LPS），OCT组（基础日粮+50 mg/kg OCT，注射LPS）。每组8个重复，每个重复1头猪。于试验第21天注射LPS（100 μg/kg体重）或等体积的生理盐水，注射3 h后前腔静脉采血进行白细胞分类计数；6 h后屠宰，取胸腺、脾脏，-80℃保存，用于测量胸腺、脾脏免疫相关基因白介素-4（IL-4）、白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、核因子（NF-κB）以及转录相关基因转录激活因子3（STAT3）的基因相对表达量。结果表明：①与对照组相比，LPS刺激降低了仔猪血液中白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞及嗜酸性粒细胞数量（P<0.05）；与LPS组相比，日粮中添加OCT提高了白细胞的数量（P<0.05）；②与对照组相比，LPS刺激上调了脾脏、胸腺IL-6、STAT3 mRNA水平（P<0.05），下调了脾脏IL-4、TNF-α及胸腺IL-4、TNF-α、NF-κB mRNA水平（P<0.05）；与LPS组相比，添加OCT下调了脾脏、胸腺IL-6、STAT3 mRNA水平（P<0.05）；上调了胸腺IL-4、IL-10、TNF-α、NF-κB的mRNA水平（P<0.05）。综合上述结果，LPS诱导发生了仔猪免疫应激，OCT在一定程度具有缓解作用。     

白藜芦醇对脂多糖诱导草鱼肾脏细胞炎症的抑制作用

为评价白藜芦醇(resveratrol)对脂多糖诱导损伤草鱼(Ctenopharyngodon idella)肾脏细胞(CIK)的保护作用,本研究通过脂多糖(LPS)诱导细胞炎症损伤,测定和分析白藜芦醇对CIK细胞抗氧化因子活性和抗氧化、炎症相关基因表达变化的影响。结果表明,与对照组相比,LPS处理导致CIK细胞活力降低(P<0.05),乳酸脱氢酶(LDH)活性升高(P<0.05),降低了细胞内过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,并导致还原型谷胱甘肽(GSH)浓度降低(P<0.05)和丙二醛(MDA)含量升高(P<0.05)。此外,LPS处理能引起CIK细胞的CAT、TNF-α、IFN-γ、IL-1基因表达显著上调(P<0.05),而对IL-10和SOD基因的转录表达无显著影响(P>0.05)。通过向培养基中添加白藜芦醇(4μg/mL)可以显著减弱LPS对CIK细胞造成的损伤,维系细胞抗氧化能力,抑制TNF-α等炎症相关基因的表达(P<0.05),促进CAT基因的表达(P<0.05)。研究认为白藜芦醇对LPS造成的CIK细胞损伤有明显的干预作用,主要原因可能是由于白藜芦醇对CIK细胞的抗氧化能力的改善以及对促炎因子表达的抑制。本研究可为白藜芦醇应用于鱼类炎症、氧化损伤相关疾病的防治提供理论依据。     

产低毒性脂多糖大肠杆菌J5基因重组株的构建

细菌脂多糖(LPS)对宿主细胞具有一定的毒性,但经修饰后的单磷酸类脂A(MPLA)却是一种无毒性的高效免疫佐剂。选择天然O抗原不完全的大肠杆菌J5疫苗株为出发菌株,利用λ-Red同源重组技术导入外源弗朗西斯菌(Francisella novicida)lpxE基因,缺失大肠杆菌lpxM基因。结果显示,J5ΔlacI::lpxEΔlpxM基因重组株的LPS鲎试剂活性较DH5α和J5原菌显著降低;对4周龄的ICR小鼠腹腔注射LPS提取物,重组菌和PBS组的小鼠体征及肝脏切片均正常。同时,腹腔注射大肠杆菌J5和DH5α的小鼠被毛凌乱、精神抑郁、肝脏细胞肿大,发生炎性浸润,有明显的毒性反应。以上结果说明,J5重组菌的LPS已经区别于原菌,是低毒性的MPLA产物。上述重组株的成功构建,能为生产廉价的兽用MPLA免疫佐剂奠定工作基础。     

鸡白痢菌脂多糖的免疫学研究

用醋酶染色法、ELISA法、被动保护试验等手段与方法,监测了ANAE阳性T淋巴细胞抗LPS抗体产生的情况及其保护性.试验说明,在LPS免疫后7 d T淋巴细胞明显增多;于14～21 d后抗LPS抗体逐渐产生;抗LPS抗体有较好的保护性,LPS是主要的保护性抗原,LPS可激活细胞免疫和体液免疫.     

牛磺胆酸对PD98059介导的NR8383细胞TNF-α的影响

研究牛磺胆酸(taurocholic acid,TCA)对NR8383细胞分泌的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响。采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative,qPCR)法测定TCA对细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated protein kinase,ERK1/2)抑制剂(PD98059)介导的脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的TNF-αmRNA水平的影响,采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immune-sorbent assay,ELISA)测定TCA对PD98059介导的NR8383细胞分泌的TNF-α蛋白水平相对表达量的影响。TCA可显著降低LPS诱导的TNF-α基因、蛋白水平含量(P0.05),PD98059可显著降低TNF-α的表达量。TCA通过影响ERK1/2通路调节LPS诱导的NR8383细胞TNF-α基因、蛋白水平含量。     

硒对脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤的保护作用

本试验旨在研究硒(Se)对脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)氧化损伤的保护作用及其机制。将贴壁生长的第3代BMEC随机分为8组,每组6个重复,每个重复1个培养孔。对照(CON)组采用基础培养液,不添加Se和LPS,培养30h;LPS组和6个Se保护组在基础培养液中分别添加不同水平的Se(0、10、20、50、100、150和200nmol/L),培养24h后,加入1μg/mL LPS作为外源刺激作用6h。结果表明:1)与CON组相比,LPS组BMEC的相对增殖率显著下降(P0.05),谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、硫氧还蛋白还原酶(TrxR)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和总抗氧化能力(T-AOC)均显著下降(P0.05),GPx1和TrxR1的基因和蛋白表达量、硒蛋白P(SelP)含量也显著下调(P0.05);而LPS组的一氧化氮(NO)含量,诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性及其基因和蛋白表达量,炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)和白介素-6(IL-6)含量及其基因表达量,活性氧(ROS)活性,丙二醛(MDA)含量均显著升高(P0.05),丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关因子p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、c-Jun氨基端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的基因表达量呈相似变化。2)与LPS组相比,Se保护组随Se添加水平的增加,相对增殖率,T-SOD、CAT、GPx、TrxR活性,T-AOC,GPx1、TrxR1基因和蛋白表达量均呈先升高后下降趋势;而NO含量,iNOS活性及其基因和蛋白表达量,炎症因子TNF-α、IL-1、IL-6含量及其基因表达量,MAPK信号通路相关因子ERK1/2、JNK、p38 MAPK的基因表达量,ROS活性,MDA含量呈先降低后升高的趋势;以20~100nmol/L Se保护效果较好,综合来看50nmol/L Se保护效果最好。结果提示,Se可提高BMEC的抗氧化功能,对LPS引起的细胞氧化损伤具有保护作用,其机制是Se增强TrxR活性从而抑制MAPK信号通路的激活,最终减少NO的大量释放,但过高水平的Se会对细胞造成损伤。培养液中20~100nmol/L Se的保护作用较好,尤其以50nmol/L Se效果最好。     

抗菌肽对脂多糖导致的仔猪肝脏氧化应激的影响

试验旨在研究给药抗菌肽CJH对由细菌脂多糖导致的仔猪肝脏氧化应激的影响。试验选用体重、日龄相近的健康屯昌仔猪(28日龄,♂)18头,随机分为3组,每组6个重复。分别为对照组、LPS组和CJH+LPS组,其中LPS组和CJH+LPS组在试验第2 d和第14 d腹腔注射LPS,CJH+LPS组在试验第2、6、10、14 d注射抗菌肽CJH,其他各组均以注射等量生理盐水替代,试验为期14 d。结果表明:与对照组相比,LPS组免疫器官指数显著降低(P0.05),而CJH+LPS组与对照组差异不显著,与对照组相比,LPS组肝脏形态受损明显,GSH-Px、T-SOD、CAT活性显著降低(P0.05),MDA浓度及炎性因子TNF-α水平极显著升高(P0.01),IL-1β、IL-6水平显著提高(P0.05),而CJH+LPS组改善了肝脏病理形态,显著缓解了LPS导致的上述指标的异常升高,且与对照组相比均达到差异不显著水平。结果提示抗菌肽CJH可能通过缓解炎症,对LPS导致的肝脏氧化应激具有明显的改善作用。     

谷氨酸对脂多糖刺激断奶仔猪肠道能量代谢的影响

本试验旨在研究谷氨酸(Glu)对脂多糖(LPS)刺激断奶仔猪肠道能量代谢的影响。选择24头断奶仔猪分为4个组,分别为对照组、LPS组、LPS+1.0%Glu组和LPS+2.0%Glu组,每组6个重复,每个重复1头猪。于试验第28天,试验组猪注射100μg/kg BW LPS,对照组注射等量的生理盐水,4 h后屠宰,取肠道样品待测。结果表明:1)与对照组相比,LPS刺激导致断奶仔猪空肠三磷酸腺苷(ATP)、腺苷酸池(TAN)含量和能荷(EC)显著降低(P0.05),一磷酸腺苷(AMP)/ATP值显著升高(P0.05);与LPS组相比,LPS+2.0%Glu组显著提高了空肠ATP、二磷酸腺苷(ADP)和TAN含量(P0.05)。2)与对照组相比,LPS刺激导致断奶仔猪回肠柠檬酸合成酶和α-酮戊二酸脱氢酶系活性极显著降低(P0.01),空肠α-酮戊二酸脱氢酶系活性有降低趋势(P=0.092);与LPS组相比,除LPS+1.0%Glu组回肠柠檬酸合成酶活性显著降低(P0.05)外,Glu对空肠和回肠三羧酸循环关键酶活性无显著影响(P0.05)。3)与对照组相比,LPS刺激导致空肠过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC1α)及回肠沉默信号调控因子1(Sirt1)和PGC1α的mRNA表达量极显著降低(P0.01);与LPS组相比,LPS+2.0%Glu组有提高空肠PGC1α(P=0.067)和回肠Sirt1(P=0.053)mRNA表达量的趋势,LPS+1.0%Glu组有提高回肠Sirt1 mRNA表达量的趋势(P=0.070)。由此可见,Glu可以改善LPS刺激导致的肠道能量损耗状态。